朱礼倩
- 作品数：27 被引量：101H指数：5
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省属高校自然科学基础研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒基因2型代表株全基因组序列分析被引量：5
- 2011年
- 为了解我国牛病毒性腹泻(BVD)的分子流行病学情况,本研究对分离的3株牛病毒性腹泻病毒基因2型(BVDV-2)代表株全基因组进行序列分析,应用RT-PCR法分段扩增3株BVDV-2(XJ-04、SD-09和QH-09)的全基因组序列,共分为18个片段:A～Q以及5'-UTR和3'-UTR的部分序列。除5'-UTR和3'-UTR部分序列外,A～Q基因片段末端相互重叠。经序列拼接获得3株全基因组序列,全长均为12 284 bp。将测序结果与GenBank登录的瘟病毒科代表毒株序列、自我裂解酶(Npro)、结构蛋白(C、Erns、E1、E2)以及标准株BVDV-1 NADL和BVDV-2 890进行核苷酸以及氨基酸序列同源性分析。结果表明:XJ-04、SD-09和QH-09的全基因组序列同源性高于99.6%,3株BVDV-2分离株与890和NewYork93株亲缘关系最近,属于BVDV-2a亚型。在致细胞病变型的XJ-04、SD-09、QH-09株的NS2/3基因上无外源基因的插入。本研究分离的BVDV-2株为国内首次鉴定国内分离株全基因组序列,为我国BVD的分子流行病调查提供依据。
- 林燕清朱礼倩陶洁孙宏进孟祥升王建业朱国强
- 关键词：基因组测序系统进化分析
- 鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定被引量：3
- 2008年
- 构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础。提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoRⅠ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库。测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3kb之间,平均插入片段长约1.3kb。表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础。
- 赵绪永张改平朱礼倩李清州
- 关键词：CDNA表达文库
- H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化被引量：9
- 2008年
- 利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素抗体具有良好的灵敏性。
- 李清州郝惠芳王丽赵绪永朱礼倩张丽萍邓瑞广张改平
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型原核表达
- CBL模式在《兽医微生物学》教学中的应用探讨被引量：3
- 2014年
- 基于病例的学习(Case-based learning,CBL)模式是以病例为载体,问题引导,学生为主体,教师为主导的教学模式。该教学模式通过病例介绍,采用问题引导学生思考、讨论和总结。在教师主导下,通过学生为主体的主动学习,达到学习知识和应用知识的学习目的。在兽医微生物教学中,应用该教学方法,可以极大地调动学生学习的主动性,培养学生应用知识进行学习和解决问题的能力,提高教学效果。
- 孟霞王建业朱礼倩王亨朱国强
- 鸡β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定被引量：7
- 2009年
- 采用RT-PCR方法从鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡β-防御素-3成熟肽基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A的分泌信号肽基因下游。线性化后的重组质粒电击转化毕赤酵母宿主菌GS115,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌。阳性转化菌经甲醇诱导后,SDS-PAGE和western blot鉴定结果表明,在毕赤酵母中得到分泌性表达产物,分子量约为8.9ku,活性检测表明其具有显著的抑菌活性。
- 赵绪永马辉赵丽朱礼倩李清州
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 传染性法氏囊病病毒细胞受体研究进展
- 2009年
- 综述了国内外IBDV细胞受体的研究情况,概括介绍了近年来的研究进展,以期对IBDV细胞受体的结构和功能研究提供参考。
- 李乔木李娅丽赵绪永朱礼倩田小辉刘运超王爱萍
- 关键词：传染性法氏囊病病毒细胞受体表面免疫球蛋白
- 鸡SIgM λ轻链蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定
- 2008年
- 应用RT-PCR技术从鸡法氏囊B细胞总RNA中克隆出SIgM λ轻链基因,并将其进一步克隆于pET-28a载体T7启动子的下游,构建了pET-SIgM λ原核表达载体。转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,成功表达了25.5kD的鸡SIgM λ轻链蛋白。经SDS-PAGE和Western blotting分析,表达产物以包涵体形式存在,且能与His-Taq单抗特异性反应,为进一步研究SIgM的免疫学功能及其他生物学功能奠定基础。
- 赵绪永张改平朱礼倩李清州
- 关键词：Λ轻链原核表达
- 鹅细小病毒VP1蛋白氨基酸点突变在鹅胚化疫苗株毒力减弱中的关键作用被引量：1
- 2016年
- 为了进一步明确各编码蛋白基因在鹅细小病毒（gooseparvovirus）鹅胚化疫苗株毒力减弱中的作用，以先前构建的弱毒疫苗株感染性质粒pSYG61v和强毒株感染性质粒pLH为基础，通过重叠PCR方法，在pSYG61v和pLH质粒之间互换Rep1和VP1基因片段，获得了6个嵌舍质粒pSYG-vRepl、pSYG-vVPl、pSYG-vRC、pLH-aRepl、pLH-aVP1和pLH-aRC。将质粒以绒毛尿囊膜途径转染11日龄鹅胚分别拯救出嵌合病毒。嵌合病毒的雏鹅攻毒试验表明，携带强毒株VP1基因的psYGvRC、pSYG-vVP1和pLH—aRepl这3个嵌合病毒对雏鹅表现出明显致病性，死亡率在75．0％-82．5％。完全携带弱毒株rep-cap编码框的pLH-aRC嵌合病毒攻毒组雏鹅无一死亡。携带强毒株Repl基因的pLH—aVP1和psYpvRep1嵌合病毒攻毒组雏鹅也无一死亡，但在试验期内部分雏鹅明显生长迟缓。嵌合病毒攻毒试验结果表明，结构蛋白VP1基因的氨基酸点突变对GPV鹅胚化疫苗株的毒力减弱起着关键作用。
- 王建业黄钰段进坤朱礼倩朱国强
- 关键词：鹅细小病毒疫苗株点突变嵌合病毒毒力
- 可阻断IBDV感染的抗CEF膜蛋白单克隆抗体的筛选被引量：3
- 2009年
- 【目的】利用细胞融合技术及细胞免疫组化方法,筛选可特异性阻断鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的抗鸡胚成纤维细胞(CEF)膜蛋白单克隆抗体,为进一步研究IBDV的CEF受体奠定基础。【方法】用CEF细胞免疫Balb/c小鼠,经细胞融合获得杂交瘤细胞上清。单层CEF用杂交瘤细胞上清孵育2h后接种IBDV,病毒感染后固定细胞,先后与F22-EA6-Biotin及Streptavidin-HRP进行反应,最后用AEC染色,显微镜下计数,统计感染细胞减少的百分率以判定单抗上清阻断IBDV感染的效果。【结果】利用细胞组化的方法,共计检测了768株杂交瘤细胞上清,6株(1A5、1H11、2B12、3G1、4D10和4B8)显示有阻断IBDV感染的效果,其中4B8可完全阻断IBDV对CEF的感染,该单抗针对的CEF膜蛋白很有可能是IBDV的细胞受体。【结论】筛选到的抗CEF膜蛋白的单抗可以阻断IBDV感染CEF,表明所建立的方法具有较高的敏感性和特异性。这些单抗可以用于进一步研究IBDV的CEF细胞受体。
- 杨艳艳朱礼倩杨继飞滕蔓柴书军王丽罗俊邓瑞广张改平
- 关键词：鸡胚成纤维细胞BIOTINSTREPTAVIDIN
- 国内新型基因2型牛病毒性腹泻病毒研究进展被引量：15
- 2017年
- 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)有两种基因型:基因1型(BVDV-1)和基因2型(BVDV-2)。以往的流行病学调查显示BVDV-1的分布和流行区域更加广泛,但近年来国内BVDV-2的发病率呈持续升高趋势。BVDV-2通常会引起严重的急性感染和出血综合征,给养牛业造成巨大损失。本文就BVDV-2特异性检测方法和基因分型的建立,型特异性BVDV-2毒株的分离与鉴定,BVDV-2优势分离株的全基因组测定与遗传特性分析及BVDV-1和BVDV-2抗原和抗体检测平台的建立等方面展开简要综述。
- 张倩陶洁陶洁区炳明林航杨颖张信军杨颖王建业张信军孟婷朱礼倩朱国强
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒分离株全基因组
