陈丹扬
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学药学院微生物与生化制药实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用TNF-α诱导建立结肠癌细胞HCT116体外侵袭模型
- 2012年
- 该研究利用TNF-α诱导建立肿瘤细胞体外侵袭模型,为进一步的研究提供基础。利用20 ng/mL TNF-α刺激结肠癌细胞HCT116 7 d后,使用流式细胞术检测HCT116细胞的CCR7和CXCR4受体表达量的变化,并利用Transwell小室检测TNF-α刺激对CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力的影响。实验结果显示,20 ng/mL TNF-α刺激7 d后的HCT116细胞的CCR7和CXCR4表达量均显著增加,侵袭能力也增强,且使CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力显著增强。结果说明了本实验利用TNF-α诱导HCT116细胞,成功建立了HCT116的体外侵袭模型,为接下来的研究提供了细胞模型基础,也为进一步的药物筛选提供了基础。
- 由振源陈丹扬刘楚琪袁慧敏王红胜杜军
- 关键词：TNF-ΑCCR7CXCR4
- TGF-β1诱导人前列腺癌PC3细胞上皮间叶化的研究
- 2013年
- 上皮细胞间叶化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肿瘤侵袭转移密切相关,转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂。该研究旨在探讨TGF-β1对人前列腺癌PC3细胞EMT发生的诱导作用。经TGF-β1处理的PC3细胞,在相差倒置显微镜下观察到细胞形态由上皮型向间叶型转化;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移能力较对照组显著增强;Real-time PCR、Western blot和细胞免疫荧光验证TGF-β1能上调间叶型标记蛋白的表达及下调上皮型标志蛋白的表达。进一步发现,TGF-β1对转录因子Snail的表达没有明显的影响,但是能促进Snail的入核,干扰Snail能逆转TGF-β1对PC3细胞EMT发生的诱导作用。该研究表明,TGF-β1能够介导Snail的入核而激活Snail,促进前列腺癌PC3细胞的发生。
- 陈丹扬刘浩王昊王险峰杜军
- 关键词：TGF-Β1SNAIL前列腺癌
- 姜黄素衍生物T63提高MCF-7/DOX细胞株对多柔比星敏感性的研究被引量：3
- 2013年
- 目的:以人乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(doxorubicin,DOX)的人乳腺癌细胞MCF-7/DOX为研究对象,观察新型多芳烯姜黄素衍生物T63对这两株细胞系的影响,探讨T63能否逆转MCF-7/DOX细胞对多柔比星(DOX)的耐药性。方法:用MTT法检测T63的细胞毒性,同时检测T63对细胞株MCF-7/DOX药物敏感性的影响。用流式细胞术PI单染法分析T63或T63联合DOX对细胞周期的影响,观察细胞凋亡情况。用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达。用Real-time PCR法检测相关基因的转录情况。结果:T63能够有效抑制MCF-7和MCF-7/DOX的增殖,且药效强于姜黄素,而T63对MCF-7和MCF-7/DOX的抑制增殖的效应差异不大。使用非细胞毒性剂量(0.75μmol/L)的T63能有效提高MCF-7/DOX对多柔比星的敏感性。PI单染法显示单独使用T63或者非细胞毒性剂量T63与多柔比星联合使用均能促进细胞凋亡。Western blot结果显示T63能够上调p53、p21、p27、Bim、Bax的表达,下调Bcl-2的表达。Real-time PCR结果表明T63对p53无显著影响。结论:T63可通过促进细胞凋亡的方式逆转MCF-7/DOX对多柔比星的耐药性,从而提示其可能具有临床应用价值,其具体分子机制有待进一步研究。
- 王珊刘浩陈丹扬王红胜卜宪章杜军
- 关键词：姜黄素T63MCF-7
- 人源TNFα的原核表达及活性测定被引量：1
- 2014年
- 目的:利用SUMO标签构建人TNFα原核表达载体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究和利用人TNFα奠定基础。方法:利用PCR技术,从质粒pET32a-hTNFα中扩增出人TNFα成熟肽编码序列,并在其上游添加SUMO标签,与原核表达载体pET28a连接,构建表达质粒pET28a-SUMO-hTNFα。在BL21(DE3)工程菌中表达融合蛋白,经Ni-NTA纯化体系纯化,切除SUMO标签,纯化获得hTNFα成熟蛋白。CCK-8法检测TNFα对L929细胞的细胞毒性,以测定TNFα的生物学活性。结果:成功构建pET28a-SUMO-hTNFα原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在BL21(DE3)工程菌中实现了融合蛋白的可溶性表达。经纯化、水解酶切除标签及再次纯化获得hTNFα成熟肽。CCK-8法检测得所制备的TNFα蛋白ED50约为12.8μg/ml。结论:成功构建原核表达载体pET28a-SUMO-hTNFα,经表达、纯化、酶切及再纯化,获得有生物活性的hTNFα蛋白,为深入研究和利用hTNFα奠定基础。
- 李翠琳张帆陈丹扬王昊郭强杜军
- 关键词：TNFΑSUMO原核表达生物学活性
