李君武
- 作品数：62 被引量：68H指数：4
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学社会学更多>>
- 玉米特异表达启动子驱动下结核esat-6抗原基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。
- 李君武宋东王珊珊胡建广刘艳黄清华
- 关键词：结核分支杆菌ESAT-6
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白酶抑制剂的研究进展被引量：4
- 2005年
- 面对丙型肝炎的流行,至今缺少理想的治疗药物和方案,丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白3(NS3)蛋白酶是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点。作者综述了NS3蛋白酶抑制剂的作用机制和活性特点。
- 许小亮李君武
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白蛋白酶抑制剂
- 融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用
- 2007年
- 目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化。结果NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组。结论FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力。
- 胡萍李君武叶嗣颖季煜华李小兰韦静
- 关键词：FASFASL
- α2,6-唾液酸对结肠癌细胞同源凝集的影响
- 2006年
- 目的研究结肠癌细胞LS174T的α2,6-连接的唾液酸水平对肿瘤细胞同源黏附功能的影响。方法结肠癌细胞株LS174T转染α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA或ST6Gal-I cDNA的部分反义序列以及空载体pcDNA3.1,以流式细胞仪检测转染细胞表面α2,6-连接唾液酸含量并进行克隆分选,比较顺义、反义以及空载体转染细胞的贴壁时间以及细胞-细胞之间的同源凝集效应。结果转染顺义的ST6Gal-I cDNA的细胞克隆显示ST6Gal-I mRNA的表达增强,SNA(一种特异性识别α2,6-连接唾液酸的植物凝集素)与细胞表面成分的结合增加;另一方面,细胞转染反义ST6Gal-I cDNA后其ST6Gal-I mRNA表达减少,SNA与细胞表面成分的结合力降低。与空载体转染相比,顺义转染的细胞克隆同源凝集作用降低,与细胞外成分的黏附作用增强,贴壁速度加快;反义转染细胞克隆同源凝集作用显著增强,与细胞外成分的黏附作用降低,传代后4 h的贴壁率仅为空载体的53.7%。结论本实验结果显示,肿瘤细胞α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)的表达将有效影响细胞表面α2,6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的黏附功能。
- 林绍强尹小菁李君武Wolfgang Kemmner丁彦青
- 关键词：结肠肿瘤
- 乙肝L基因和结核Esat6融合基因及其表达载体的构建与应用
- 本发明公开了一种乙肝病毒L基因和结核Esat6融合基因及其玉米表达载体和应用。构建方法包括：设计引物；扩增乙肝病毒L基因；扩增结核杆菌Esat6基因；扩增L-Esat6融合基因；pEG-G载体的构建；中间载体pEGG-L...
- 李君武
- 文献传递
- 融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的胰岛细胞凋亡的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响。方法用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fas抗体诱导的胰岛细胞株的细胞毒效应。结果转染重组子pFADDdel-GFP的NITf-g细胞可见绿色荧光蛋白表达;NITf-g细胞对抗-Fas诱导的细胞损伤率为10.16%,细胞内的Caspase-3的活性为12.33%,均明显低于对照组(P<0.05)。结论成功建立了稳定表达FADDdel-GFP的胰岛细胞株;FADDdel-GFP可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导。
- 胡萍李君武叶嗣颖林绍强李小兰韦静
- 关键词：FADDCASPASE-3凋亡1型糖尿病
- 结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达(英文)
- 2007年
- 背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。设计:单一样本实验。单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室。材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠。方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成。以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒。再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6。通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小。②pEGFP-C1DNA序列分析。③转染后Hela细胞的荧光表达情况。④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果。结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7kb,而pEGHsp65为6.4kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异。②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同。③转染融合质粒24h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分�
- 李君武黄泽棋姚翠婵周曙光李晓栋宋东黄清华
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65ESAT6融合基因DNA疫苗
- 肾癌G250基因和hGM-CSF基因双顺反子表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的应用分子生物学技术,构建pIG250-GM双顺反子真核表达质粒并进行测序鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIG250-GM真核表达质粒,并进行酶切鉴定。结果酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.44kμ和0.47kμ,测序分析表明克隆的G250和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致。结论成功构建双顺反子表达pIGM-G250质粒,为研究G250-GMCSF基因负载的DC疫苗防治肾癌提供了必要的实验基础。
- 李科李君武苏泽轩刘艳
- 关键词：肾癌G250HGM-CSF基因佐剂
- ATP对人不死化成纤维细胞增殖及其细胞膜蛋白表达的影响被引量：1
- 2000年
- 目的 :探讨ATP对不死化人成纤维细胞增殖及其细胞膜蛋白表达的影响。方法 :将正常人TIG- 7和OUMS - 36细胞株 ,不死化人KMST - 6和SUSM - 1细胞株在不同浓度的ATP ,ADP ,AMP条件下分别进行2 4和 96h的常规细胞培养 ,观察存活细胞数目 ,DNA的合成和 [3 2 P]ATP标记膜蛋白的表达。结果 :培养 96h后 ,0 4mmol/LATP对不死化细胞KMST - 6的抑制率为 77%且DNA合成明显地被抑制 ,而正常OUMS - 36细胞抑制率为 41%且DNA合成无明显改变。在 1mmol/LATP时 ,多数KMST - 6细胞发生死亡 ,而正常OUMS - 36细胞的增殖无明显影响。当ADP ,AMP和腺苷或磷酸处理的细胞 ,仅有ADP处理的不死化细胞存活数目减少 (P <0 0 1)。与正常细胞比较 ,不死化细胞 30kD、31kD、33kD和 40kD的 [3 2 P]-ATP标记膜蛋白呈高表达。结论 :ATP对不死化人成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用 ,并且使磷酸化细胞膜蛋白表达增高。
- 李君武
- 关键词：ATP成纤维细胞细胞膜蛋白
- 乙肝病毒聚合酶Pol与细胞蛋白hnRNPK相互作用及对PoI功能的影响
- Pol作为HBVDNA聚合酶具有多功能的性质。它可与宿主细胞内多种蛋白相互作用,影响病毒和细胞的生物学机制。本文利用LTQ质谱方法寻找与Pol相互作用的宿主蛋白,筛选到与Pol潜在相互作用的45个蛋白,并通过CO-IP技...
- 宫君原凌梦婷李月琴张欣李君武周天鸿
- 关键词：HBVDNA聚合酶细胞增殖
- 文献传递
