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孔小祥: 作品数：16 被引量：46H指数：5; 供职机构：连云港市中医院更多>>; 发文基金：江苏省科技支撑计划项目江苏省博士后科研资助计划项目南京军区医学科技创新课题更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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实时荧光定量PCR检测HBV-DNA测量不确定度的评定被引量：6: 2016年; 目的探讨实验室实时荧光定量PCR检测HBV-DNA测量不确定度的评定方法,并对其临床应用进行分析评价。方法依据CNAS-TRL-001:2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》,以室内质量控制评定实验室测量复现性,以有证参考物质(CRM)评定偏倚,以测量复现性和偏倚评定测量不确定度。结果高、中、低值扩展不确定度(k=2)分别为0.99、1.14、0.94(对数值),相对扩展不确定度(k=2)分别为9.15%、24.7%、31.1%。结论以复现性和偏倚评定HBV-DNA测量不确定度方法有效可行,适合实验室测量不确定度的评定,适合实验室之间测量不确定度的比较分析。; 孔小祥仲崇明; 关键词：测量不确定度乙型肝炎病毒DNA 实时荧光定量PCR

用动物模型评估抗烯醇化酶抗体测定对系统性白念珠菌病的诊断价值被引量：11: 2011年; 目的建立系统性白念珠菌病(SC)家兔模型,考察免疫功能正常组和免疫功能低下组家兔产生特异性抗体的动力学,评估抗烯醇化酶抗体的诊断价值。方法新西兰大白兔随机分为A组(免疫功能正常组)和B组(免疫功能低下组,注射氢化可的松建模),每组4只,静脉注射白念珠菌分生孢子,建立SC动物模型。每2d采血,用western blot检测血清抗白念珠菌非糖基化蛋白抗体谱、用ELISA法检测抗烯醇化酶抗体滴度。结果 western blot结果显示,感染后第16d,两组家兔血清均出现与非糖基化蛋白组分反应的抗体,以相对分子量(Mr)29000和48000蛋白的抗体反应最强,其中Mr 48000蛋白为烯醇化酶。ELISA结果显示,感染后第12d,所有家兔即可检出抗烯醇化酶抗体,且抗体滴度持续升高。结论免疫功能正常和免疫功能低下家兔罹患SC时,产生特异性抗体的动力学无显著差异;抗白念珠菌烯醇化酶抗体有望成为早期快速诊断SC的指标。; 孔小祥李芳秋王仕钦史利宁; 关键词：动物模型血清学诊断

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：6: 2011年; 目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。; 史利宁邵世和李芳秋孔小祥王仕钦陆静芬黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉硫氧还蛋白还原酶基因克隆原核表达

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值: 目的利用重组白念珠菌烯醇化酶抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶抗体的ELISA法,评估该法在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值。方法收集经培养确诊的各类IC患者(66例)和定植患者(32例)血清,用重组白念珠菌...; 孔小祥李芳秋王仕钦史利宁邵海枫王卫萍; 文献传递

用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原: 2011年; 目的用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原,用于侵袭性曲霉病(IA)的诊断标志物及疗效监测。方法 YEPG培养基培养14 d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳(2-DE)分离,用抗曲霉抗体阳性的IA确诊患者混合血清进行免疫印迹,再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点。结果 2-DE、免疫印迹结果显示,确诊IA患者血清与分泌蛋白质中多种抗原反应强烈。40个蛋白质点被抗体阳性IA患者血清识别。对40个蛋白质点质谱分析,成功鉴定了39个免疫反应阳性的蛋白质点,代表17种蛋白质,包括分泌型二肽基肽酶V(DppV)、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋白还原酶、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3-羟丁酰辅酶A脱氢酶等。在鉴定出的17种蛋白质中,有2个为已知抗原,15个首次报道为免疫原性蛋白质。有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点。且在新发现的免疫原性蛋白质中,2号蛋白质(共13个蛋白质点)免疫反应最强,鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶。结论免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效方法,此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物,但还需进一步地实验加以评估。; 史利宁李芳秋孔小祥王仕钦黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉侵袭性曲霉病分泌蛋白 2-DE

用免疫磁珠法检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体被引量：1: 2013年; 目的建立检测人血清抗白念珠菌烯醇化酶(Eno)IgG类抗体的免疫磁珠法,并评估其在念珠菌血症诊断中的价值。方法将Eno重组蛋白耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,优化免疫磁珠法的反应条件,考察其精密度和特异性。收集经血培养确诊的念珠菌血症患者(n=113)、念珠菌定植者(n=50)、细菌菌血症患者(n=30)和健康人对照者(n=100)血清,用免疫磁珠法测定抗Eno抗体,并与ELISA法结果进行比较。结果免疫磁珠法测定抗Eno抗体的批内、批间变异系数(CV)分别为8.2%和14.2%,重组Eno抗原对相应抗体的阻断率为91.6%。以吸光度(A)值0.29为cut off值时,诊断念珠菌血症的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特异性与ELISA法比较无统计学差异,但检测流程从37℃2.5 h缩短至常温1 h。结论免疫磁珠法检测抗Eno IgG类抗体简便、快捷、可靠,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。; 胡毓安史利宁李芳秋年娜马春芳孔小祥; 关键词：烯醇化酶抗体免疫磁珠法念珠菌血症

烟曲霉不同蛋白组分免疫反应性的比较研究: 目的通过制备烟曲霉不同蛋白组分,并用特异性抗曲霉抗体阳性的侵袭性曲霉病(IA)确诊病人血清与这些蛋白组分进行免疫印迹,对这些蛋白组分的免疫反应性进行比较分析,从而筛选出含免疫原性蛋白最多、免疫反应最强的蛋白组分,为进一...; 史利宁李芳秋周万青孔小祥王仕钦黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉菌体蛋白免疫反应性

白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质的制备及鉴定被引量：18: 2010年; 目的制备具有高免疫原性的白念珠菌重组烯醇化酶蛋白质。方法以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板,用PCR法扩增烯醇化酶的全长DNA序列,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组融合蛋白质表达。用抗his标签的单克隆抗体和白念珠菌抗体阳性的病人血清进行western blot鉴定,亲和层析柱纯化重组蛋白质。结果获得了含白念珠菌烯醇化酶全长基因的重组表达载体和相应工程菌株,经IPTG诱导后能高效表达重组融合蛋白质。经已含抗体的病人血清进行western blot鉴定,表明诱导的重组蛋白质有良好的免疫原性。结论成功克隆了白念珠菌烯醇化酶全长基因并在大肠埃希菌中获得高效表达;重组蛋白质具有良好的免疫原性。; 王仕钦曹王丽李芳秋孔小祥史利宁; 关键词：白念珠菌烯醇化酶基因克隆原核表达

血清肿瘤标志物在肺癌患者中的表达及与临床病理特征的关系被引量：3: 2023年; 目的探讨肺癌患者的血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖类抗原(CA153)的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2019年1月至2022年7月连云港市中医院收治的80例肺癌患者和80例肺部疾病良性病变患者的临床资料,分别作为肺癌组和良性病变组,另选取同期于院内进行体检的80例健康体检者的资料,作为健康组。比较3组研究对象血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA153水平;比较不同病理特征肺癌患者血清肿瘤标志物水平;分析血清肿瘤标志物与肺癌患者临床病理特征的相关性。结果肺癌组研究对象血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA153水平高于健康组和良性病变组,且良性病变组高于健康组;与高分化、无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期的肺癌患者相比,低、中分化、有淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期的肺癌患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA153水平均升高;经Pearson相关系数法分析显示,血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA153水平与肿瘤分化程度均呈负相关,与淋巴结转移、TNM分期均呈正相关(均P<0.05)。结论CEA、NSE、CYFRA21-1、CA153水平可对肺癌患者进行诊断,并与肿瘤分化程度均呈负相关,与淋巴结转移、TNM分期均呈正相关,临床上可通过检测上述指标水平变化评估疾病的严重程度并对患者的病理特征进行评价,为临床上诊治肺癌提供一定的参考。; 路洪祥程颖刘婷婷孔小祥; 关键词：病理特征癌胚抗原神经元特异性烯醇化酶细胞角蛋白19片段糖类抗原153

雅培i2000化学发光法检测HIV病毒的准确性: 2016年; 人类免疫缺陷病毒(HIV)可造成人类免疫系统缺陷,对人体免疫系统进行破坏,使得人体抵抗力丢失并引发艾滋病。为了杜绝该类疾病的发生,卫生部要求在输血前需进行HIV病毒抗体检测,因此,如何采取简便快速、特异性与敏感性高的检测技术是临床工作者关注的重点。本文选用雅培i2000化学发光免疫分析仪对HIV病毒进行实验室检测,同时对该项检测仪器的相关性能进行详细的叙述。; 孔小祥赵晓慧; 关键词：HIV病毒准确率

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