李庆勇
- 作品数：8 被引量：55H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广东省海洋渔业科技推广专项项目中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 海南罗非鱼无乳链球菌血清型及耐药性研究被引量：19
- 2013年
- 为研究罗非鱼无乳链球菌(S.agalactiae)的血清型与耐药性之间的关系,本研究对2010年～2011年从海南省各地罗非鱼养殖场中分离到的24株病原菌进行常规细菌鉴定,结果显示,病原菌革兰染色阳性、球形、短链状,β溶血,结合16S rRNA基因鉴定确认24株病原菌均为无乳链球菌。PCR法扩增菌株荚膜多糖(cps)基因鉴定其血清型,表明24株无乳链球菌血清型均为Ⅰa型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌株对31种常用抗生素的敏感性,结果表明多数菌株对氨基糖苷类和喹诺酮类药物敏感率低,对强力霉素敏感。对于多数抗生素,2011年分离的菌株敏感率明显低于2010年分离的菌株。本研究表明近两年海南省罗非鱼无乳链球菌血清型与菌株耐药性之间无直接相关关系。该结论为罗非鱼无乳链球菌耐药性监测、血清分型及综合防控提供实验依据。
- 霍欢欢可小丽卢迈新李庆勇高风英朱华平黄樟翰
- 关键词：无乳链球菌耐药性监测血清型罗非鱼分离菌株基因鉴定
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的原核表达及其免疫原性研究
- 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌,可导致水生动物、哺乳动物及人类等患败血症、肺炎及脑膜炎等疾病。无乳链球菌已经成为多种鱼类的主要致病菌,尤其是暖水性鱼类,...
- 李庆勇
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌原核表达免疫原性
- 文献传递
- 罗非鱼无乳链球菌鉴定及基于cfb和16S rRNA基因同源性分析被引量：9
- 2013年
- 为进一步阐明不同宿主不同地区无乳链球菌之间的关系,本研究从细菌形态学、生理生化、16SrRNA和cfb基因等方面,鉴定了2009—2011年广东、海南等地区的25株罗非鱼链球菌病原。同时结合全球不同宿主来源的84株链球菌16SrRNA基因序列,利用Modeltest3.7、MEGA3.0、MrBayes3.0b4进行综合系统发育分析。结果表明:2009—2011年罗非鱼链球菌病原均为无乳链球菌且它们在进化上聚为一个支系,说明2009—2011年广东、海南等地区罗非鱼无乳链球菌病原具有相同的起源。此外,罗非鱼无乳链球菌与法国人源、美国人源、牛源以及日本猪源等无乳链球菌均以高支持率(100)聚在一个支系,说明全球不同宿主来源的无乳链球菌亦具有相同的进化起源,同时也证明了中国罗非鱼无乳链球菌的潜在人畜共患性,这是国内首次对不同宿主无乳链球菌进行系统发育研究。
- 可小丽卢迈新李庆勇霍欢欢高风英朱华平
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌系统发育
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的克隆及原核表达质粒构建被引量：4
- 2013年
- 为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框(ORF)。结果表明,该基因包括3 405 bp的ORF,可编码1 134个氨基酸,与已报道的人源无乳链球菌ScpB的氨基酸同源性达99.74%。利用生物信息学软件DNAstar、Clustal X 2.0和MEGA 5.05及在线分析工具ExPASy ProtParam、NCBIProten blast及Conserved Domain等对推导的氨基酸序列进行分析,结果显示罗非鱼无乳链球菌scpB基因编码的氨基酸序列含有3个催化三联体(catalytic triad)位点、7个假定活性位点(putative active site)、2个特异位点(spe-cific hits),以及4个超家族结构(2个肽酶超家族结构Peptidases-S8-S53 superfamily、1个类纤连蛋白超家族结构DUF1034 superfamily和1个鞭毛钩蛋白超家族结构FlgD-lg superfamily);并且该氨基酸序列有多个抗原表位,推测ScpB蛋白应具有较强的免疫原性,可作为候选的蛋白疫苗成分。将该片段插入原核表达载体pET32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆,经PCR、酶切及测序鉴定表明成功构建原核表达载体pET32a(+)/scpB。
- 李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌克隆原核表达质粒
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的原核表达及免疫原性研究
- 无乳链球菌是我国罗非鱼养殖的重要致病菌,C5a肽酶是该菌重要的保护性抗原。本研究构建了无乳链球菌C5a肽酶基因的重组表达质粒pET32a(+)/C5a,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达,表达的重组...
- 李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌原核表达免疫原性
- 文献传递
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶(ScpB)的原核表达及其免疫原性被引量：11
- 2014年
- 以尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）为鱼体样本，克隆了罗非鱼源无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）scpB基因，构建了原核表达质粒pET32a（＋）-scpB，转入大肠杆菌BL2I（DE3）后，IPTG诱导表达，表达的重组蛋白经镍离子金属螯合柱纯化及超滤管浓缩后，进行SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。纯化的重组蛋白以不同剂量（1μg/g、3μg/g、5μg／g）免疫尼罗罗非鱼后，每周检测各实验组鱼体血清非特异性免疫指标[溶菌酶活性、超氧化物歧化酶（SOD）活力]及抗体水平变化情况，并于免疫4周后以4倍LD50的剂量对其进行人工攻毒。结果显示，该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在；对尼罗罗非鱼的相对免疫保护率为69．66％-89．00％，其中5pg儋组的相对保护率最高；受免鱼体血清中溶菌酶活性、SOD活力和抗体水平较对照组有极显著提高（P〈0．01），结果表明，重组蛋白ScpB具有较强的免疫原性和保护作用。本研究旨在为GBS多肽疫苗的研制奠定基础。
- 李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英刘志刚
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌原核表达免疫原性
- 低温对罗非鱼基因组DNA甲基化的影响被引量：20
- 2013年
- 以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼耐寒品系为实验材料,采用DNA甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)分析方法从全基因组水平上探讨了低温适应对罗非鱼DNA序列中CCGG位点的甲基化水平的影响。结果显示,选用的18对选择性扩增引物共检测到849个位点。耐寒品系检测到的位点数为411个,对照组为438个,其中发生甲基化的位点数分别为72和104个,总甲基化率分别为17.52%和23.74%;全甲基化位点分别为37个和65个,全甲基化率分别为9.00%和14.84%;半甲基化位点分别为35个和39个,半甲基化率分别为8.52%和8.90%。结果分析表明,尼罗罗非鱼耐寒品系的总甲基化水平、全甲基化水平和半甲基化水平较对照组均有一定程度的下降。与对照组相比,尼罗罗非鱼耐寒品系基因组DNA甲基化总体水平下降了6.22%,其中以全甲基化位点变异为主,其下降幅度比例明显,为5.84%。由此可见,经过连续多代的低温胁迫可导致尼罗罗非鱼DNA甲基化水平发生改变,发生了去甲基化反应,表现为基因组甲基化程度降低的特征,说明了DNA甲基化与罗非鱼抗寒性反应密切相关。
- 朱华平卢迈新黄樟翰高风英可小丽刘志刚李庆勇刘玉姣
- 关键词：尼罗罗非鱼DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性
- 一种便于更换滤网的鱼苗筛选装置
- 本新型公开了一种便于更换滤网的鱼苗筛选装置，涉及鱼苗筛选领域。本实用新型包括筛选箱外壳，所述筛选箱外壳的正面中部设置有条形通孔一，所述条形通孔一内活动设置有滤板一，所述条形通孔一的底部设置有条形通孔二，所述条形通孔二内活...
- 张德锋李庆勇石存斌刘春任燕常藕琴潘厚军
- 文献传递
