周雅琼
- 作品数：10 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 叔丁氧羰基-叔亮氨酸(Boc-tert-leucine)的合成研究
- 2011年
- 对叔亮氨酸的氨基的叔丁氧羰基(Boc)保护反应条件进行了研究,最佳反应条件是:以四氢呋喃-水为反应溶剂体系,两者体积比为1:1,叔亮氨酸反应浓度为25 mg.mL-1,最佳收率可达90.63﹪。
- 梁才罗晨周雅琼陈国胜王旻
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究被引量：2
- 2011年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)3连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-LayerInterferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。
- 丁笠王秀云齐海迪李海鑫周雅琼陈耀祖张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
- 全人源抗血管内皮细胞生长因子受体2单链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及基因工程设计、表达的对人血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)具有特异性亲和力的全人源单链抗体。本发明还提供重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的核苷酸序列，以及包含重链可变区和轻...
- 王旻张娟李海鑫陈卫周雅琼
- 全人源的抗人表皮生长因子受体的单链抗体及其应用
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体地公开了一种全人源抗EGFR单链抗体E10、其制备方法及用途。本发明还公开了E10的重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸序列，以及包含重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸...
- 王旻周雅琼张娟
- 文献传递
- 抗血管内皮生长因子受体2单链抗体的筛选及表达纯化被引量：4
- 2009年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子与血管内皮生长因子受体2的结合作用,采用噬菌体展示技术,从噬菌体抗体库中筛选得到血管内皮生长因子受体2的高亲和力抗体,再通过PCR分析,基因测序,序列比对等步骤挑选出高亲和力的抗体片段的基因序列AK404,转化至大肠杆菌HB2151中,大量发酵进行可溶性表达,将表达产物通过镍柱纯化,最后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升发酵液614μg。定量ELISA分析显示,AK404与受体的结合呈剂量依赖性,进一步研究开发可以用于抗血管生成抗肿瘤的治疗或肿瘤诊断。
- 李海鑫张娟钱永军陆文杰林旭升周雅琼王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2噬菌体展示单链抗体
- 抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 针对EGFR或VEGFR信号通路的相互作用导致的耐药性,为增强抗EGFR或抗VEGFR2抗体单独使用疗效不佳的癌症的治疗效果,本文利用重叠PCR将抗人EGFR胞外区单链抗体基因scFv-E10和抗人VEGFR2(KDR)的单链抗体基因scFv-AK404R融合在一起,得到抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体(bispecific single-chain diabody,scDb)基因,scDb的连接肽序列为15个氨基酸(G4S)3,在肽链的C端引入His标签及myc标签。将scDb基因连接入载体pHEN2,转化大肠杆菌HB2151并诱导表达,经镍柱纯化获得电泳纯scDb蛋白,产量约为570μg.L 1发酵液。ELISA测定显示,scDb与EGFR胞外区的结合与亲本scFv-E10相当,与KDR胞外区的结合略低于亲本scFv-AK404R,表明抗EGFR/抗KDR scDb可与EGFR和KDR两种抗原特异性结合,可用于进一步的抗肿瘤活性研究。
- 周雅琼张娟金海珍何远王彤王旻
- 关键词：表皮生长因子受体血管内皮生长因子受体2双特异性单链抗体单链抗体原核表达
- 一种靶向EGFR/KDR特异性双链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及抗肿瘤表皮生长因子受体(EGFR)和抗肿瘤血管内皮生长因子受体(VEGFR／KDR)的双特异性双链抗体(Bispecific diabody，Db)的制备方法及用途。本发明利用基因工...
- 张娟王旻金海珍徐孟怀周雅琼
- 文献传递
- 螺旋藻中α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及动力学被引量：10
- 2008年
- 研究与开发了钝顶螺旋藻中的α-葡萄糖苷酶抑制剂。采用氯仿-甲醇溶液浸提、大孔吸附树脂脱色、硅胶层析柱,Saphedex LH-20柱层析等步骤分离纯化得到α-葡萄糖苷酶抑制剂;利用紫外及红外图谱分析了所提抑制剂结构;采用双倒数作图法研究其抑制动力学特性。从螺旋藻分离的α-葡萄糖苷酶抑制剂达到了色谱纯,通过多种色谱分析,推测该试样为带有共轭体系的多羟基酯类化合物。对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制效果,抑制剂质量浓度为0.18 g/L时,抑制率达73%;动力学研究表明为典型的非竞争性抑制,为进一步的研究与开发奠定了基础。
- 张哲王旻尹鸿萍杨烨周雅琼蔡寅
- 关键词：Α-葡萄糖苷酶抑制剂分离纯化钝顶螺旋藻
- 全人源的抗人表皮生长因子受体的单链抗体及其应用
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体地公开了一种全人源抗EGFR单链抗体E10、其制备方法及用途。本发明还公开了E10的重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸序列，以及包含重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸...
- 王旻周雅琼张娟
- 全人源抗血管内皮细胞生长因子受体2单链抗体
- 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及基因工程设计、表达的对人血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)具有特异性亲和力的全人源单链抗体。本发明还提供重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的核苷酸序列，以及包含重链可变区和轻...
- 王旻张娟李海鑫陈卫周雅琼
- 文献传递
