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魏双施: 作品数：13 被引量：26H指数：4; 供职机构：东北农业大学更多>>; 发文基金：国家教育部博士点基金黑龙江省青年科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因，根据GoCD3ε胞外区基因特点，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外...; 马波张雪莲李洪涛高明春张文龙魏双施王君伟; 文献传递

鹅IgA重链恒定区的原核表达及其多克隆抗体的制备: 2013年; 为了研究鹅免疫球蛋白的生物学功能,试验采用PCR技术,参考鹅IgA重链恒定区(F)基因序列设计引物,扩增出F基因,构建了含有F基因的重组原核表达质粒pET-28a-GoIgA-C,目的基因为1 339 bp,再进行IPTG诱导表达、ELISA检测和Western-blot分析。结果表明:获得了F的重组蛋白,分子质量约为50 ku,切胶纯化并以其为免疫原制备了多克隆抗体,抗体效价在1∶25 600以上;制备的多克隆抗体具备与鹅IgA反应的性质,与人、猪、牛和鸡免疫球蛋白均不发生反应。说明试验成功获得了F重组蛋白及小鼠多克隆抗体。; 盛巧玲郭永丽魏双施王璞高明春王君伟; 关键词：基因原核表达多克隆抗体

牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究被引量：7: 2008年; 基于对RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,通过计算机辅助软件进行牛IFN-α基因优化,经人工合成优化后的基因与pWL表达载体连接后诱导表达,并对表达条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,其产物分子量约为17ku,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的33%,表达产物以包涵体形式存在。经过包涵体溶解、初步复性后利用CM Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用梯度法进行牛α-干扰素包涵体蛋白质的纯化复性。结果表明,梯度离子交换层析法能有效地复性牛α-干扰素包涵体,复性后的重组牛α-干扰素的纯度达95%,通过离子交换层析柱纯化和复性后,重组牛α-干扰素在MDBK/VSV细胞系上的抗病毒活性为5.56×106u/mg。; 孙仰峰李文辉李勐高明春王薇魏双施王君伟; 关键词：抗病毒活性纯化

可高效表达的成熟鸡α干扰素多肽的制备方法: 可高效表达的成熟鸡α干扰素多肽的制备方法，它涉及鸡α干扰素多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低，以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。方法：一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀...; 王君伟魏双施马波高明春王巍; 文献传递

在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的可溶性犬α7干扰素被引量：5: 2013年; 为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的犬α干扰素(CaIFN-α),本研究从犬肝脏中PCR获得CaIFN-α第7亚型(CaIFN-α7)基因,通过重叠延伸PCR方法在CaIFN-α7的N端融合连接内含肽SspDnaB intein(SDI)基因,并将该融合基因连接至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的CaIFN-α重组质粒。重组质粒在大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导高效表达可溶性CaIFN-α蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析纯化后可以得到纯度较高的目的蛋白。重组蛋白经MDCK-CDV检测系统证明具有生物学活性,为该干扰素的大量生产及临床应用奠定了基础。; 唐博崔子寅王艺萌魏双施高明春王君伟; 关键词：内含肽麦芽糖结合蛋白可溶性表达抗病毒活性

重组鸡α干扰素的高效表达、复性纯化和抗病毒研究: 干扰素是属于被大家所熟知的细胞因子家族中的一员，它们因为可以“干扰”宿主细胞中的病毒复制而得名。自1957年，Isaacs和Lindenmann发现干扰素以来，科研工作者越来越重视干扰素的基因结构、作用机理、基因工程等方...; 魏双施; 关键词：IFN-Α 一步法; 文献传递

鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因，根据GoCD3ε胞外区基因特点，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外...; 马波张雪莲李洪涛高明春张文龙魏双施王君伟; 文献传递

东北白鹅CD8α基因的克隆及其胞外区基因的表达与抗血清的制备: 2015年; 根据GenBank公布的绿头鸭CD8α(AF378373)基因序列设计引物,通过RT-PCR获得东北白鹅CD8α基因。根据测序结果设计特异性引物,克隆得到东北白鹅CD8α胞外区基因,并在pET-30a(+)及pET-28a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导重组蛋白质获得表达,Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白质,以纯化的重组蛋白质(pET-30a-CD8ex)为免疫原制备兔抗鹅CD8α胞外区抗血清。I-ELISA、Western blot分析表明抗血清可特异识别分离获得的东北白鹅外周血T淋巴细胞与重组蛋白质(pET-28a-CD8ex),间接免疫荧光试验证实,纯化的抗血清可特异性识别瞬时真核表达的鹅CD8α胞外区蛋白质。利用激光共聚焦显微镜观察到分离获得的鹅外周血淋巴细胞的细胞膜处出现明显的荧光信号。本研究结果说明制备的抗血清可作为鹅CD8+T淋巴细胞的检测试剂。; 张雪莲魏双施刘晓玫邵建伟张树栋李珊珊高明春张文龙邢育钢马波王君伟; 关键词：东北白鹅 CD8Α 基因表达 T淋巴细胞

可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法: 可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法，它涉及鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低，以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。可高效表达的成熟鸡α...; 王君伟魏双施马波高明春王巍

重组鸡IFN-α的高效表达与一步复性和纯化被引量：3: 2010年; 通过在线网站以及生物学软件分析,将天然鸡IFN-α基因中的稀有密码子同义替换为大肠杆菌偏好的密码子。优化后的基因经人工合成后与温控型表达载体pWL连接并转入大肠杆菌中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达产物的分子质量约为19 ku,表达量占总蛋白的28.3%。表达产物主要以包涵体形式存在,用高浓度变性剂溶解后,采用Sephadex G50凝胶过滤一步复性并纯化重组鸡IFN-α,纯度可达98%以上。每1 L培养基可以得到47.1 mg的重组鸡IFN-α,产出率达34.14%。表达的重组鸡IFN-α在CEF/NDV检测系统上的比活性为1.12×108U/mg。; 魏双施王艺萌王巍孙仰峰王君伟; 关键词：Α-干扰素一步法