孙岩
- 作品数：22 被引量：92H指数：5
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰——双链RNA诱导的基因沉默被引量：1
- 2004年
- 孙岩马用信肖翠英
- 关键词：RNA干扰双链RNA基因转录后基因沉默PTGS
- 短发夹RNA介导RNA干扰的时间和剂量效应研究被引量：20
- 2005年
- 用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中RNAi作用的剂量和时间效应.应用Lipofectamine 2000将外源报告基因的表达载体与编码短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)的质粒共转染HEK293H细胞,观察shRNA载体对报告基因的抑制效应.转染后,shRNAs的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达.在共转染后12,24,48,60,72,96 h时检测EGFP(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因mRNA及蛋白质表达水平,结果显示,EGFPmRNA及蛋白质表达在12 h时略有降低,24～48 h时表达逐渐降低,48～72 h时降低最明显,其后EGFP表达水平逐渐恢复.提示该过程中RNAi效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势.共转染一系列剂量比例的EGFP干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内,RNA干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一'平台期'.此外,通过RNAi抑制HeLa细胞、HEK293细胞中荧光素酶基因的表达,荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应.这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的RNAi作用呈现剂量和时间依赖性效应.这为基于载体表达的RNAi技术应用研究提供了一定的理论参考及依据.
- 何国平张思仲王英成肖翠英马用信许文明丁兰陶大昌孙岩陈玉娟
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA报告基因共转染
- 组织蛋白酶D基因C224T多态与散发阿尔茨海默氏病的关联研究被引量：2
- 2005年
- 组织蛋白酶D(Cathepsin D)是一种细胞核内体/溶酶体内的门冬酰胺蛋白酶。它有可能通过剪切淀粉样前体蛋白参与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease, AD)相关的神经退化。在以德国人为对象中的研究显示组织蛋白酶D基因(CTSD)C224T多态与AD发病风险紧密相关。然而,此结果未能在另一些群体中得到重复。为此,通过聚合酶链反应 限制性片段长度多态性方法分析了 CTSD 基因 C224T 多态性和载脂蛋白 E(apolipoprotein E,ApoE)基因多态性在成都地区汉族老年人中的分布,探讨了 CTSD C224T多态与散发 AD的相关性。结果发现:CTSD 基因C224T多态分布在病例组与对照组之间没有显著性差异,提示成都地区汉族人群中 CTSD 基因 C224T多态与散发AD不具有关联;但比值比的比较提示CTSD 等位基因T 和ApoEε4有弱的协同作用。
- 孙岩施佳军张思仲唐牟尼韩海英郭扬波马崔刘协和李涛
- 关键词：组织蛋白酶D基因限制性片段长度多态性CTS多态分布
- siRNA及其在哺乳动物中的应用被引量：4
- 2003年
- RNA干扰现象已经在多种生物中发现 ,但是在多数哺乳动物中尚未发现自然存在RNA干扰的证据。因此最初RNA干扰技术在哺乳动物细胞中的应用受到很大的限制。直到对RNA干扰作用机制有了较深入的了解以后 ,主要是小干扰RNA的发现使RNA干扰技术在哺乳动物中的应用得以推广。本文介绍了RNA干扰 ,重点描述了小干扰RNA的发现、特点。
- 孙岩马用信
- 关键词：SIRNA哺乳动物小干扰RNARNA干扰
- 与成人多囊肾病PKD2基因紧密连锁的四种微卫星DNA在中国汉族人群中的多态性被引量：5
- 2002年
- 目的 分析与成人多囊肾病 PKD2基因紧密连锁的 4种微卫星 DNA D4S15 34、D4S15 6 3、D4S42 3和 D4S414在中国汉族人群中的多态性 ,为该病的异质性研究奠定基础。方法 采用聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术对部分无血缘关系的中国汉族人的上述 4个微卫星 DNA进行了多态分析。结果 在中国汉族人群中 ,D4S15 34、D4S15 6 3、D4S42 3和 D4S414的等位片段分别有 11种、14种、17种和 15种 ,其等位片段大小分别为 142～ 16 2 bp、2 0 5～ 2 35 bp、10 3～ 135 bp和 2 36～ 2 6 4bp,多态信息量分别为 0 .872、0 .844、0 .92 1和 0 .871。结论 在研究的中国汉族人群中 ,D4S15 34、D4S15 6 3、D4S42 3和D4S414这 4种微卫星有较多的等位片段 ,均是高度多态的遗传标记 ,为人类群体遗传学提供了数据 ,表明这 4种微卫星可用于成人多囊肾病的遗传异质性的研究、连锁分析、法医学个体鉴定和亲权鉴定。
- 丁兰孙岩张思仲周宏远彭艳
- 关键词：成人多囊肾病PKD2基因微卫星DNA
- 荧光探针二次杂交技术及其在医用基因芯片中的应用被引量：2
- 2002年
- 目的 建立一种适用于医用基因芯片的核酸检测技术。方法 运用自行设计的荧光探针 ,通过与模板 DNA和固定探针的次序杂交 ,检出特异基因片段。结果 应用该方法在基因芯片上对性病病原体菌株进行检测 ,各阳性组荧光密度值较阴性组显著下降 ;对临床标本检测的灵敏度和特异性均达到 90 %以上 ,杂交过程不需添加任何试剂 ,杂交检测时间缩短至 40分钟以内。结论 荧光探针二次杂交技术可用于医用基因芯片 ,并具有快速、简便、可靠等特点 ,有利于实现检测过程的全自动、封闭性和一体化。
- 杨元张思仲王军雍刚夏庆杰吴韶清孙岩
- 关键词：基因芯片
- ZNF230基因突变筛查及其与无精症的相关性分析(英文)被引量：3
- 2005年
- 目的探讨ZNF230基因与无精症的关系。方法应用变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)对99例无精症患者与115名健康对照者基因组DNA中ZNF230基因全部6个外显子进行突变筛查。结果检测到ZNF230基因第6外显子A316G碱基转换;无精症组与健康对照组之间等位基因频率和基因型频率均差异存在统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05);无精症组内GG和GA基因型亚组血清卵泡刺激素水平明显高于AA基因型亚组(P<0.05)。结论ZNF230基因不但可能和无精症相关,而且可能与血清FSH水平有一定相关性。
- 董景涛张思仲马用信杨开选黄明孔孙岩何国平李亚张炜彭艳
- 关键词：基因突变无精症卵泡刺激素基因型基因频率
- 胆固醇酯转运蛋白基因突变及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病易感性的关联研究被引量：12
- 2003年
- 目的 确定胆固醇酯转运蛋白 (cholesteryl ester transfer protein,CETP)基因 4种突变在中国人群中的频率 ,并探讨这些突变与脂代谢和冠状动脉粥样硬化性心脏病 (coronary atherosclerotic heartdisease,CHD)易感性的关系。方法 对 2 0 9名正常人和 2 0 3例 CHD患者 CETP基因相应片段进行了限制性片段长度多态性分析 ,用 HWE软件和 SPSS软件分别进行遗传平衡检验和统计学分析。结果 在正常对照组和 CHD患者组中均未检出 IVS14 A和 4 5 1Q突变基因。 4 0 5 V突变基因频率在正常人和 CHD患者中分别为 0 .4 4 3和 0 .4 13,4 4 2 G突变基因频率在两组中分别为 0 .0 0 7和 0 .0 2 5 ,I4 0 5 V和 D4 4 2 G突变的等位基因频率分布符合 Hardy- Weinberg平衡。CHD患者组 4 4 2 G突变基因频率显著高于正常人群 (P=0 .0 4 3)。与无 D4 4 2 G突变的 CHD患者相比 ,4 4 2 G突变杂合子 CHD患者的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇显著升高 (P=0 .0 17;P=0 .0 4 1)。结论 CETP基因 IVS14 A和 4 5 1Q突变在中国人群中非常罕见 ,4 4 2 G突变基因可能是中国人
- 郑克勤张思仲张克兰张立贺勇孔祥东孙岩苏智广
- 关键词：冠心病胆固醇酯转运蛋白基因单核苷酸多态性基因突变
- 卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因单核苷酸多态性与冠心病脂代谢易感性的关联研究被引量：11
- 2003年
- 目的 检测卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (lecithincholesterolacyltransferase ,LCAT)基因 3个编码区单核苷酸多态位点在中国人群中的分布频率 ,并初步探讨它们与脂代谢和冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronaryatheroscleroticheartdisease ,CHD)易感性的关系。方法 采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性方法 ,分析 2 0 9名正常人和 2 0 3例CHD患者中 60 8C/T、911T/C和 1188C/T(参照序列 :NM 0 0 0 2 2 9) 3个位点的多态性。结果 60 8C和 60 8T等位基因频率分布符合Hardy Weinberg平衡。CHD患者组 60 8T频率显著低于正常人群 (P =0 .0 3 4)。与无 60 8TCHD患者相比 ,具有 60 8T的CHD患者的血浆高密度脂蛋白胆固醇显著升高 (P =0 .0 15 )。 911T/C和 1188C/T在两组中均未检出。结论 LCAT基因 60 8T等位基因与CHD患者较高的血浆高密度脂蛋白胆固醇水平相关联 ,可能与中国人CHD相关。 911T/C和 1188C/T在中国人群中非常罕见。
- 张克兰张思仲郑克勤贺勇张立苏智广孙岩施佳军孔祥东童煜
- 关键词：单核苷酸多态性冠心病脂代谢易感性
- 一个可能与PKD2基因连锁的常染色体显性多囊肾病家系被引量：3
- 2005年
- 目的研究常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)在中国人中的遗传异质性。方法采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测了1个ADPKD家系各成员中与PKD1基因连锁的4种和与PKD2连锁的4种微卫星标记的基因分型。然后以软件辅助构建单倍型,并推测疾病单倍型。结果发现该ADPKD家系中,与PKD1紧密连锁的4个微卫星KG8、SM6、CW4和CW2是有信息的;与PKD2基因紧密连锁的3种微卫星DNA D4S1563、D4S414和D4S423是有信息的。推定的单倍型提示,在这个家系中疾病可能与PKD2连锁,而不与PKD1连锁。结论在此家系中,受累成员间存在表型异质性,并且有一个早发的儿童患者。与PKD2连锁的家系较少,这个家系的报道表明中国人中存在ADPKD的遗传异质性,PKD2的异常也可能会引起中国人ADPKD的发生。另外,发现有遗传早现现象存在,且疾病通过母亲传递。这提示在与PKD1不连锁的家系中后代可能早发病。
- 孙岩丁兰王有麒周宏远张思仲
- 关键词：PKD2基因基因连锁常染色体显性多囊肾病聚合酶链反应
