崔春萍
- 作品数：29 被引量：83H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用被引量：1
- 2016年
- 目的利用体外细胞模型和基因敲低模型评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的作用。方法利用慢病毒LV-miR-17-92感染正常人肝细胞系L02,获得稳定过表达miR-17-92肝脏L02细胞,利用四氯化碳模拟肝细胞损失,MTS法检测miR-17-92高表达L02细胞和对照细胞的存活率。利用Alb-cre转基因小鼠和miR-17-92-loxp转基因小鼠杂交,获得肝脏组织特异的miR-17-92基因敲低小鼠。利用四氯化碳和伴刀豆球蛋白A,分别建立两种急性小鼠肝损伤模型。取肝脏组织进行HE染色,眼球取血检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶,进而评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用。结果 Q-PCR结果显示慢病毒感染显著提高了L02细胞中miR-17-92的表达。MTS结果显示四氯化碳处理明显抑制了L02细胞的生长,而与对照组相比,miR-17-92过表达提高了四氯化碳处理后细胞的存活率(P<0.05)。基因组PCR结果和肝脏Q-PCR分析均显示肝脏特异miR-17-92基因敲低小鼠肝脏中miR-17-92的表达显著降低。小鼠腹腔四氯化碳给药能够显著诱导野生型小鼠肝脏miR-17-92的水平,而基因敲低小鼠中miR-17-92表达无明显变化。在四氯化碳和伴刀豆球蛋白A肝脏损伤模型中,与对照组相比,miR-17-92肝脏特异性敲低小鼠的肝脏病理学损伤明显加重,提示miR-17-92可能参与了急性肝损伤的修复过程。结论肝脏损伤能够诱导miR-17-92表达增加,而miR-17-92过表达对四氯化碳诱导的肝细胞损伤具有保护作用,miR-17-92敲除则加重了四氯化碳和伴刀豆球蛋白A诱导的急性肝损伤。因此,miR-17-92在急性肝脏损伤中起保护作用。
- 王若素高慧英赛岩崔春萍
- 关键词：肝损伤CCL4伴刀豆球蛋白A
- 慢病毒载体PLK O.1-shHIF-2α的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的干涉缺氧诱导因子(HIF)-2α表达的慢病毒载体,并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP均与PLKO.1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒PLKO.1-shHIF-2α,后者与pMD2G,pSAX2共转染293FT细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞,检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段,酶切鉴定及测序均证实PLKO.1-shHIF-2α质粒构建成功。转染293FT细胞产生的重组慢病毒颗粒感染786-0细胞后高表达绿色荧光。结论成功构建了高效的带GFP报告基因并稳定干涉HIF-2α表达的慢病毒载体。
- 刘鹏飞崔春萍门同义
- 关键词：肾细胞癌缺氧诱导因子-2Α绿色荧光蛋白RNA干扰
- 肝细胞生长因子基因治疗促进海水浸泡伤创伤愈合的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的观察肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对海水浸泡伤创伤愈合的影响。方法将20只20周龄健康雄性Wistar大鼠随机均分为单纯创伤组、创伤合并海水浸泡(创伤+海浸)组和3个给药组(0μg、20μg、40μg)。建立双侧切割伤合并海浸大鼠模型,采用INJEX无针注射器紧贴创口边缘皮肤,每创口4点注射HGF重组质粒(pUDKH)。每天观察伤口愈合情况,并测量和计算创面面积,分别于第1、6、12和16天伤口取材,HE染色后进行病理学观察。结果从致伤后第2天开始各时间点,20μg和40μg pUDKH给药组大鼠创口面积均明显小于创伤+海浸组和0μg给药组。组织病理学观察结果显示,与创伤+海浸组和0μg给药组相比,20μg和40μgpUDKH给药组于致伤后第1天的创伤部位炎性反应较轻,于致伤后第6天的肉芽组织和新生血管生长增加,再上皮化进程较早,创面愈合提前2～3 d。结论 HGF基因治疗能够促进海水浸泡伤创伤愈合,其作用可能与HGF抑制伤口局部炎症反应,促进新生血管生长和再上皮化过程等有关。
- 张达矜乔媛媛王大鹏解鹏何立东毕建进吴祖泽崔春萍赵晓航
- 关键词：肝细胞生长因子基因治疗
- 肝细胞生长因子与皮肤创面修复被引量：3
- 2007年
- 皮肤创面修复是一个复杂的生物学过程，其中包括炎症反应、细胞增殖、胶原代谢、毛囊形成和色素沉积等病理生理过程。许多生长因子介导和调控伤口的纤维化、血管生成和再上皮化，在皮肤愈合过程中发挥作用。其中，肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）作为一种高效的多功能生长因子，具有促进皮肤创伤愈合和毛囊再生。抑制病理性瘢痕形成和皮肤色素沉着等重要作用。本文就HGF在皮肤创伤修复中的作用及机制做如下综述。
- 李金凤崔春萍段海峰吴祖泽
- 关键词：肝细胞生长因子创面修复病理性瘢痕形成病理生理过程生长因子介导皮肤创伤修复
- 抑瘤素表达产物诱导大鼠肝干细胞WB-F344体外分化被引量：1
- 2007年
- 目的:抑瘤素是一种肝细胞促分化因子,能够诱导胚胎肝细胞分化为具有各种代谢功能的成熟肝脏。构建以抑瘤素为主的肝干细胞体外诱导微环境,观察其诱导大鼠肝脏来源的干细胞WB-F344体外分化。方法:实验于2002-10/2004-07在解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成。①实验材料:表达抑瘤素的CHO-OSM-EGFP细胞株由李晓利等构建。WB-F344细胞由姚鹏博士惠赠。②实验方法:将终浓度为20%稳定表达抑瘤素的中国仓鼠卵巢细胞上清中加入浓度为1U/mL胰岛素、1×10-7mol/L地塞米松,与WB-F344细胞共培养。空白对照组中未加入诱导分化成分CHO-OSM-EGFP细胞上清、胰岛素、地塞米松。③实验评估:采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,光学显微镜观察细胞形态,RT-PCR分析白蛋白及甲胎蛋白基因表达。结果:①诱导后的WB-F344细胞较空白对照组G2/M+S期细胞所占比例明显减低,增殖指数下降约2.8倍,G0/G1细胞所占比例明显增加。②实验组WB-F344细胞形态发生明显改变,由最初的多角形变为长梭性,细胞伸出小管状伪足,核质比例下调,形态趋于成熟大鼠肝脏实质细胞。③RT-PCR结果显示,诱导后WB-F344细胞表达白蛋白,不表达甲胎蛋白。诱导前WB-F344细胞表达甲胎蛋白,不表达白蛋白。结论:在以抑瘤素为主的诱导微环境中,WB-F344细胞表现出生长抑制。
- 李晓利王强赵士富崔春萍姚鹏尉承泽
- 关键词：细胞周期干细胞分化
- 肝脏特异HPPCn转基因小鼠的建立及表型分析被引量：1
- 2012年
- 目的建立高表达HPPCn转基因小鼠,为研究该基因在肝癌发生发展中的功能提供研究模型。方法显微注射外源基因pGEM-A1b/his-HPPCn至FVB/N小鼠原核,注射受精卵移植到假孕受体出生个体。PCR和Southern blot鉴定转基因小鼠基因型,Western blot和Realtime-PCR检测转基因阳性和阴性小鼠肝脏HPPCn蛋白表达情况,HE染色和透射电镜观察肝脏病理改变。结果经检测,显微注射共产生2只首建鼠,转入的重组HPPCn基因能在肝脏中特异表达,并能够稳定遗传。转基因小鼠肝脏内HPPCn含量明显增高。转基因后并未对小鼠造成不良影响。结论 HPPCn参与了肝癌发生发展的过程,其在体内的高水平表达,为在体内研究该基因的功能提供了工具。
- 文川赛岩白纪民刘勇常菁王智崔春萍
- 关键词：肝肿瘤白细胞介素6
- 肝细胞生成素Cn促进肝干/祖细胞增殖的功能研究
- 2015年
- 目的检测肝细胞刺激因子肝细胞生成素Cn(hepatopoietin Cn,HPPCn)作用肝祖细胞的功能。方法利用MTT法、AnnexinⅤ和PI荧光染色法分别检测WB-F344细胞增殖及其抗凋亡能力,Transwell法检测细胞迁移能力。建立小鼠2AAF-部分肝切除(partial hepatectomy)模型,分析高表达HPPCn对肝干/祖细胞增殖和迁移的影响。结果重组HPPCn蛋白能促进WB-F344细胞的增殖及细胞迁移,低浓度HPPCn能抑制WB-F344细胞的凋亡,并激活WB-F344细胞中Sph K1、Erk1/2以及Stat3信号通路。动物模型检测结果显示,肝特异HPPCn转基因小鼠部分肝切除后,肝卵圆细胞较对照组明显增多,肝再生能力增强。结论 HPPCn能促进肝干/祖细胞增殖和存活,并通过促进肝卵圆细胞增生,提高肝再生能力。
- 李永锋刘勇常菁刘鹏飞高慧英周旭卢俊崔春萍
- 关键词：细胞增殖肝再生细胞运动
- 新的肝细胞生长因子HPPCn的表达、纯化及体外活性检测被引量：2
- 2007年
- 目的:建立rhHPPCn在大肠杆菌中的表达体系,纯化表达产物并检测其体外生物活性。方法:以pUC18-HPPCn为模板,构建原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达目标蛋白,离子交换色谱法纯化目标蛋白,Westernblot分析其免疫原性,MTT法和3H-TdR掺入法检测其体外活性。结果:成功构建出原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn,并诱导使目标蛋白的表达量较高,表达产物中HPPCn23%以可溶形式存在,两步离子交换后可得纯度为94.2%,Westernblot鉴定为目的蛋白,MTT法和3H-TdR掺入法检测其具有明显的促肝癌细胞系增殖活性。结论:成功构建出原核表达载体并实现了目标蛋白高表达,两步离子交换法纯化出所需纯度的蛋白,并验证了其较强的体外促肝癌细胞系增殖活性。
- 魏苹杜劭君崔春萍张达矜张霄翔吴祖泽
- 关键词：原核表达
- pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变被引量：3
- 2007年
- 目的:研究pp32在肝癌细胞中的作用。方法:采用RT-PCR的方法钓取pp32全长基因。脂质体介导的方法将pp32基因导入HepG2细胞。观察细胞形态,血清依赖性和接触抑制等细胞表型,测量细胞生长曲线,检测ALP、LDH、γ-GT、ALB和AFP等生化指标。结果:成功钓取了pp32全长基因,筛选获得pp32稳定表达的HepG2细胞株。pp32表达使HepG2细胞伸出细长突起,但不影响HepG2细胞增殖。ALP和LDH酶活力升高,其他指标没有变化。结论:pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变,但不改变其恶性表型。
- 张达矜崔春萍李金凤杜劭君吴祖泽
- 关键词：肝肿瘤磷蛋白类基因表达
- 肝刺激物促肝细胞增殖信号转导途径的初步研究
- 2005年
- 目的:探讨新生牛肝肝刺激物(hepaticstimulatorsubstance,HSS)促进SMMC7721肝癌细胞增殖的信号转导途径。方法:对新生牛肝进行多步分离,采用3H TdRDNA掺入法检测分离物的促增殖活性,从而获得具增殖刺激活性的HSS;Western印迹方法检测其对肝癌细胞MAPKThr202/Tyr204的磷酸化作用并检测其对SPK的激活作用。结果:经多步分离纯化,获得了活性较高的HSS粗提物,Western印迹法结果显示HSS粗提物能明显提高MAPK的磷酸化水平,并能激活细胞内的SPK活性。结论:HSS对细胞的增殖刺激可能是通过SPK和MAPK途径发挥作用。
- 崔春萍石炳兴刘铖段海峰王立生王清明吴祖泽
- 关键词：肝细胞增殖信号转导
