刘柏宏
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的发酵过程优化被引量：5
- 2014年
- 为了实现重组角蛋白酶在基因工程菌Bacillus subtilis WB600中的高效生产,在3L发酵罐中对发酵条件和补料策略进行了优化,建立了补料分批发酵工艺.研究发现,两阶段控制pH,前6小时控制pH 7.0,后期控制pH 8.0、DO 20％,发酵过程以葡萄糖为流加碳源,7～11 h以μ为0.15 h-1指数流加、12～15 h以μ为0.1 h-1指数流加、16～27 h恒速流加葡萄糖3 g/（L·h）,在30 L发酵罐水平上,27 h酶活达到864 U/mL,生产强度为31.8 U/（mL·h）,国外报道的酶活达到2 900 mL,酶活在国内属领先水平,为重组枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的工业化生产打下了坚实的基础.
- 刘文涛刘柏宏张娟李江华陈坚堵国成
- 关键词：发酵优化角蛋白酶
- 地衣芽胞杆菌来源角蛋白酶N端对活力及其热稳定性的影响被引量：3
- 2014年
- 【目的】通过对一株地衣芽孢杆菌来源的角蛋白酶N端进行分子改造,研究其对角蛋白酶活力和热稳定性的影响,进而提高角蛋白酶的热稳定性。【方法】将角蛋白酶N端前5个氨基酸进行分段缺失,并通过序列比对将N端的前5个氨基酸替换为来源于Thermoactinomyces vulgaris的嗜热蛋白酶的N端,将野生型和突变体角蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中进行表达,并对重组酶进行纯化与酶学性质研究。【结果】角蛋白酶N端不同长度的缺失大幅度地降低了角蛋白酶的活力,其中缺失前5个氨基酸完全丧失了酶活力。将角蛋白酶N端前5个氨基酸替换为嗜热蛋白酶N端前12个氨基酸,虽然降低了近70%的活力,但是却增加了角蛋白酶的热稳定性,60°C条件下的半衰期t1/2由原来的9 min提高到20 min。【结论】角蛋白酶的N端对其酶活力具有较大的影响,与嗜热蛋白酶来源的N端进行替换可以有效提高角蛋白酶的热稳定性。
- 刘柏宏张娟堵国成陈坚廖祥儒
- 关键词：角蛋白酶N端热稳定性
- 来源于地衣芽胞杆菌的角蛋白酶在大肠杆菌中的表达、理化性质及其发酵优化被引量：4
- 2013年
- 为了提高角蛋白酶在大肠杆菌中的胞外表达量并了解其酶学性质,从一株具有羽毛降解能力的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis BBE11-1)中克隆获得全长为1 140 bp的角蛋白酶基因ker,将去掉自身信号肽全长为1 053 bp的ker基因与质粒pET-22b(+)进行连接并转化到大肠杆菌BL21宿主中获得重组菌株.此后,采用疏水苯基层析柱对所表达的角蛋白酶进行纯化,获得分子量(Mr)大小约32×103的重组角蛋白酶.酶学性质研究表明,该重组角蛋白酶最适温度为50℃,最适pH值为10,属于丝氨酸蛋白酶,金属离子Mg2+和K+对酶活力有促进作用,而Mn2+对其有抑制作用.经优化后,该酶胞外酶活在诱导温度20℃、IPTG 0.05 mmol/L、甘氨酸浓度150 mmol/L以及酵母粉浓度60 g/L的条件下可达460.2 U/mL.研究表明,优化培养条件可以较好地提高角蛋白酶在大肠杆菌中的表达量,结果为利用基因工程菌生产角蛋白酶奠定了基础.
- 刘柏宏张娟方真刘文涛堵国成陈坚廖祥儒
- 关键词：角蛋白酶大肠杆菌酶学性质发酵优化
