杨新科
- 作品数：32 被引量：62H指数：4
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 促血小板生成素的分子生物学研究进展
- 1998年
- 促血小板生成素（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是近年分离的一种造血生长因子，能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和血小板的产生，对维持机体的正常凝血功能有着重要意义。本文拟对其分子生物学研究进展作一综述。１ＴＰＯ的基因克隆与基因结构１９９４年...
- 汪治清杨新科
- 关键词：促血小板生成素分子生物学基因克隆基因结构
- 用逆转录-聚合酶链反应检测海南岛登革热流行区某些动物体内登革病毒RNA被引量：8
- 1998年
- 目的寻找中国海南岛一带登革热疫区，登革病毒潜伏的动物宿主及鉴定其毒株型别。方法采用１－４型登革病毒通用引物，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测海南岛登革热流行区蝙蝠脑细胞，血清和埃及伊蚊的登革病毒ＲＮＡ。结果检测３５例疫区蝙蝠脑细胞，２０例阳性；检测１８例蝙蝠血清，３例阳性；检测三组埃及伊蚊，１组阳性，３组非流行区者都阴性。用４个登革病毒原型株的单克隆荧光抗体技术检测２０例登革病毒ＲＮＡ阳性的蝙蝠脑细胞压印片，１６例为２型株阳性，与ＲＴ－ＰＣＲ检测登革热流行区登革病毒ＲＮＡ阳性蝙蝠脑细胞的阳性符合率为８０００％。用ＲＴ－ＰＣＲ检测非流行区蝙蝠脑细胞登革病毒ＲＮＡ，均为阴性。结论本研究证实蝙蝠是登革病毒的贮存宿主，为登革热流行的有效控制提供了一定重要的线索。
- 张浩燕杨新科李桂英王凤莲王凤莲
- 关键词：聚合酶链反应登革病毒蝙蝠RT-PCR
- Bak基因对Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的调控作用(英文)
- 2000年
- 目的研究Bcl 2基因家族促凋亡蛋白Bak在细胞凋亡细胞周期调控中的作用 ,评价它们作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法采用一种可诱导性表达系统,(MT II调节系统),在外加锌离子(ZnSO4,100μmol/L)的条件下诱导Bak基因表达。以Hela细胞系作为靶细胞 ,获得表达Bak基因的稳定转染子。结果可诱导性Bak基因过表达的Hela细胞出现广泛死亡。TUNEL染色证实细胞核碎片化 ,提示细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示 ,在诱导后24h有19.29 %的细胞发生凋亡且细胞在G1 期明显积聚。结论Bak基因能显著诱导Hela细胞凋亡和细胞周期在G1 期延长。因此 。
- 李江王文亮杨新科于欣欣张杰侯云德
- 关键词：BAK基因HELA细胞细胞周期细胞凋亡肿瘤
- Bak基因诱导P27^(KIP1)基因的过表达使HCC-9204细胞在G_1期停滞被引量：3
- 2001年
- 目的Ｂａｋ基因的过表达能够使ＨＣＣ－９２０４细胞的Ｇ１期延长并导致细胞凋亡，探讨ｐ２７ＫＩＰ１基因是否在这一过程中起重要作用。方法建立Ｂａｋ诱导ＨＣＣ—９２０４细胞凋亡和细胞周期停滞的模型。从Ｂａｋ诱导的凋亡模型中获得Ｐ２７ＫＩＰ１基因并测序。构建ＰＭＤ－ＫＩＰ１可诱导型表达系统并转染 ＨＣＣ－９２０４细胞，获得稳定转染子。 进一步研究ｐ２７ＫＩＰ１对细胞生长和细胞周期的调控作用。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实在这一过程中该基因的表达水平上调。结果在诱导 ４８ ｈ后 ｐ２７ＫＩＰ１基因稳定转染细胞的活力降低 ３５％。在诱导后 ２４ｈ时 Ｐ２７ＫＩＰ１能够使 ＨＣＣ－９２０４细胞在Ｇ１期停滞，累积的细胞增加 ４０％。结论 Ｂａｋ使ＨＣＣ－９２０４细胞的 Ｇ１期延长是通过上调 ｐ２７ＫＩＰ１的表达；可诱导型 Ｐ２７ＫＩＰ１基因的过表达能够诱导 Ｇ１期停滞。
- 李江王文亮于欣欣杨新科侯云德
- 关键词：基因
- 酵母双杂交系统用于TPO分子间相互作用的研究
- 2001年
- 目的 探索促血小板生成素 (Thrombopoietin ,TPO)分子间相互作用及其存在位置。方法 构建了含有不同TPO区段的酵母双杂交系统融合表达质粒 ,转化酵母菌SFY5 2 6 ,分析 β 半乳糖苷酶活性以推测TPO分子间的相互作用。结果 全长TPO pGBT9与全长TPO pGAD42 4、全长TPO pGAD42 4与TPO(N) pGBT9、TPO(N) pGBT9与TPO(N) pGAD42 4之间有相互作用 ,全长TPO pGBT9与TPO(C) pGAD42 4、TPO(N) pGBT9与TPO(C) pGAD42 4、TPO(C) pGBT9与TPO(C) pGAD42 4之间无相互作用。结论 自然状态下TPO在N端结构区可能存在相互作用 ,C端结构域不参与此过程。
- 汪治清杨新科佟玉品侯云德
- 关键词：促血小板生成素酵母双杂交系统相互作用
- 融合蛋白Epo-Tpo(C)的表达及初步活性检测被引量：4
- 2001年
- 目的 进一步研究促血小板生成素Tpo的功能 ,探讨新型Epo的可能性。 方法 构建了融合蛋白Epo Tpo(C)的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达融合蛋白 ,染料亲合柱Blue SepharoseCL 6B初步纯化 ,网织红细胞计数法体内测活并测定了体内半衰期和融合蛋白对大鼠肾衰模型的疗效。结果 初步纯化的融合蛋白体内活性比ELISA结果高 2 0 % ,半衰期为 12h ,比标准Epo长近5 0 % ,对大鼠肾衰模型有良好的疗效。结论 Tpo富糖基化的C端结构域能显著延长Epo的半衰期 ,融合蛋白Epo Tpo(C)
- 汪治清侯云德杨翔佟玉品杨新科
- 关键词：血小板生成素红细胞生成素融合蛋白质类
- β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒（AAV－2）载体的构建及其在哺乳类细胞中的表达
- 1996年
- 以野生型２型人类腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）全基因组载体（ｐＳＳＶ９和ｐＳＳＶ９－ｉｎｔ－）为基础，构建了重组ＡＡＶ载体ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）和ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－），制备ＡＡＶ重组病毒，感染宿主细胞后表达了β－半乳糖苷酶基因。此外，用脂质体转染法将载体导入２９３细胞和Ａ５４９细胞，进行了ＬａｃＺ基因瞬时表达研究。结果显示，重组ＡＡＶ载体（ＰＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋））ＬａｃＺ基因表达的动态变化特点是，转染后表达较早（１２～２４ｈ）出现，并迅速达到高峰值（经２４ｈ），随后较快下降（经４８～７２ｈ）并维持在较低水平。将启动子附近ｉｔｒ结构有差别的上述两载体转染宿主细胞７２ｈ后做表达水平比较，结果ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－）在２９３细胞和Ａ５４９细胞中，ＬａｃＺ表达水平均高于ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）（１．２倍～１．４倍），提示启动子附近ＡＡＶｉｔｒ结构的变异对表达有一定的影响。
- 张桐王文亮王伯云杨新科颜子颖段淑敏候云德
- 关键词：腺伴随病毒基因治疗Β-半乳糖苷酶
- Aptamer核酸药物的研究进展被引量：4
- 2002年
- 汪治清佟玉品杨新科
- 关键词：APTAMER体外筛选
- 在大肠杆菌中高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子被引量：2
- 1995年
- 碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）能促进大多数来源于中胚叶及神经外胚叶细胞的增殖，它对神经再生、创伤愈合、蝾螈断肢及晶体再生等具有促进作用。利用基因工程手段将牛ｂＦＧＦｃＤＮＡ插入到ｐＢＶ２２１高效表达质粒载体中，并使之在大肠杆菌中表达。经ＳｅＰｈａｒｏｓｃ－肝素亲和层析获得重组ｂＦＧＦ纯品。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示两条带，其中１８０００系２１０００降解所致，加入蛋白酶抑制剂可抑制其降解，并经免疫印迹试验和生物活性分析证实均为ｂＦＧＦ。
- 陈惠杨新科刘诚
- 关键词：BFGF基因重组免疫印迹法大肠杆菌
- 我国单纯疱疹病毒Ⅰ型168株糖蛋白D基因的克隆及其在痘苗病毒天坛株中的表达被引量：4
- 1996年
- 将我国单纯疮疹病毒Ⅰ型１６８株基因组ＤＮＡ中扩增出的糖蛋白Ｄ基因，插入痘苗病毒ｐ７．５启动子下游，使其在痘苗病毒天坛株表达。免疫荧光分析表明，产生的重组病毒糖蛋白Ｄ能被运到被重组病毒感染的１４３细胞表面表达，表达的产物经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ鉴定为分子量约５０ｋＤ的多肽。Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ证明重组病毒基因组中整合有ＨＳＶ－１１６８株糖蛋白基因片段，重组病毒免疫家兔后，产生了高滴度的ＨＳＶ特异性中和抗体。
- 杨雄虎尚大庄杨新科段淑敏候云德阮力朱既明
- 关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白D痘苗病毒基因克隆
