韩俊英
- 作品数：3 被引量：44H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项山东省博士后创新项目公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 脊尾白虾热休克蛋白HSP90基因的原核表达与鉴定被引量：7
- 2011年
- 将脊尾白虾热休克蛋白90基因克隆到原核表达载体pET-30a中,经酶切验证和DNA测序鉴定后,将重组质粒转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化温度、时间、IPTG和OD600表达条件进行诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和质谱检测,并用Quantity one软件分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建了含脊尾白虾HSP90基因的重组表达载体pET-30a-HSP90,表达目的蛋白相对分子量为82.7kD,为HSP90蛋白。通过条件优化认为重组菌株Rosetta/pET-30a-HSP90的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时机和诱导时间分别为0.58h、7h。
- 韩俊英李健李吉涛陈萍李华
- 关键词：脊尾白虾热休克蛋白90原核表达
- 中国对虾细胞色素P450基因CYP4原核表达条件优化被引量：11
- 2011年
- 根据克隆得到的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)CYP4基因开放阅读框设计引物,构建了中国对虾CYP4基因原核表达载体p28a-CYP4,并对重组菌株Rosetta/28a-CYP4的原核表达条件进行了优化。结果表明:p28a-CYP4转化Rosetta后可实现CYP4基因的原核表达,SDS-PAGE分析显示其在56.0 kDa处有显著诱导条带;通过对诱导温度、IPTG浓度、诱导时机(OD600)及诱导时间的优化表明,重组菌株Rosetta/p28a-CYP4的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.2 mmol/L,最佳诱导时机及诱导时间分别为0.59和6 h。
- 张喆李健王芸韩俊英
- 关键词：细胞色素P450原核表达
- 脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析被引量：28
- 2011年
- 克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。
- 韩俊英李健李吉涛常志强陈萍李华
- 关键词：脊尾白虾热休克蛋白70基因克隆
