黄丹
- 作品数：14 被引量：29H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省科技攻关计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人Kv1.5胞外环肽段E215抗体的制备与鉴定
- 2010年
- 目的:为研究新的人Kv1.5(hKv1.5)通道/超快激活延迟整流钾通道(Ikur)阻滞剂,通过免疫法制备抗hKv1.5胞外环肽段E215的特异性抗体,并进行鉴定。方法:雄性新西兰大白兔,随机分为免疫组和假性免疫组。从hKv1.5胞外环中筛选出一段短肽E215作为抗原肽免疫动物。免疫组予抗原免疫,2周1次,假性免疫组予0.9%氯化钠溶液免疫,方法同前。实验63 d处死,留取血清,亲合层析法提取、纯化抗肽段E215抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)动态地观察抗体在体内的产生及效价,免疫荧光组织化学及免疫印迹(Western-blot)观察制备的抗体与人心房肌细胞膜及hKv1.5/Ikur通道蛋白的结合。结果:ELISA结果表明,免疫组于实验第28、42、56、63 d血清抗体滴度分别达到1∶6 400、1∶6 400、1∶6 400、1∶12 800;免疫荧光组织化学显示,制备的抗体能结合于人心房肌细胞的细胞膜;Western-blot结果表明,此抗体能特异性结合人心房肌细胞膜上分子量为75000的蛋白(hKv1.5/Ikur通道蛋白)。而假性免疫组未发现相同抗体产生。结论:所制备胞外环肽段E215的抗体能与人心房肌细胞膜上hKv1.5/Ikur通道特异性结合,为下一步实验提供了新的药理学干预手段。
- 戴芝银刘坤曾秋棠刘金平祝聪聪杨晓芳廖玉华王敏陈志坚黄丹刘鸿涛
- 关键词：抗体人心房肌细胞KV1.5
- 急性心肌梗死后1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶的活化与炎症因子水平的关系被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨急性心肌梗死(AMI)后外周血循环单个核细胞(MNC)中1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP-1)的活性与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平的关系。方法:选取AMI组患者46例,稳定型心绞痛组10例,正常对照组10例。用三氯乙酸沉淀法测定MNC中PARP-1的活性;酶联免疫吸附测定法测定血浆中IL-10和TNF-α的水平。结果:所有AMI组患者MNC中PARP-1的活性均显著升高,为正常对照组的4.08倍、稳定型心绞痛组的4.47倍。所有AMI患者血浆中TNF-α、IL-10的水平均显著升高。AMI组患者外周血循环MNC中PARP-1的活性与血浆TNF-α、IL-10的水平呈正相关。结论:患者AMI后外周血血浆中TNF-α、IL-10水平的增高与MNC中PARP-1的活化显著相关。PARP-1可能是免疫炎症系统激活过程中的重要调节因子。
- 黄恺姚兰黄丹杨崇哲李小丽廖玉华
- 关键词：心肌梗死细胞因子
- PARP-1对LPS刺激人外周血单个核细胞HSP70表达的调节作用
- 目的:探讨1型多聚ADP核糖合成酶(poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)对炎性刺激物脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人外周血单个核细胞热休克蛋白70(HSP7...
- 王敏黄丹黄凯
- 关键词：脂多糖炎症反应
- 文献传递
- Ⅰ型多聚ADP核糖合成酶在心肌梗死后大鼠心肌组织中的活性变化及其对相关炎性细胞因子表达的影响
- 2008年
- 目的:探讨Ⅰ型多聚ADP核糖合成酶(PARP1)在心肌梗死后大鼠心肌组织中的表达及活性变化,以及对相关炎性细胞因子[白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和转录因子(NF-κB、AP-1)表达的影响。方法:结扎冠状动脉左前降支(LAD)近端建立急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为AMI组、梗死低剂量PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3AB)干预(3AB30)组、梗死高剂量干预(3AB100)组和假手术组。3AB30组和3AB100组分别在腹腔注射3-AB30mg/kg和100mg/kg,AMI组和假手术组给予同等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射。测定各组大鼠术后第1、3、7天心脏功能,非梗死区PARP1的蛋白表达及活性与IL-6、IL-10、TNF-浕的表达和转录因子NF-κB和AP-1的活性。结果:心肌梗死后非缺血区PARP1表达在第1天即明显增加,至第7天仍高于假手术组,3AB在非梗死区不仅可以显著抑制TNF-α、IL-6以及PARP1的蛋白表达量和PARP活性,也能够降低NF-κB和AP-1在非梗死区的DNA结合能力。结论:PARP1抑制剂能够明显抑制PARP活性和PARP1表达,在AMI早期通过抑制NF-κB和AP-1活性及炎性因子TNF-α和IL-6表达,能改善心脏功能,减轻心肌损害。
- 杨崇哲黄恺胥颖敏黄丹王妍廖玉华
- 关键词：心肌梗死3-氨基苯甲酰胺
- 洛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞多聚ADP核糖合成酶-1活性及表达的影响
- 2013年
- 目的:观察洛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞多聚ADP核糖合成酶(PARP)-1活性及表达的影响。方法:采用PARP活性检测试剂盒和Western blot法检测洛伐他汀作用前后细胞内PARP-1的活性和蛋白表达水平。结果:使用洛伐他汀后,PARP-1的活性和蛋白表达均下调;再加用甲羟戊酸后,PARP-1的活性和表达下调被逆转。结论:洛伐他汀不仅可抑制血管紧张素Ⅱ刺激的心脏成纤维细胞PARP-1的活性及表达,还可在基础状态下抑制PARP-1的活性及表达,以上抑制作用都可以被甲羟戊酸逆转。
- 程溪黄丹王妍黄恺
- 关键词：心脏成纤维细胞洛伐他汀甲羟戊酸
- 多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:观察多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP)抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的乳鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因转录的影响。方法:新生SD大鼠心脏成纤维细胞原代培养,传代。用PARP抑制剂——3-氨基苯甲酰胺(3-AB)预处理细胞,观察3-AB对AngⅡ诱导心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的影响。结果:AngⅡ刺激心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达明显增加,成纤维细胞内PARP活性及PARP1的表达显著增强。使用3-AB抑制PARP1的活性及表达,可以明显降低AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的增加。结论:PARP在AngⅡ诱导的心脏重构过程中发挥了重要的调控作用。
- 李小丽黄恺黄丹杨崇哲姚兰廖玉华
- 关键词：心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶
- 多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ刺激培养心肌细胞异常基因表达的阻止作用
- 2008年
- 目的:观察多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖合成酶(PARP)抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的乳鼠心脏心肌重构的预防作用。方法:新生大鼠心肌细胞原代培养,传代,用PARP抑制剂3-AB预处理细胞,观察PARP抑制剂对AngⅡ诱导心肌细胞PARP激活、PARP1表达,细胞内ROS产生和c-fos,ANP,β/αMHC基因表达的影响。结果:AngⅡ显著诱导心肌细胞PARP激活,ROS产生增加,PARP1、c-fos、β/α-MHC、ANP基因表达增加。给予3-AB预处理可显著抑制AngⅡ诱导的上述变化。结论:AngⅡ可以诱导培养的心肌细胞内PARP激活,PARP1蛋白表达增加,3-AB预处理可以明显降低AngⅡ诱导的心肌细胞内异常基因表达增加,提示PARP1参与了心室重构的发生发展过程。
- 李小丽黄恺黄丹杨崇哲姚兰廖玉华
- 关键词：心肌细胞基因表达
- 缬沙坦对压力超负荷下心脏多聚二磷酸腺苷核糖合成酶活性的影响被引量：8
- 2008年
- 目的:观察缬沙坦对慢性压力超负荷下左心室心肌多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖合成酶(PARP)活性、心脏形态及心功能的影响。方法:Wistar雄性大鼠34只随机分为假手术组(sham组)10只、腹主动脉缩窄组(AC组)12只、腹主动脉缩窄加缬沙坦干预结扎组(Val组)12只。术后24周行心脏超声和血流动力学检查,并取左心室心肌检测PARP活性。结果:与sham组比较,AC组PARP活性显著增强(P<0.01),左心室质量/体重(LVW/BW)显著升高(P<0.05),左心室射血分数显著降低(P<0.05);与AC组比较,Val组PARP活性显著减弱(P<0.01),LVW/BW显著降低(P<0.05),左心室射血分数明显升高(P<0.05)。结论:缬沙坦可抑制压力负荷下心室肌PARP过度激活,并减轻心室重构及心功能的损害。
- 李小丽黄恺黄丹杨崇哲姚兰廖玉华
- 关键词：心室重构
- 1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶对去甲肾上腺素诱导心肌重构的影响
- 2008年
- 目的:探讨1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导培养的大鼠心肌细胞重构过程中的调节作用及其机制。方法:①培养乳鼠心肌细胞,10μmol/LNE刺激心肌细胞24h后,使用实时定量PCR法检测c-fos、ANP、β-MHC、α-MHC基因表达水平;观察抗氧化剂维生素C(VitC)和PARP-1抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)对上述基因表达的影响。②检测心肌细胞内活性氧(ROS)水平,及PARP活性和PARP-1表达水平的变化。结果:NE诱导心肌细胞内c-fos、ANP、β-MHC基因表达水平明显增加。心肌细胞内ROS产生增加,PARP激活,PARP-1蛋白表达亦显著增加。使用VitC减少ROS产生,抑制了NE诱导的PARP-1活性及表达的增加,NE诱导的c-fos、ANP基因表达也显著降低。3AB可明显减少NE诱导的c-fos、ANP、β-MHC基因的表达及β-MHC/α-MHC的比值。结论:NE刺激心肌细胞增加了细胞内ROS的产生,大量的ROS激活了PARP并使PARP-1的表达水平显著增加,PARP-1参与调节了心肌重构过程胚胎基因c-fos、ANP、β-MHC、α-MHC的异常表达。PARP-1可能是心肌重构过程中的重要调节机制之一。
- 黄丹黄恺李小丽王妍杨崇哲姚兰廖玉华
- 关键词：心肌肥大心肌重构基因表达
- PARP-1在LPS刺激人外周血单个核细胞产生炎性因子过程中的重要作用被引量：2
- 2007年
- 目的探讨1型多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]对炎性刺激物脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人外周血单个核细胞产生炎性细胞因子的作用及其机制。方法①对原代培养的正常人外周血单个核细胞给予LPS刺激24h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,结果于450nm波长处测定的光密度值(A值)表示,并观察PARP-1抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)对上述炎性细胞因子表达的影响;②提取培养细胞全蛋白,采用Westernblotting法检测培养细胞内PARP-1蛋白表达水平及3-AB对PARP-1蛋白表达的影响,结果使用灰度值表示。结果空白对照组炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α表达水平(A值)分别为12.40±4.09、43.58±10.43、11.20±2.30、51.36±3.43;LPS刺激组分别为233.87±30.60、320.27±10.13、26.6±2.09、506.47±27.83,均显著高于空白对照组(P<0.01);3-AB抑制组分别为125.04±28.32、208.91±28.76、17.03±2.03、152.86±16.86,均显著低于LPS刺激组(P<0.01),但高于空白对照组。LPS刺激组PARP-1蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.01);3-AB抑制组PARP-1蛋白表达显著低于LPS刺激组(P<0.01)。PARP-1的蛋白表达水平与炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α表达水平均具有明显相关性,r值分别为-0.619(P<0.05)、-0.750(P<0.05)、-0.593(P<0.05)、-0.694(P<0.05)。结论在LPS诱导人外周血单个核细胞炎性反应产生细胞因子过程中,PARP-1的表达水平与炎性细胞因子的表达水平显著相关。PARP-1可能是炎性反应免疫激活过程中的重要调节因子之一。
- 黄丹黄恺李小丽杨崇哲姚兰王敏廖玉华
- 关键词：心肌梗死脂多糖
