刘居理
- 作品数：21 被引量：5H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省卫生厅资助课题更多>>
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- 阴道毛滴虫、小鼠LAG1基因启动子区分析和阴道毛滴虫肌动蛋白cDNA克隆、表达
- 研究目的:(1)克隆并分析小鼠及阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)长寿保障基因LAG1启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控奠定基础;(2)克隆阴道毛滴虫肌动蛋白基因片段,表达及...
- 刘居理
- 关键词：阴道毛滴虫肌动蛋白细胞衰老CDNA克隆
- 文献传递
- 阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2006年
- 目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的基因组DNA进行测序。利用BLASTP,RPS-BLAST和ClustalW等工具进行序列分析。结果TvRRascDNA序列全长705对碱基,读码框含615对碱基,推测蛋白质序列具205个氨基酸。序列分析显示该基因的基因组DNA序列含有5′端ATG起始密码子和3′端的终止密码子,与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子;进一步分析表明该基因系RRas亚家族的同源基因,其氨基酸序列与人类和小鼠的RRas同源性最高(两者的一致性均为51%,相似性均为70%),同时拥有人类RRas基因高度保守的结合GTP的结构域和完全一致的效应结构域。进化树分析表明该基因与人类的RAS原癌蛋白基因分支及RRas分支聚类。结论获得了阴道毛滴虫RRas同源基因。
- 许铭炎傅玉才刘居理张仁利
- 关键词：阴道毛滴虫基因克隆
- 三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究
- 目的我们前期的研究表明PNS能够抗SGOD诱导的H9c2细胞凋亡,本论文我们将探讨PNS抗缺血诱导的心肌细胞凋亡的可能作用机制。方法将心肌H9c2细胞株分为正常对照组（control）,模型组（model）和PNS组。c...
- 陈少贤刘居理刘晓颖林秋雄麦丽萍朱杰宁单志新余细勇杨敏
- 关键词：PNS凋亡心肌缺血MIF
- 文献传递
- 血管紧张素Ⅱ通过AP-1调控内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子的表达
- 2009年
- 单志新林秋雄杨敏邓春玉朱杰宁麦丽萍刘居理符永恒林曙光余细勇
- 关键词：AP-1巨噬细胞移动抑制因子动脉粥样硬化
- HSP60介导miR-1和miR-206参与葡萄糖诱导的心肌细胞凋亡
- 目的:微小RNA(miRNA)可以在转录后水平抑制目的基因的表达,参与了多种生物学和病理学过程。热休克蛋白(HSP)60是miR-1、-206可能作用的靶基因,本文将研究Hsp60、miR-1、-206在葡萄糖诱导的心肌...
- 单志新林秋雄邓春玉朱杰宁符永恒麦丽萍刘晓颖刘居理余细勇
- 克隆并应用计算机软件分析小鼠LASS1基因启动子区的特征
- 2007年
- 目的:克隆并应用计算机分析小鼠LASS1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控奠定基础。方法:实验于2006-03/07在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。培养EC109细胞株,预测小鼠LASS1基因启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,构建重组质粒pGEM-T-501、pGEM-T-181、pGEM-T-26,并转化JM109感受态菌,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,酶切pGEM-T-501、181、26重组质粒及pGL3-Basic、pEGFP-1载体,制备插入片段和载体,构建重组表达质粒pGL3-501、pGL3-181和pGL3-26及pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26,转化JM109感受态菌。用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①在预测启动子区构建了3种荧光素酶报告基因表达体系及3种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系,分别为pGL3-501(-501bp～+106bp)、pGL3-181(-181bp～+106bp)、pGL3-26(+26～+106)、pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26。②pGL3-501表达载体与pGL3-181表达载体荧光素酶表达活性相近,pGL3-26表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,+26bp～+106bp无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-501和pEGFP-181有明显的绿色荧光蛋白表达,pEGFP-26和空载体pEGFP-1无表达活性。结论:-181bp～+26bp区域含有小鼠LASS1基因转录所必需的基本启动子序列。其中2个SP1保守序列是小鼠LASS1基因启动子所必需的。
- 刘居理傅玉才许铭炎许锦阶
- 关键词：基因启动子小鼠
- 一个新的阴道毛滴虫Ras同源cDNA克隆的分离及其特征分析(英文)
- 2006年
- Ras超家族是由一群具有保守氨基酸基序的GTP结合蛋白组成,作为双向分子开关对细胞的多种功能具有调节重要的作用。本文报告分离得到一个新的阴道毛滴虫Ras cDNA克隆,命名为TvRasC。TvRasC cDNA编码一个194氨基酸的蛋白,与其它Ras亚家族成员蛋白序列的一致性在46 %到52 %之间。序列分析表明,该蛋白序列拥有Ras亚家族保守的结合GTP结构域。进化树分析发现该基因与人类的Rit基因位于同一亚群。由于Rit家族成员不含有CAAX异戊烯化基序,而TvRasC在羧基末端有一个典型的CAAX异戊烯化基序,因此TvRasC不属于Rit家族成员。在TvRasC的效应结构域内,与位于HRas第33位的天冬氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺,有研究表明这种变化将大大削弱Ras基因家族与下游效应分子Raf的结合能力。因此我们预测TvRasC可能只有低水平的GTP酶活性,这种替换有可能使Raf失去与Ras结合域相互作用,并可能导致有活性有丝分裂蛋白激酶没有刺激效应。有关TvRasC在寄生性阴道毛滴虫原虫中的作用有待进一步研究。
- 许铭炎傅玉才刘居理张仁利
- 关键词：阴道毛滴虫CDNA克隆
- 酵母双杂交诱饵蛋白LASS1融合表达质粒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建酵母双杂交系统诱饵蛋白大鼠LASS1融合表达质粒,为进一步筛选大鼠脑神经元内与LASS1p相互作用的蛋白奠定基础。方法应用PCR方法获得大鼠LASS1基因2个片段,分别克隆入酵母双杂交系统诱饵蛋白质粒载体pGBKT7,转染酵母菌AH109并检测重组质粒的自激活现象及毒性。利用Western印迹检测重组质粒在AH109的表达情况。结果LASS1基因的PCR产物片段大小分别为Flag(111bp)、Slag(109bp);Western印迹结果表明2个重组质粒表达的蛋白均可以与抗c-Myc抗体在22kU处特异性反应;重组质粒转化酵母后无自激活作用。结论重组质粒pGBKT7-Flag、pGBKT7-Slag均能够在AH109内正确表达,可作为酵母双杂交系统诱饵蛋白使用。
- 刘居理傅玉才许铭炎许锦阶
- 关键词：酵母双杂交诱饵蛋白
- 甲硝唑诱导阴道毛滴虫凋亡样细胞死亡(英文)被引量：1
- 2007年
- 目的凋亡或程序性细胞死亡在多细胞生物体中已经被广泛研究,然而,关于单细胞寄生性原生动物细胞凋亡发生的分子机制却知之甚少。本研究旨在了解甲硝唑诱导阴道毛滴虫细胞凋亡的特征。方法培养阴道毛滴虫并用不同浓度的甲硝唑进行处理。在不同的时间间隔进行活细胞计数。提取甲硝唑处理过的阴道毛滴虫基因组进行DNA断裂片段检测。用DNA断端末端标记(TUNEL)法测定甲硝唑处理后阴道毛滴虫核酸内切酶活性。流式细胞检测分析脂酰丝氨酸暴露情况。结果甲硝唑可以诱导阴道毛滴虫出现凋亡样细胞死亡。这种凋亡样细胞死亡表现为细胞皱缩,磷脂酰丝氨酸暴露以及核染色体凝聚,但并未检测到寡核苷酸DNA梯带。结论阴道毛滴虫程序性细胞死亡的调节通路不同于多细胞生物体。确定导致原生动物细胞死亡的凋亡通路也许最终可用于鉴定新的治疗靶点。
- 邓致刚黄景政辛致炜张仁利刘居理傅玉才
- 关键词：阴道毛滴虫甲硝唑
- 阴道毛滴虫LAG1基因启动子区克隆及分析
- 2007年
- 本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料。预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455^+55bp)、pGL3-417(-417^+55bp)、pGL3-280(-280^+55bp)、pGL3-202(-202^+55bp)、pGL3-81(-81^+55bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL3-47(-47^+55bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47^+55bp区无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81^+55bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47^+55bp)和空载体pEGFP-1未见表达。因此-81^-47bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列。
- 刘居理许铭炎许锦阶傅玉才
- 关键词：阴道毛滴虫启动子细胞转染
