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黄功华: 作品数：20 被引量：42H指数：4; 供职机构：上海交通大学医学院上海市免疫学研究所更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目教育部科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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泛素—核糖体蛋白S27a基因的克隆、测序及其原核GST融合表达和纯化被引量：1: 2005年; 目的:克隆泛素—核糖体蛋白S27a基因并在大肠杆菌细胞内高效表达,并纯化该蛋白。方法:从HL-60细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得泛素/核糖体蛋白S27a的编码区cDNA,将HindⅢ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样双酶切的GST融合表达载体pGEXGST构建为融合表达质粒pGEXGST-S27a,转化感受态的大肠杆菌JM109实现质粒的扩增与纯化,经DNA测序确证后再转化感受态表达菌BL21,表达并纯化出融合蛋白。结果:(1)PCR扩增获得长约560bp的泛素—核糖体蛋白S27a基因片段。(2)SDS-PAGE证明,泛素—核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白的分子量为43kDa。(3)通过过柱法纯化出泛素—核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白。结论:成功克隆出泛素-核糖体蛋白S27a的基因,并在表达菌BL21中可见GST融合表达,并纯化出该融合蛋白,为进一步研究其功能获得了候选蛋白分子。; 曾雪英黄功华; 关键词：基因测序 GST融合表达蛋白纯化

酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：4: 2003年; 酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法 ,蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。; 黄功华梁景耀刘新光梁念慈; 关键词：蛋白激酶CK2 酵母双杂交系统相互作用蛋白

重组文昌鱼非融合蛋白LRR1、LRR2和LRR3的表达方法: 本发明涉及文昌鱼富含亮氨酸蛋白ALM基因及其编码的富含亮氨酸蛋白ALM，以及该蛋白在制备治疗感染性疾病药物中的应用。本发明通过引物扩增基因片段和RACE基因UTR序列，从文昌鱼总RNA中克隆得到ALM基因，其DNA序列如...; 徐安龙黄功华郑婷婷韩燕元少春董美玲; 文献传递

MKP-1在结核分枝杆菌感染中的作用和研究进展: 2017年; 有丝分裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase,MAPK)信号通路是细胞感知外源性刺激并作出有效免疫应答的最重要的细胞内信号通路之一。近年来的研究表明:MAPK的表达异常与结核病的发生、发展密切相关。MAPK磷酸酶(MAPK phosphatases,MKPs)是一类在细胞内水解MAPKs家族的磷酸酶,通过负向调控MAPKs的活性,从而在调节细胞的应激、分化、增殖、凋亡等过程中发挥重要的作用,其中MKP-1是MKPs家族中被报道最多的成员,具有最强的去磷酸化能力。本文综述了MKP-1在结核分枝杆菌感染中的作用和研究进展。; 黄丽军黄功华刘新光; 关键词：结核病

用酵母双杂交系统从hl-60细胞中筛选与人蛋白激酶ck2α′相互作用蛋白的研究: 目的:蛋白激酶ck2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞增殖和分化、信号的转导和加工等方面起重要作用.ck2在多种白血病细胞中活性比相应的正常组织高2~8倍,且ck2的变化与肿瘤的生长情况相关...; 黄功华; 关键词：DNA序列测定; 文献传递网络资源链接

蛋白激酶CK2的反义核酸及其应用: 蛋白激酶CK2,是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,主要存在于细胞质和核质中。CK2的不同于其它类型蛋白激酶的一个重要特点就是它是一种多底物蛋白激酶,迄今为止发现其底物多达300多种。这些底物涉及到...; 黄功华刘新光梁念慈; 文献传递

酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建被引量：3: 2004年; 目的 :用人蛋白激酶 CK2α'(h CK2α') c DNA片段构建酵母双杂交体系中“诱饵”载体。方法 :通过 PCR扩增已构建成功的重组质粒 p Th CKA'获得人 CK2 α'亚基编码区 c DNA,将 Pst /Nde 双酶切的 PCR产物连接到同样酶切的“诱饵”载体 p GBKT7,转化感受态细胞 DH5α获得转化子 ,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行限制性内切酶酶切与 DNA测序的方法鉴定。将 DNA测序验证的 p GBKT7- h CK2α'转染感受态酵母株 AH1 0 9,Western blot鉴定 h CK2α'蛋白表达 ,检测表达产物对报道基因的激活作用及对酵母株AH1 0 9的毒性。结果 :限制性酶切结果表明 ,插入片段和重组质粒的大小与理论值推测值相符。重组质粒 p GBKT7- h CK2α'转染的酵母株AH1 0 9中能够表达 h CK2 α'蛋白 ,p GBKT7- h CK2 α'无自主激活报道基因的能力及对酵母的生长无毒性。结论 :p GBKT7- h CK2 α'酵母双杂“诱饵”载体构建获得成功 ,可应用于酵母双杂交体系。; 梁景耀黄功华刘新光梁念慈; 关键词：蛋白激酶CK2 酵母双杂交 PCR

体外突变技术在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：1: 2003年; 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普通存在的非信使依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工、细胞凋亡等方面起重要作用。体外突变技术是在DNA重组及测序等技术的基础上发展起来的一项技术。; 黄功华刘新光梁念慈; 关键词：蛋白激酶CK2 信号传导

一种可能与人蛋白激酶CK2α'相互作用的蛋白——普利克底物蛋白: 背景与目的:蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,是调节细胞生存、生长和增殖的一个关键性细胞信号转导分子,但其作用的分子机理尚不十分清楚。CK2在多种自血病细胞中活性比相应的正常组织中升...; 黄功华梁景耀刘新光梁念慈; 关键词：酵母双杂交系统相互作用蛋白; 文献传递

一种与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白的cDNA序列测定被引量：1: 2005年; 目的:测定一种与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白的cDNA序列。方法:选择一个与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白的重组质粒pGADT7-LibrarycDNA ,使用BigDyeTM荧光标记终止底物循环测序试剂盒,用载体pGADT7的T7-启动子为测序引物,在ABIPRISM 310型基因分析仪上进行DNA测序。结果:该重组质粒的插入片段与泛素—核糖体蛋白S2 7acDNA序列只有一个碱基的差别。结论:通过DNA测序,该种与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白为泛素—核糖体蛋白S2 7a的变体。; 曾雪英黄功华; 关键词：相互作用蛋白 CDNA