梁浩
- 作品数：36 被引量：35H指数：4
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 牛和小鼠胎儿成纤维细胞混合制成的饲养层对牛胚胎干细胞的体外培养被引量：1
- 2012年
- 【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1﹕1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合;③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。【结论】小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1﹕1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好。
- 丛姗王瑞温建勋郝斐李硕梁浩刘东军
- 关键词：胚胎干细胞成纤维细胞
- 融合表达人白细胞介素-2（hIL-2）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的逆转录病毒载体的构建
- 本研究的主要目的是构建融合表达人白细胞介素-2(hlL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体。首先设计合成一段150bp的接头序列，将其插入载体pUC57的多克隆位点中，称为pUC-MCS。酶切质粒pUC...
- 梁浩
- 关键词：逆转录病毒载体增强型绿色荧光蛋白酶联免疫测定法
- 文献传递
- 一种基于CRISPR/Cas9技术介导山羊Tβ4基因定点敲入的方法
- 本发明利用CRISPER‑Cas9系统介导完成山羊Tβ4基因定点敲入，其是依据山羊的CCR5基因序列，构建基于CRISPER‑Cas9系统的gRNA表达载体及Tβ4同源重组载体。然后将优化后的CRISPER‑Cas9载体...
- 李晓聪梁浩郝斐潘伟王志钢刘东军
- 文献传递
- 人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的克隆及在HeLa细胞中表达的研究
- 2009年
- 目的:构建人脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad gene,fhit)基因与报告基因egfp的双顺反子表达载体及融合表达载体,研究fhit基因过表达对HeLa细胞生长及凋亡的影响。方法:根据已知fhit基因的mRNA序列,RT-PCR得到493bp的cDNA序列,将其构建到pMD18-T中,筛选目的片段插入正确的重组质粒,经限制性内切酶切割,回收目的片段分别插入双顺反子表达载体pIRES2-EGFP和融合表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中。再以脂质体介导转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的克隆,分别通过基因组PCR、RT-PCR、免疫细胞化学及TUNEL法在DNA、RNA和蛋白质水平检测其表达情况。结果:转基因细胞基因组PCR获得493bp片段,证明目的基因已整合到细胞基因组中;RT-PCR检测其在RNA水平得到表达;免疫细胞化学及TUNEL法分析表明fhit基因在HeLa细胞内实现了稳定遗传与表达。结论:实验证明fhit基因过表达可有效促进HeLa细胞的凋亡。
- 刘慧梁浩刘明秋扈廷茂
- 关键词：FHIT过表达HELA细胞凋亡
- 基因敲除技术在大型家畜中的应用被引量：4
- 2014年
- 基因敲除作为一种重要的生物技术,被广泛应用于当今生物学、医学研究中,并逐渐扩展到农业、畜牧业和兽医学等研究领域。与传统的同源重组介导的基因敲除相比,近几年发展起来的几种新技术包括RNA干扰(RNAi)、锌指核酶技术(ZFNs)、转录激活子类似的效应子核酶技术(TALENs)和成簇的规律间隔性短回文重复序列(CRISPR/(Cas)等,能够在复杂的基因组和RNA水平引入精细的改变或基因沉默。这些技术在大型家畜的疾病防治、性状改良等研究中发挥着积极的促进作用。随着这些技术的不断发展,以及新技术的开发和应用,会有更多的基因敲除手段应用到生产实践中,迅速地推动畜牧业的发展。本文主要针对RNA干扰(RNAi),锌指核酶技术(ZFNs),转录激活子类似的效应子核酶技术(TALENs)3种新兴技术在猪、牛、羊等大型家畜中的应用进行简要论述。
- 赵宇航梁浩刘明秋李雪玲
- 关键词：RNAI家畜
- 构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞被引量：1
- 2011年
- 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。
- 王玮袁建龙金永朱兵岳群华梁浩郭旭东刘东军仓明
- 关键词：卵泡抑制素
- CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法
- 本发明涉及CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，其是根据羊的MSTN基因序列，构建基于CRISPER-Cas9系统的gRNA表达载体，并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且可以...
- 仓明张驹梁浩聂永伟梁宏宇崔梦兰刘东军
- 文献传递
- 白绒山羊性控胚胎生产及移植应用研究初探被引量：8
- 2009年
- 应用X性控冷冻精液对超排供体白绒山羊进行人工授精,生产性控胚胎并进行鲜胚移植。结果发现,①用性控冻精和鲜精输精的供体母羊,平均卵子回收数分别为13.3和12.5枚,其中性控冻精组受精卵比例为29.6%(55/186),极显著低于鲜精组94.0%(281/299)的比例(P<0.01);②性控胚胎和普通胚胎移植受体母羊产羔率分别为42.2%和58.1%,二者差异极显著(P<0.01);③性控胚胎移植受体母羊所产羔羊雌性所占百分数为100%,极显著高于普通胚胎移植(P<0.01)。表明通过白绒山羊X、Y精子分离、人工授精生产性控胚胎,同时结合胚胎移植技术,可以达到按照生产实际中的意愿得到性别控制子代白绒山羊的目的。
- 王建国李喜和郭旭东钱松晋白春玲仓明杨东山于海泉梁浩旭日干
- 关键词：白绒山羊性别控制胚胎移植
- 一种基于CRISPR/Cas9技术介导绒山羊VEGF基因定点敲入的方法
- 本发明利用CRISPR/Cas9系统介导完成绒山羊VEGF基因定点敲入，其是依据绒山羊的CCR5基因序列，构建基于CRISPR‑Cas9系统的gRNA表达载体及VEGF同源重组载体。然后将优化后的三种载体共同转入绒山羊胎...
- 梁红宇刘东军梁浩呼啸王辉王志刚
- 文献传递
- 牛肌肉生长抑制素基因敲除打靶载体的构建被引量：3
- 2012年
- 【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PLP和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和6.8 kb同源长臂;经过限制性内切酶酶切鉴定,证实两套载体的同源臂分别正确插入到基础载体内。【结论】两套牛MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN构建成功,载体pPLP-MSTN为不含负筛选标记的传统基因敲除打靶载体,载体PⅢ-MSTN为不含负筛选标记的荧光蛋白启动子捕获打靶载体。
- 赵丽华梁浩云亭李荣凤
- 关键词：胎儿成纤维细胞
