康良仪
- 作品数：43 被引量：498H指数：12
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 水稻普矮病毒基因组第十片段cDNA的克隆及其体外转录
- 1992年
- 由提纯的水稻普矮病毒(Rice Dwarf Virus,简称 RDV)中分离出其基因组 dsRNA,以人工合成的分别与 RDV 第十片段(RDV-S_(10))3′末端互补的两段核苷酸作为引物,合成并克隆 S_(10)全长 cDNA,体外转录成 RNA。用同位素标记的其 cDNA 作为探针,打点杂交,能检测出浓度为2×10^(-12)g 的病毒核酸和直接测出1.25×10^(-4)g 染病水稻中的病毒核酸。
- 邓大纶康良仪杨希才陆师义田波
- 关键词：CDNA克隆体外转录
- 黄瓜花叶病毒株系间交叉保护作用与卫星RNA干扰作用的比较研究被引量：3
- 1989年
- 用除了卫星RNA和含有卫星RNA的CMV分离物在烟草和甜椒上进行了两组不同设计的温室实验。一组在不同保护接种后,在不同时间攻强毒CMV;另一组在不同保护接种后,在同一时间攻强毒CMV。攻毒后进行寄主症状调查、病情指数统计以及强毒CMV的A蛋白夹层ELISA测定,发现交叉保护和卫星RNA干扰作用在体內都存在,但其作用时间和程度不同。交叉保护在保护接种后10—15d以前明显,15d以后很弱;而卫星RNA干扰作用则很强,尤其在保护接种10d以后保护很完全,并且维持到30d以后。用凝胶电泳纯化与生物学单斑分离法相结合,获得了除去卫星RNA的CMV分离物。除去卫星RNA前后,CMV在不同寄主上引起的症状有很大变化,同时上述分离物在烟草上多次转接后在子代病毒中又发现卫星RNA。
- 毋谷穗康良仪田波
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA
- 互补的烟草花叶病毒介导表达丙型肝炎的核心抗原
- 1998年
- ＴＭＶ两种突变体ＴＳＨｃ和ＴＢＤ，共同接种于烟草叶片。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果表明这两种突变体由于功能上互补而产生了系统侵染。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ的检测结果表明烟草的上部叶片表达了丙型肝炎的核心抗原和ＴＭＶ外壳蛋白质。
- 韩爱东刘玉乐康良仪李冬田田波
- 关键词：病毒载体核心抗原烟草花叶病毒丙型肝炎
- MDMV外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：17
- 1994年
- 报道了玉米矮花叶病毒(MDMV)全长外壳蛋白cDNA基因的克隆、序列分析和表达产物鉴定的结果。根据其cDNA序列推测的外壳蛋白氨基酸顺序全长共有313个氨基酸,分子量总和为35 400 D,与聚丙烯酰胺凝胶电泳估算的值36 000 D相近,克隆的病毒外壳蛋白基因cDNA 3′-末端非编码区含有256个碱基。将此外壳蛋白的基因插入pUC19的1acZ基因中,转入E.coli后诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异性的蛋白带,经Western吸印与抗MDMV的兔血清呈阳性反应,证实所克隆的cDNA基因为MDMV外壳蛋白基因,并且能够正确表达。
- 赛吉庆康良仪黄忠史春霖谢友菊田波
- 关键词：外壳蛋白基因玉米MDMV无性系
- 卫星RNA对黄瓜花叶病毒基因组RNA体外合成的影响被引量：10
- 1996年
- 卫星ＲＮＡ对黄瓜花叶病毒基因组ＲＮＡ体外合成的影响杨海花，康良仪，赵大健，田波（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）关键词卫星ＲＮＡ，黄瓜花叶病毒，依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶，体外合成利用卫星ＲＮＡ生防制剂控制田间的番茄、青椒、烟草等由黄瓜花叶病...
- 杨海花康良仪赵大健田波
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNARNA基因组
- 专一切割猴免疫缺陷病毒3′端LTR 10拷贝自切割核酶的制备及体外催化活性动力学分析被引量：1
- 2000年
- 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5min,至少 85%的 1 0体核酶发生自切割 ,并释放出单体核酶 .反式切割研究表明 ,1 0体核酶表现出极高的催化活性 .尽管 1 0体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一 ,在反应初始 2 5min内 ,1 0体核酶的催化产物平均超过单体核酶1 3.31 % .1 0体核酶一级反应速度常数是单体核酶的 1 .86倍 .从这些数据可以推断 ,1
- 邓文生张奉学杨希才符林春康良仪990.net
- 人干扰素-γ植物双元表达载体的构建被引量：10
- 1999年
- 为研究在药用植物中表达人干扰素 (IFN) ,构建了人IFN -γ植物双元表达载体。方法是将IFN -γ基因的pstI片段插入克隆载体PBluescriptSK(+) 中 ,通过蓝白斑筛选以xbaI kpnI证实 ,以ndeI kpnI鉴定插入方向。得到中间载体PSKIFN,用xbaI kpnI双酶切PSKIFN ,回收 1.3kb片段 ,将此片段插入植物表达载体PROKII上 ,经限制性酶切分析及自动测序 ,结果证实插入片段大小及序列正确 ,构建获得成功 ,为进一步在药用植物中表达IFN
- 张奉学符林春黄玲郭兴伯李国桥康良仪韩爱东王寰宇
- 关键词：转基因植物药用植物
- 用甲醇酵母（Pichia Pastoris）生产神经营养素－3（NT－3）的方法及应用
- 本发明属于基因工程药物领域，具体地说，涉及利用工程菌甲醇酵母(Pichia pastoris)生产制备神经营养素－3(NT－3)，以及在制备治疗维持和促进多种神经元早期的增殖、分化、损伤的感觉和运动神经元、胆碱能神经元、...
- 康良仪杨希才彭毅
- 文献传递
- 水稻花药特异表达基因启动子的扩增及克隆被引量：29
- 1997年
- 采用ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术，以水稻黄化苗总ＤＮＡ为模板成功地扩增到水稻花药特异表达基因启动子Ｏｓｇ６Ｂ的７７０ｂｐ和９６０ｂｐ两个片段Ｏｓｇ６Ｂａ和Ｏｓｇ６Ｂｂ．并将其克隆到ｐＵＣ１８上形成完整的Ｏｓｇ６Ｂ，这为通过基因工程方法进行水稻杂种优势利用奠定了基础．
- 张晓国刘玉乐康良仪朱英国朱英国
- 关键词：启动子PCR扩增水稻花药克隆
- 特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒的Ribozyme的体外活性测定被引量：13
- 1992年
- 本文报道根据Ribozyme的作用模式、设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯纺锤形块茎类病毒(PSTV)正链和负链RNA的Ribozyme基因。以转录的PSTV正链及负链RNA作为底物与转录的Ribozyme RNA一起保温检测Ribozyme的体外切割活性。实验结果表明,当在50℃保温时,特异性切割PSTV正链及负链的Ribozyme在体外具有相当高的特异性切割活性;并且当在25℃保温时,Ribozyme仍具有相当的切割活性。在此基础上,正试图将Ribozyme基因导入马铃薯植株以检测其体内活性。
- 叶寅刘怡之赵丰康良仪田波
- 关键词：RIBOZYME体外切割PSTVRNA
