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双阳型梅花鹿脾脏细胞cDNA文库的构建和四个EST的发现被引量：4: 2004年; 目的 :开发和利用中国梅花鹿的基因资源 ,以期拥有一批梅花鹿基因的专利 ,并在专利保护下生产具有自己知识产权的基因工程药物。方法 :用 Trizol试剂提取梅花鹿脾脏细胞中的总 RNA,分离得到 m RNA后 ,用逆转录方法合成与 m RNA互补的 c DNA单链 ,再以此 c DNA单链为模板 ,得到与该 c DNA互补的另一条 DNA链 ,将得到的 DNA双链分子通过合适的 Adapter连入 p SPORT1质粒 ,将此重组质粒通过电转化方法导入 E.coliDH5 α菌 ,得到脾脏细胞的 c DNA文库。筛选出阳性重组子 ,测序并分析得到的 ESTS序列。结果 :成功地构建了双阳型梅花鹿脾脏细胞 c DNA文库 ;并对部分库容 c DNA进行了克隆和测序 ,在这一过程中发现 4个与已知基因同源的表达序列标签 (ESTS) ,其中 2个 EST分别是梅花鹿视网膜母细胞瘤的同源基因和梅花鹿维生素 K依赖性蛋白前体 c DNA的部分序列。结论 :通过构建 c; 陈越王莉卫红飞杨煜于永利; 关键词：基因文库梅花鹿

猪瘟病毒内蒙流行株E2融合基因的构建被引量：2: 2004年; 目的 :获取猪瘟病毒内蒙流行株的 E2基因并构建融合基因。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)技术从感染猪瘟病毒内蒙流行株猪脾脏中获得并扩增 E2基因特异性片段 ,将扩增的 E2基因测序后与Chaperone1 0相连接构成融合基因并连接到表达载体上。结果 :所获得的猪瘟病毒内蒙流行株 E2基因和其他地区猪瘟病毒流行株 (HCL V株 ) E2基因有 4个碱基的差异 ;融合基因 Chaperone1 0 - E2构建成功。结论 :不同地区猪瘟病毒; 任淑萍陈越万敏包木胜吴秀丽于永利王丽颖; 关键词：猪瘟病毒基因逆转录聚合酶链反应基因融合

血栓闭塞性脉管炎血管中膜免疫复合物沉积的电镜观察被引量：3: 2001年; 目的 :探讨血栓闭塞性脉管炎 (TAO)发病机制。方法 :利用透射电镜观察 9例 TAO患者血管中膜免疫复合物沉积与分布。结果 :在 4例 TAO患者血管中膜平滑肌细胞内和平滑肌细胞间观察到高电子致密度的免疫复合物沉积 ,同时还观察到与免疫复合物沉积与损伤相关的淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞。结论 :免疫复合物在血管壁沉积可能与; 崔新明陈越潘力崔丽李颖赵文光栗振宝; 关键词：脉管炎电子显微术 TAO

吉林双阳梅花鹿核蛋白体蛋白L27 cDNA的克隆被引量：2: 2004年; 目的　为了开发我国珍稀动物——吉林双阳梅花鹿的基因资源 ,在分子水平上揭示鹿药材的药理作用。方法　构建了梅花鹿脾脏细胞 c DNA质粒文库 ,克隆了一些看家基因并进行了序列分析。结果　其中的一个序列在核酸及推导的氨基酸序列水平上与编码人、犬、大鼠、小鼠核蛋白体蛋白 L 2 7(ribosom al protein L 2 7) c DNA序列和对应的氨基酸序列高度同源 ,并具有完整的开放阅读框架 (ORF)。结论　发现了双阳梅花鹿核蛋白体蛋白 L2 7全长 c DNA序列 ,此序列已经在 Genbank中登录 ,登录号为 :AF3732 31。; 魏征人陈越杨煜于永利; 关键词：双阳梅花鹿

梅花鹿脾脏细胞cDNA文库的建立及四个表达序列标签的发现: 该论文的工作主要包括以下两个方面:建立双阳型梅花鹿脾脏细胞cDNA文库;对库容cDNA进行克隆和序列测定.在这一过程中,我们发现了四个与已知基因同源的表达序列标签(EST),其中的两个EST分别是梅花鹿视网膜母细胞瘤的同...; 陈越; 关键词：脾脏细胞 CDNA文库克隆

促凋亡蛋白BID多克隆抗体的制备与鉴定: 2008年; 目的制备抗BID的多克隆抗体,用于检测凋亡信号转导过程中BID蛋白的表达。方法采用PCR技术合成编码BID特异性肽段的基因,构建GST融合基因表达载体,在E.coli BL21中诱导表达GST-BID多肽的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B纯化后免疫家兔,免疫血清经纯化后,得到抗BID的多克隆抗体,经Western blot鉴定其特异性。结果通过PCR扩增获得了BID肽段的编码基因;pGEX-6P-1-BID多肽重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;在E.coli BL21中表达了GST-BID多肽融合蛋白;纯化后蛋白纯度达95%;制备的抗BID多克隆抗体能够特异地识别BID蛋白。结论所制备的抗BID多克隆抗体可特异性检测BID蛋白。; 陈越高畅陈勇佟立全孔维金英花; 关键词：促凋亡蛋白多克隆抗体特异性

细胞周期蛋白质依赖性激酶CDK2多克隆抗体的制备和鉴定被引量：2: 2007年; 我们采用PCR技术合成编码CDK2肽段的基因,将其置于谷胱甘肽转移酶(GST)编码基因的下游,在IPTG诱导下,于E.coli中诱导表达了GST-CDK2肽融合蛋白质,以此融合蛋白质作为免疫原免疫家兔制备抗CDK2的多克隆抗体.经Western Blot检测证明:该抗体能够特异地识别CDK2蛋白质,可作为CDK2的特异性检测抗体,用于研究细胞周期和细胞凋亡进程中CDK2的作用.; 李清陈越陈勇佟立全孔维金英花; 关键词：CDK2 多克隆抗体 WESTERN BLOT

梅花鹿两个管家基因部分 cDNA序列的克隆被引量：1: 2003年; 目的 :开发吉林双阳梅花鹿的基因资源 ,在分子水平上揭示鹿药材的药理作用。方法 :从鹿脾脏细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA,构建 c DNA质粒文库 ,从中克隆 2个管家基因并进行序列分析。结果 :成功克隆的管家基因的一个核酸序列及其对应的氨基酸序列与人、大鼠和小鼠蛋白酶体 α3型亚单位 c DNA序列及对应的编码氨基酸序列高度同源 ;另一个管家基因的序列及对应的氨基酸序列与人、大鼠和小鼠转录激活因子 - 4部分 c DNA序列及对应的编码氨基酸序列高度同源。结论 :新发现的双阳梅花鹿蛋白酶体α3型亚单位部分 c DNA序列和转录激活因子 - 4部分c DNA序列 ,已在 Genbank中登录 ( BG67371 3,BG67371 4 )。; 魏征人杨煜陈越于永利; 关键词：基因文库转录因子基因梅花鹿药理作用

重组人Stathmin基因的克隆及表达: 2006年; 目的克隆人Stathmin基因,并利用原核细胞进行表达。方法用PCR方法从Hela细胞cDNA文库中扩增Stathmin基因,PCR产物经TA克隆并测序后,克隆至pGEX-4T-1载体,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果PCR扩增得到460bp的cDNA片段,经测序分析,与GenBank数据库报道的人Stathmin(NM_203401)序列一致,经SDS-PAGE和Westernblot证实诱导表达的蛋白为GST融合蛋白。结论利用原核表达系统表达了人Stathmin,为进一步研究Stathmin结构和功能奠定了基础。; 陈越李晶华何侃金英花; 关键词：STATHMIN 克隆原核表达

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陈越