南文龙 作品数:98 被引量:266 H指数:9 供职机构: 中国动物卫生与流行病学中心 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家科技支撑计划 江苏省博士后科研资助计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 哲学宗教 更多>>
中国山羊痘弱毒疫苗AV41株基因组分子标记的比较分析 被引量:2 2021年 为鉴别我国山羊痘病毒(GTPV)弱毒疫苗AV41株与牛结节性皮肤病病毒(LSDV)野毒株,运用生物信息学方法将AV41株基因组全序列与GenBank中已发表的LSDV、GTPV和绵羊痘病毒(SPPV)基因组进行比较,筛选AV41株基因组分子标记。采用我国不同厂家来源的AV41株疫苗测序验证分子标记相关序列,并与我国LSDV野毒株相应位置序列比较。结果显示,通过基因组比较分析共筛选获得分子标记19个,经测序确认其中7个为AV41株基因组独特分子标记,包括DNA ligase基因2433A2434、Kelch-like protein基因1831A1832、GTPV_gp020基因G203A、GTPV_gp021基因C681T、DNA-binding viron core protein基因C47T、RNA polymerase subunit基因T64C和Myristylated protein基因C746A,而我国LSDV野毒株相应位置序列未见上述变化。本研究揭示了AV41株基因组独特分子标记分布情况,可用于我国牛结节性皮肤病疫情防控中与LSDV野毒株的分子鉴别。 陆游 南文龙 巩明霞 李林 邹艳丽 吴晓东 彭大新 陈义平关键词:分子标记 猪细小病毒病血清抗体VP2-ELISA检测方法的建立 2016年 利用纯化的猪细小病毒VP2蛋白为抗原,建立检测猪细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA。最佳反应条件为:抗原包被浓度300 ng/孔,4℃过夜,待检测血清1:50稀释。与猪细小病毒病阳性血清呈阳性反应,与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪日本脑炎和猪圆环病毒病等5种疾病的阳性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数均小于10%。用该方法与Ceditest PPV猪细小病毒抗体检测试剂盒对102份血清进行平行检测和比较,间接VP2-ELISA的敏感性为93.8%,特异性为81.1%,符合率为89.2%。结果表明,猪细小病毒血清抗体间接VP2-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪细小病毒感染的血清抗体检测。 周洁 周洁 南文龙 何远清 殷黎静 任倩 陈义平关键词:猪细小病毒 抗体 七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响 被引量:7 2021年 为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。 南文龙 巩明霞 陆游 李林 王清华 吴晓东 陈义平关键词:非洲猪瘟 消毒剂 荧光定量PCR 消毒效果 鹌鹑禽流感免疫防制程序的研究 被引量:1 2010年 禽流感是由A型流感病毒引起的、主要流行于禽类的一种传染快、死亡率高的疾病,广泛发生于世界各地,严重地威胁着养禽业发展。在1997年香港禽流感事件中,H5N1 AIV首次突破种间障碍直接感染人并引起人死亡,引起了全世界的关注。近年来,世界许多国家和地区暴发猪流感疫情,严重地威胁着畜牧业大发展。据WHO公布,截止到2009年,世界各地暴发了虎、鸭、猫、鹌鹑、 金明兰 侯继波 南文龙 鲁会军 金宁一关键词:禽流感 免疫防制 鹌鹑 A型流感病毒 H5N1 一种牛种布氏菌快速检测方法 本发明提供一种牛种布氏菌的RPA快速鉴别检测方法,其中所使用的引物组的序列为SEQ ID NO:1‑4。本发明引物组及方法的优点如下:1)高效灵敏:30min即可完成扩增,扩增模板的最低检出限为1.0×10<Sup>‑2... 陈义平 秦立得 南文龙 谭鹏飞 巩明霞 张凤霞文献传递 Asia 1 FMDV重组鸡痘病毒在豚鼠体内免疫原性和体内分布 被引量:1 2018年 为检测Asia1口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)重组病毒免疫原性和安全性,将构建表达Asia1型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)3C基因、P1—2A基因和猪白细胞介素18(Interleukin 18,IL-18)基因的重组鸡痘病毒rFPV-P1—2A-3C和rFPV-3C—P1—2A-IL-18间隔2周免疫豚鼠3次,进行特异性抗体、中和抗体、淋巴细胞增殖、淋巴细胞亚类数量、IFN—γ、攻毒保护以及体内分布研究。重组鸡痘病毒可有效刺激豚鼠产生特异性抗体、中和抗体、T淋巴细胞亚类数量、IFN-γ分泌均显著高于对照组;重组鸡疽病毒rFPV-3C-P1—2A—IL-18的T淋巴细胞亚类数量、T淋巴细胞转化和IFN-γ分泌高于重组病毒rFPV-P1—2A-3C免疫组;2个重组病毒的攻毒保护率分别为4/5、3/5。2个重组病毒在接种最早12h可检测到重组病毒的基因,最晚7d可检测到重组病毒的基因。结果表明重组鸡痘病毒rFPV—P1—2A-3C和rFPV-3C-P1—2A—IL-18具有良好的免疫原性,可以有效抵御病毒的攻击,体内残留时间短,对免疫动物安全,为开发、应用新型FMDV疫苗奠定了基础。 金明兰 霍晓伟 鲁会军 朱战波 刘存霞 南文龙 马鸣潇 金宁一关键词:免疫原性 攻毒保护 人用布氏菌弱毒疫苗株104M的快速检测方法 本发明的目的是提供一种人用布氏菌弱毒疫苗株104M的Taqman-MGB荧光定量PCR快速检测方法。本发明用于检测人用布氏菌弱毒疫苗株104M的引物组,其序列为SEQ ID NO:1-3。本发明引物组的高效灵敏:在1.5... 陈义平 南文龙 王勇 巩明霞 张风霞 张悦勇文献传递 三种感染动物阳性血清与口蹄疫病毒重组非结构蛋白的反应原性 被引量:2 2017年 本试验通过生物信息学技术比对分析GenBank中口蹄疫病毒(A型、O型和亚洲1型)非结构蛋白的保守序列,根据大肠杆菌密码子偏好性,优化合成了非结构蛋白基因,经过测序和转化,筛选到能够表达重组非结构蛋白的阳性重组菌株。经过Western-blot试验,证明表达的重组非结构蛋白能分别与口蹄疫病毒感染的牛、羊和猪阳性血清发生特异性反应。该重组蛋白待进一步验证后,可用于口蹄疫病毒感染动物的鉴别检测试剂盒研究。 孙学强 邵卫星 张如民 南文龙 张兴进 宫枫举 张秀娟 刘爽关键词:感染血清 反应原性 双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在BHK细胞中的表达 被引量:1 2010年 目的构建双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素真核表达载体,并在幼仓鼠(BHK)细胞中进行表达。方法通过PCR方法分别改造流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA基因片段,在融合片段间引入具有柔性功能的(G4S)3linker和具有自裂解功能的口蹄疫蛋白2A linker。将融合后的基因片段H5HA-H7HA克隆至真核表达载体pVAX1。选用BHK真核表达细胞系,用脂质体转染法将纯化后的表达质粒在细胞进行表达,转染后48h,用间接免疫荧光法(IFA)检测目的基因的表达情况。结果表达双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA经酶切和测序证明构建正确。转染重组质粒的BHK细胞可检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA,并在BHK真核细胞中正确表达,为H5、H7双亚型核酸疫苗的研究奠定了基础。 白靓 金宁一 成岩 石毅 王芳 鲁会军 南文龙 关铭关键词:流感病毒 血凝素 真核表达 BHK细胞 鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律 2011年 采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1~8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安全性进行初步评价。在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化;抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同。表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好。 金明兰 侯继波 南文龙 鲁会军 马鸣潇 郑敏 金宁一关键词:鸡痘病毒 抗体 鹌鹑