张文程
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京大学医学院更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备
- 2008年
- 长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具.
- 吕宁朱春花张文程朱敏生陈华群
- 关键词：MLCK蛋白表达单克隆抗体
- L-MLCK作为死亡底物介导细胞凋亡及其机制研究
- MLCK(myosin light chain kinase)是对肌球蛋白Ⅱ的轻链进行磷酸化的一种底物专一性磷酸化酶,它与肌肉收缩、细胞运动、损伤修复、细胞凋亡等过程相关。在脊椎动物中,MLCK主要有两种:横纹肌MLCK...
- 张文程朱敏生
- 关键词：细胞凋亡
- 文献传递
- 细胞骨架调节因子MLCK在内毛细胞中参与听觉传导通路的作用机制研究
- 目的通过在小鼠内毛细胞中特异性敲除肌球蛋白轻链激酶(MLCK),研究MLCK基因对小鼠的听觉功能,耳蜗形态学影响及对其听力相关机制进行研究。
- 朱光洁徐琳范迟张文程何伟奇彭亚静朱敏生高下
- 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：基因克隆真核表达载体脂质体
- Lipofectamine ^(TM)2000介导pIRES2-EGFP-NT3转染新生小鼠离体耳蜗基底膜的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,检测其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况。方法构建含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3后,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将其转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织,转染后24 h,通过Confocal显微镜观察小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况和转染效率。结果成功构建了真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导,该质粒在新生小鼠离体耳蜗基底膜转染的范围内转染进17个细胞,说明该质粒在阳离子脂质体介导下能转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织。结论含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3的成功构建,及其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织的有效转染,为研究NT3基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：耳蜗
