加尔肯 作品数:36 被引量:54 H指数:5 供职机构: 新疆农业大学动物医学学院 更多>> 发文基金: 新疆维吾尔自治区自然科学基金 新疆维吾尔自治区重大科技专项 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 轻工技术与工程 医药卫生 更多>>
马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立 被引量:6 2014年 本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。 杨夷平 刘建华 冉多良 许全圆 李娜 加尔肯关键词:环介导等温扩增技术 马疱疹病毒1型ORF30基因的克隆及原核表达 2021年 近些年来,马疱疹病毒性脑脊髓病的出现频率越来越高,对养马业和赛马业的危害很大。国外许多研究表明,该病神经症状的出现与该病毒编码DNA聚合酶催化亚基的ORF30基因单核苷酸点变异之间具有显著性关联。为获得大量EHV-1病毒DNA聚合酶并进一步研究ORF30基因SNP对DNA聚合酶活性和功能的影响研究奠定基础,本研究以EHV-1-XJ2015毒株基因组DNA为模板,扩增ORF30基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核表达质粒pET-32a-ORF30,并转化宿主菌E.coliBL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白分子量约为39kDa,Westernblot检测证明ORF30编码的蛋白能与EHV-1阳性血清产生特异性免疫反应,具有较强的反应原性。通过原核表达获得的DNA聚合酶具有较好的抗原性和特异性。 加尔肯 库来汗·巴依多拉 贾萨尔·阿达力 尼加提·阿地力江 伊力扎提·吐尔洪 库尔班妮萨·玉苏普 海拉提江·赛依提汗 刘建华关键词:基因克隆 原核表达 马疱疹病毒1型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2 2021年 为快速准确地检测马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1),本研究根据EHV-1基因组序列进化分析筛选出特异性较高的ORF68基因的保守区域设计引物与探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,最低检测量为10.2拷贝/μL,比常规PCR敏感1000倍;特异性强,检测EHV-2、EHV-4、EHV-5、马动脉炎病毒和马流感病毒均无交叉反应;重复性好,组内及组间样本检测的Ct值均小于等于2%;对2020年收集的60份伴有呼吸道症状的马匹鼻试子进行检测分析显示本方法的阳性检出率(26.67%)高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(23.33%)和常规PCR(21.67%)。本研究建立了一种快速、灵敏、稳定、特异性强的TaqMan荧光定量PCR检测方法,可用于EHV-1的快速诊断和核酸定量检测,为EHV-1的防控工作提供了有力手段。 胡月 刘建华 王雪竹 车传忠 吴桂灵 加尔肯 冉多良关键词:荧光定量PCR TAQMAN探针 牛病毒性腹泻/粘膜病ELISA方法的建立及血清学调查 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科,瘟病毒属成员,是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛... 加尔肯关键词:牛病毒性腹泻病毒 间接ELISA方法 血清学调查 文献传递 新疆褐牛CD46基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 2017年 旨在克隆并表达新疆褐牛CD46基因,制备其多克隆抗体,为进一步研究牛CD46分子生物学功能奠定基础。采用RT-PCR方法从新疆褐牛脾脏中扩增CD46基因全长,进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析,将CD46部分序列亚克隆于pET-28a(+)和pVAX1载体中。将阳性重组质粒pET-28a-△CD46转化于E.coli Rosetta-gamiB(DE3)感受态细胞,诱导表达截短CD46蛋白。用切胶纯化的His-△CD46融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;采用ELISA测定多克隆抗体的效价;取无内毒素重组质粒pVAX1-△CD46转入BHK-21(仓鼠肾细胞)细胞,表达产物以制备的多克隆抗体为一抗,采用Western blot法检测该多克隆抗体的特异性。CD46基因的测序结果表明,部分基因蛋白表达、纯化条带大小与预期一致;制备的抗牛CD46多克隆抗体效价高于1∶128 000,并具有良好的特异性。 木哈买提江.铁格斯 张慧敏 杜润慈 加尔肯 苏战强 冉多良 刘建华关键词:新疆褐牛 CD46 融合蛋白 多克隆抗体 牛传染病的诊治——巴氏杆菌病 2010年 牛巴氏杆菌病是一种常见的牛传染病,该病的流行和蔓延严重影响了牛的健康成长,阻碍了牛养殖业的发展,文章就如何诊断和防治牛巴氏杆菌病进行了论述,以期为牛养殖者提供参考。 加尔肯关键词:巴氏杆菌病 养殖业 马疱疹病毒1型gp2基因分子特征 2022年 为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相似性达90.38%;gp2蛋白预测包括1个信号肽、1个螺旋跨膜结构域和1个核外运信号;gp2蛋白二级结构以无规卷曲为主,高达88%,极性分子居多,亲水性氨基酸占52.02%,第25~130位和第273~565位氨基酸亲水性和抗原性较强,易形成潜在的抗原表位。由此可见,gp2基因属于EHV-1较保守的基因,gp2蛋白是分泌型蛋白,且具有良好的抗原性。本试验为进一步解析EHV-1 gp2基因及其编码蛋白功能、制作基因工程疫苗和诊断试剂提供了生物信息学依据。 刘建华 吴桂灵 胡月 加尔肯 贾钦瑞 孙文程 撒瑞雪 张嗣玉 冉多良关键词:分子结构 生物信息学分析 兽医传染病学实验教学中的生物安全问题与对策 2023年 动物传染病实验室的生物安全管理是动物传染病学实验教学中必不可少的重要工作,实验课中的任何不当操作或失误都可能引发严重的生物安全问题,因此在确保教学质量的情况下,如何做好生物安全工作,成为兽医传染病学实验教学的重要研究课题。探讨了兽医传染病学实验教学的实验室管理、试验动物管理、动物采样及动物解剖等环节中存在的生物安全问题及其应对措施。 加尔肯 刘建华关键词:兽医传染病学 实验教学 生物安全 新疆1株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析 2022年 为了解乌鲁木齐市鸡传染性支气管炎(IB)的流行特征,本研究利用鸡胚培养、RT-PCR、新城疫病毒(NDV)干扰及鸡胚半数感染量(EID_(50))测定等多种方法分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),将其命名为IBV/CK/CH(XJ)/01/2020。对其S1基因进行序列测定及比对分析发现,该分离株在鸡胚上连传5代出现侏儒胚现象,并且可以抑制NDV在鸡胚中的增殖,经计算其EID_(50)为10^(-4.58)/0.1 mL,为中等毒力毒株,攻毒组与正常组比较,雏鸡气管内有大量黏液且肺脏肿大,表现为呼吸型毒株特征,且其S蛋白裂解位点序列为HRRKR,与TC07-2、GX-NN0903等毒株形成一个独立的发育进化群,均属于TC07-2/GVI-1型IBV;与国内常用的H120、H52、M41等疫苗株的同源性仅为59%-65%。本研究为新疆地区IB的流行病学提供参考,也为当地IB的防控提供了理论依据。 刘建华 马彩红 加尔肯 胡月 孙文程 阿里木江·喀迪尔 苏战强 冉多良关键词:传染性支气管炎病毒 S1基因 乌市某鸡场禽致病性葡萄球菌的分离鉴定与药敏试验 被引量:3 2013年 鸡葡萄球菌病是由致病性葡萄球菌引起的一种急性败血性或慢性禽传染病,临床主要表现为:急性败血症、关节炎、眼炎、脐炎、皮肤坏死和骨膜炎。该病一年四季均可发生,雏鸡发病率高,死亡快,成鸡多为慢性经过,是家禽养殖中危害严重的疾病之一。新疆乌鲁木齐市某鸡场饲养的5000只艾维因肉种鸡,在65日龄时出现少数鸡只精神沉郁、食欲减退、趾关节肿胀、跛行或不能站立、喜伏卧等症状,呈渐进性消瘦,常常衰竭而死。患病鸡只剖检病变为关节肿大,滑膜增厚,关节囊内积聚浆液性渗出物;胸、腹部皮下充血、出血;心、肝、脾、肺、肾肿大,有灰白色坏死点或坏死灶。根据临床症状及剖检病变,初步诊断为鸡葡萄球菌病。为了探明发病原因, 刘建华 党文江 加尔肯 苏战强 扈鸿霞 冉多良关键词:致病性葡萄球菌 家禽养殖 药敏试验 鸡场 鸡葡萄球菌病 急性败血症