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LRRC4融合蛋白的构建与表达研究被引量：4: 2002年; 在前期工作中 ,采用EST介导的定位候选克隆策略 ,克隆了一个在脑瘤中表达下调的脑特异表达新基因LRRC4 ,为进一步研究其结构与功能的关系 ,构建了含LRRC4基因全长编码区的 pGEM TEasy质粒 ,在此基础上通过亚克隆构建了LRRC4融合蛋白的绿色荧光蛋白 (pEGFP C1)表达质粒 ,瞬时转染哺乳动物细胞 ,结果发现表达的LRRC4融合蛋白定位于活细胞的细胞膜上 .同时 ,构建了LRRC4全长和截短型原核表达 pGEX 4T 2质粒 ,成功而高效地在大肠杆菌BL2 1中表达LRRC4融合蛋白 .上述工作为制备多抗。; 王洁如董利蒋明谭琛李小玲向娟娟范松青彭聪唐珂李桂源; 关键词：LRRC4 融合蛋白 EGFP GST 生物信息学

富亮氨酸重复超家族新成员LRRC4的克隆与在脑瘤中的表达分析被引量：24: 2002年; 在染色体 7q31 32多种肿瘤杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)高频区 ,采用表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)介导的定位候选克隆策略获得了一个定位于人染色体 7q31 32的新基因 (GenBank登录号 :AF196 976 ) .该基因编码 6 5 3个氨基酸 ,蛋白质理论pI m :6 5 8 72 7ku .它包含七个典型的LRR、一个IgC2样结构域 .此外 ,它还包含一个N端信号肽、一个C端跨膜区 .其结构特征表明它是富亮氨酸重复(leucine richrepeat,LRR)超家族的新成员 .经过人类基因组命名委员会的同意 ,将该基因命名为LRRC4.此外 ,通过序列相似性匹配还获得了定位于小鼠 6号染色体的LRRC4的同源基因 (GenBank登录号 :AF2 90 5 42 ) .RNA印迹和RT PCR检测发现LRRC4在正常人脑组织相对特异表达 ,而在多种原发性脑瘤表达明显下调或缺失 .综合考虑LRRC4基因的序列特征及表达谱。; 王洁如钱骏董利李小玲谭琛李江张必成周洁李桂源; 关键词：富亮氨酸重复 LRRC4 脑瘤基因表达

脑瘤相关基因LRRC4编码蛋白IgC2结构域的分离、表达与纯化: 我室王洁如博士采用定位候选克隆方法从多种肿瘤高频缺失区7q31-32克隆了一个富亮氨酸重复（leucine-richrepeats,LRR）超家族新成员,经人类基因组国际命名委员会同意,将该新基因命名为LRRC4.该基因...; 董利; 关键词：脑瘤结构域蛋白纯化原核表达; 文献传递

人脑组织特异性分子标志物LRRC4: 一种人脑组织特异性分子标志物。本发明运用PCR方法克隆全长和不同结构域的LRRC4编码蛋白序列，构建相应的LRRC4融合表达质粒，导入大肠杆菌BL21，用IPTG诱导LRRC4融合蛋白，并运用谷胱甘肽亲和树脂纯化法获得纯...; 李桂源王洁如董利李小玲沈守荣周洁范松清; 文献传递

鼻咽癌侯选抑瘤基因BRD7原核表达载体的构建及其表达( 英文)被引量：9: 2002年; BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因 ,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达 ,设计了带有SalⅠ ,NotⅠ酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒 pGEM TEasy/BRD7为模板 ,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架 ,并用SalⅠ ,NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX 4T 2 ,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒PGEX 4T 2 /BRD7,经双酶切鉴定和测序验证 ,表达载体构建正确 .重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm10 5后用IPTG诱导 ,成功表达了一分子质量约为 90ku的融合蛋白 ;37℃诱导 4h后 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳后 ,经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量 2 8 4 8% ,蛋白质印迹 (Western blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功 .这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备 ,进一步开展其功能研究奠定了基础 .; 聂新民张必成向娟娟朱诗国周鸣董利余鹰李小玲李桂源; 关键词：鼻咽癌 BRD7 原核表达载体

染色体7q32-ter鼻咽癌相关基因的初步研究被引量：6: 2001年; 为克隆 7q32 ter区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区的鼻咽癌相关基因 .以STSD7S5 0 9为探针 ,PCR法筛选位于该区的细菌人工染色体 (BAC)克隆 ,应用EST介导的定位候选克隆策略并结合生物信息学筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达增强的ESTAA7734 5 4,cDNA克隆测序和生物信息学资源获取全长cDNA ,DNA印迹和甲基化分析研究其表达增强的机制 .结果表明 ,克隆的NAG18基因cDNA全长 80 2bp ,编码 2 2 7个氨基酸 ,定位于胞核 .该基因分别与人、鼠TAXREB10 7基因及RPL6基因高度同源 .其表达增强的机制不是基因拷贝数的丢失和甲基化位点的改变 .可以断定NAG18是定位于 7q32 ter最小共同缺失区的鼻咽癌相关基因 ,它是一高度保守的基因。; 张小慧李忠花张必成董利周鸣曹利唐珂李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽癌相关基因染色体

用于鼻咽癌早期诊断的NAG7基因诊断试剂盒: 一种用于鼻咽癌早期诊断的基因诊断试剂盒。本发明用多聚酶链式反应(PCR)方法克隆NAG7基因蛋白编码序列，用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白，用HPLC大量分离与纯化蛋白质，采用多点注射法制备兔多抗，骨髓瘤细胞融合法...; 李桂源谭琛彭聪李江董利张秋红; 文献传递

表达序列标签数据库搜索鉴定小鼠UBAP1基因及其数字化表达分析被引量：13: 2002年; UBAP1(ubiquitinassociatedprotein 1)基因是最近克隆的一个定位于人类染色体 9p2 1 2 2鼻咽癌杂合性丢失高频区的泛肽相关蛋白家族新成员 .为了深入研究UBAP1基因的功能 ,利用计算机对表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)、UniGene等数据库进行综合搜索分析 ,结合cDNA克隆测序的方法 ,成功地获得了UBAP1基因在小鼠中的同源基因 .小鼠UBAP1基因cDNA全长为 2 6 76bp ,编码一个由 44 1个氨基酸组成的蛋白质 ,在其蛋白质C端只有一个泛肽相关功能域 (UBAdomain) .与人UBAP1基因相比 ,两者编码的氨基酸序列有 89%相同 .基于EST的数字化表达分析显示UBAP1基因在小鼠正常组织中广泛高表达 .; 钱骏董利张必成王洁如周鸣李忠花李伟芳李小玲李桂源; 关键词：表达序列标签数据库搜索小鼠鼻咽癌基因克隆

后基因组时代的生物信息学被引量：6: 2001年; 生物信息学是 80年代末随着基因组测序数据迅速猛增而逐渐兴起的一门全新的学科。后基因组时代的生物信息学面临新的研究任务 ,通过基因组功能注释 ,完整基因组比较 ,基因之间的相互作用 ,非编码区功能预测等研究将促进对人类及多种模式生物遗传密码的破译。; 董利; 关键词：基因组学生物信息学蛋白质组学功能基因组学

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董利