- 肿瘤坏死因子-α对人喉鳞癌细胞放疗增敏作用的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)对放射抗拒性人喉鳞癌细胞增殖、凋亡的影响及对其放射抗拒性的逆转作用。方法(1)利用MTT法检测TNF-α对人喉鳞癌放射抗拒性细胞系Hep-2R增殖的影响;(2)TUNEL法和流式细胞仪检测TNF-α对Hep-2R细胞凋亡的影响;(3)RT-PCR法测定TNF-α处理、TNF-α联合放疗处理Hep-2R后,细胞凋亡相关基因BaxαmRNA的表达水平;(4)克隆形成实验检测TNF-α对Hep-2R细胞放射敏感性的逆转作用;(5)移植瘤实验检测TNF-α对Hep-2R细胞放射敏感性的逆转。结果(1)TNF-α对人喉鳞癌放射抗拒性细胞系Hep-2R的生长增殖具有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性,其中400u/mL为理想药物浓度。(2)TUNEL结果显示:TNF-α处理后,Hep-2R细胞凋亡率明显增加;流式细胞分析显示:对照组、TNF-α处理组和TNF-α联合放疗处理组Hep-2R细胞的凋亡率分别为10%,30%和55%,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR检测结果表明,TNF-α处理组和TNF-α联合放疗处理组Hep-2R细胞的Baxα基因表达均较对照组细胞明显上调。(4)克隆形成实验结果显示:对照组、TNF-α处理组、放疗组和TNF-α联合放疗处理组细胞的克隆形成率分别为100%,(80±3)%,(58±2)%和(39±2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)裸鼠移植瘤实验结果显示:TNF-α处理组,放疗组和TNF-α联合放疗处理组细胞抑瘤率分别为(15.2±1.9)%,(35.4±2.1)%和(55.1±2.9)%,三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可能通过抑制人喉癌细胞增殖,促进细胞凋亡,从而起到有效的放疗增敏作用。
- 朱圣明宋仕茂吴峰骆志国丁珺吴俊波
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α喉癌凋亡放疗增敏
- 5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠对人结肠癌细胞HT29的抑制作用
- 2010年
- 目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)联合组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(SPB)的抗肿瘤效应及其机制。方法:将HT29细胞分为:对照组、SPB(1mmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)+SPB(1mmol/L)处理组。MTT法测定各处理组细胞的生存曲线,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期。结果:生长曲线结果提示:5-aza-2dC和SPB均能抑制HT29细胞的生长增殖,但差异不明显,联合应用后,细胞增殖得到明显抑制;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:SPB、5-aza-2dC、SPB+5-aza-2dC处理HT29后,细胞凋亡率分别为11.32%、20.25%和42.37%,三者比较有统计学差异(P<0.05);细胞周期分布检测显示:与对照组相比,单用SPB处理细胞,细胞周期分布变化不明显,5-aza-2dC处理细胞后,59.02%的细胞周期阻滞在G1期,而SPB联合5-aza-2dC后,S期细胞比例明显减少,G1期细胞比例可达73.7%,4组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用。
- 宋仕茂朱圣明骆志国丁珺莫正英
- 关键词：DNA甲基化HT29苯丁酸钠
- hTERT启动子调控的异种抗原基因α-1,3GT表达载体的构建及其在肺癌细胞中的靶向表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3galactosyltransferase,α-1,3GT)基因真核表达载体,研究其调控的α-1,3GT在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:将前期克隆并测序正确的猪α-1,3GT基因定向克隆到pEGFP-hTERTp质粒中,构建α-1,3GT真核表达载体pEGFP-hTERTp-GT。分别将pEGFP-hTERTp-GT和CMV启动子调控的α-1,3GT真核表达质粒pEGFP-N1-GT转染端粒酶阳性的人肺癌细胞A549及端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5。RT-PCR检测转染细胞中α-1,3GTmRNA的表达,免疫荧光法和流式细胞仪检测α-gal抗原的表达。结果:成功构建了pEGFP-hTERTp-GT真核表达载体。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均有α-1,3GTmRNA的表达;转染pEGFP-hTERTp-GT的A549中有α-1,3GTmRNA的表达,而端粒酶阴性的MRC-5细胞中无α-1,3GTmRNA的表达。转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均可表达异种移植抗原α-gal;转染pEGFP-hTER-Tp-GT质粒的A549中有α-gal的表达,而MRC-5细胞中无α-gal的表达(P<0.01)。结论:hTERT启动子调控的α-1,3GT基因能靶向性表达在端粒酶阳性的肺癌细胞中,并合成异种移植抗原α-gal。
- 朱圣明郑鸿秦凤王宇王竹骆志国丁珺王艳萍
- 关键词：人端粒酶逆转录酶靶向性表达
