杨利恒
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项甘肃省农牧厅生物技术专项甘肃省科技厅科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 奶牛Cathelicidins Bac5基因的克隆、表达及抑菌活性分析被引量：1
- 2012年
- 根据已发表的牛Bac5 mRNA序列设计1对特异性引物,进行RT-PCR扩增,将目的片段定向克隆到原核表达载体PET28a(+),构建原核重组表达质粒PET28a-Bac5,并转化大肠杆菌Rosetta,进行IPTG诱导和SDS-PAGE检测.结果表明:采用RT-PCR技术成功扩增出414bp去信号肽的Bac5基因片段,重组蛋白经ZPTG诱导和SDS-PAGE检测发现,在19ku附近有1条清晰蛋白条带,与理论预测值大小一致;对表达的Bac5重组蛋白(rBac5)处理后进行抑菌活性的初步鉴定结果表明,rBac5对大肠杆菌(CVCC1450)和金黄色葡萄球菌(CVCC545)2种标准菌株和乳房炎乳的3种常见分离菌株均有一定的抑菌活性.
- 杨利恒张勇徐鹏胡俊杰高昭辉薛慧文
- 关键词：奶牛原核表达抑菌活性
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析被引量：3
- 2012年
- 采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性;以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53ku左右;ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上;Western-blot分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应;间接免疫荧光检测发现,豚鼠抗3D蛋白多克隆抗体可与细胞毒天然抗原反应,与阴性对照未见反应.
- 骆继怀杨利恒高闪电独军政常惠芸薛慧文
- 关键词：口蹄疫病毒3D基因非结构蛋白
- 奶牛Cathelicidins抗菌肽Bac5基因的克隆、表达及抑菌活性分析
- 近年来,由于长期乱用和滥用抗微生物药物,使耐药性问题日益严重,增加了动物疾病的防治难度,同时引起了动物产品抗生素残留,严重影响了动物性食品安全。因此,研究和开发新型安全、有效和环保的抗菌药物已迫在眉睫。抗菌肽广泛存在于动...
- 杨利恒
- 关键词：奶牛抑菌活性
- 文献传递
