王皓
- 作品数：12 被引量：38H指数：3
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌的生物治疗研究
- 沈锋施乐华吴孟超吴东孙靖景罗祥基李爱军王皓袁国新崔贞福
- 该项目进行了以下研究。T细胞研究方面：多种粘附分子对T细胞共刺激作用及相关机制为国内最早报道；CD3-TIL、共刺激法诱导的TS-TCL和γ/δT细胞在肝癌治疗中的作用观察为国际最早报道。NK细胞研究方面：发现CD45R...
- 关键词：
- 关键词：肝癌生物治疗
- 肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究被引量：15
- 1997年
- 诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。
- 沈锋王皓谢天培施乐华施乐华刘新垣钱卫珠郭亚军
- 关键词：T淋巴细胞细胞毒性免疫疗法
- 肝细胞癌变时神经节苷脂对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响
- 1997年
- 目的：研究肝细胞癌变时神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３的变化对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响及其在促进肝癌生长中所起的作用。方法：采用放射性核素标记配体受体结合法，及洗脱法测定转铁蛋白与其受体的结合以及转铁蛋白受体介导的内吞作用；用ＭＴＴ比色法测定细胞生长情况。结果：（１）ＧＭ３抑制肝癌细胞的生长，ＧＤ３则促进肝癌细胞的生长；（２）这种影响与转铁蛋白对细胞的作用直接相关；（３）此相关作用不是通过影响转铁蛋白与其受体的结合，而是通过影响转铁蛋白受体介导的内吞作用而实现的。结论：肝细胞癌变时神经节苷脂组成的变化能明显加快转铁蛋白受体介导的内吞作用，增加肝癌细胞对转铁蛋白的摄取，从而促进肝癌细胞的生长与增殖。
- 谢天培钱宝华沈锋沈锋施乐华王皓王皓刘彦君吴孟超王华菁
- 关键词：肝细胞癌变神经节苷脂TF受体介导
- 自然杀伤细胞的独立刺激信号——CD45分子交联
- 1998年
- 目的：探讨表面分子在自然杀伤（ＮＫ）细胞活化中的信号分子作用及其机制。方法：采用多种粘附分子单抗及配体刺激ＮＫ细胞，ＥＬＩＳＡ法定量检测刺激后ＮＫ细胞释放的γ干扰素（ＩＦＮ－γ）作为ＮＫ细胞活化指标，观察各种粘附分子在ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ中的信号作用。结果：单一ＣＤ４５单抗刺激即可使ＮＫ细胞活化；两种分别为ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ亚类的ＣＤ４５单抗及ＩｇＧ２ａ亚类ＣＤ４５单抗的Ｆ（ａｂ）２均体现对ＮＫ细胞的独立刺激作用。结论：ＣＤ４５分子介导的ＮＫ细胞活化与ＣＤ１６－Ｆｃ段间相互作用无关。
- 沈锋王皓谢天培郭亚军吴孟超陈汉钱卫珠
- 关键词：杀伤细胞粘附分子信号传递
- B细胞融合人肝癌细胞疫苗^(60)Co照射后生长及表型的观察被引量：3
- 1999年
- 目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及肝癌抗原（ＧＰ７５）表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经６０Ｃｏ照射的融合细胞失去增殖能力，４ｄ后可见部分细胞死亡，７ｄ后几乎全部死亡。６０Ｃｏ照射后３ｄ内ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及ＧＰ７５表达无明显变化。结论：经６０Ｃｏ照射后融合细胞失去增殖能力。
- 卫立辛钱卫珠阎振林王皓刘彦君罗明赵健谢天培沈锋吴孟超郭亚军
- 关键词：细胞融合钴60B细胞
- pGFP-FL质粒的构建及其在FL基因修饰性肿瘤疫苗中的应用被引量：1
- 2002年
- 目的 构建一个含有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因,并能够用于Ⅲ型酪氨酸激酶受体Flt3的配体（FL）基因修饰性肿瘤疫苗研究的质粒载体。方法 利用常规分子生物学方法设计并构建含有一个FL基因和一个GFP基因的pGFP-FL质粒。在该质粒中,以CMV启动子驱动FL基因,同时以肽链延长因子（EF-1α）启动子驱动GFP基因,并引入原核和真核选择基因KanR/neo。对所获得的pGFP-FL质粒以限制性内切酶酶切鉴定后,再将其导入Hepa1-6细胞内,直接在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况,同时以RT-PCR和PCR产物测序的方法对GFP阳性细胞内FL基因的表达进行检测。结果 质粒的酶切鉴定结果表明所构建的pGFP-FL与预期的结构一致,FL和GFP两者能同时在Hepa1-6细胞内表达。结论 本研究构建了一种新型的FL基因修饰肿瘤疫苗研究载体,位于该载体上的GFP的表达能够反映FL基因的转录表达情况,可以作为FL基因表达的报告基因。
- 卢洋钱卫珠王皓吴孟超郭亚军薛琪
- 关键词：肿瘤疫苗分子生物学质粒载体
- 人IL-12 cDNA的克隆被引量：1
- 1999年
- 目的：克隆人ＩＬ－１２的ｃＤＮＡ。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ从人ＮＣ３７淋巴母细胞中克隆出ＩＬ－１２中两个亚基ｐ３５和ｐ４０的ｃＤＮＡ并进行序列测定。结果：从ＮＣ３７细胞中克隆的ｐ３５ｃＤＮＡ序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＡＦ１０１０６２）与先前登录在Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ上的Ｍ６５２７１（ＮＣ３７细胞来源）和Ｍ６５２９１（ＲＰＭＩ８８６６细胞来源，美国专利号：５６４８４６７）的ｐ３５ｃＤＮＡ序列分别有２处和１处碱基不同：编码第４４位氨基酸残基密码子的第３个碱基Ｍ６５２９１是Ｃ，而Ｍ６５２７１和本研究ＡＦ１０１０６２的相应序列２是Ｇ；编码第２４４氨基酸残基密码子的第３个碱基，Ｍ６５２７１序列是Ｃ，而Ｍ６５２９１和ＡＦ１０１０６２的相应序列是Ｔ；编码第２４７氨基酸残基密码子的第２个碱基Ｍ６５２７１序列是Ｃ，而Ｍ６５２９１和ＡＦ１０１０６２的相应序列是Ｔ。此外，本研究克隆的ｐ４０ｃＤＮＡ序列与登录在ＧｅｎＢａｎｋ的ｐ４０ｃＤＮＡ（Ｍ３８４４４）序列完全相同。结论：尽管本研究克隆的ｐ３５ｃＤＮＡ序列与已知的两种ｐ３５ｃＤＮＡ序列分别有２处和１处碱基不同，但其编码的氨基酸序列却与专利登记的ｐ３５ｃＤＮＡ（Ｍ６５２９１）编码的氨?
- 刘彦君王华菁刘小萍周倩卢洋王皓卫立辛郭亚军
- 关键词：CDNA聚合酶链反应白细胞介素12克隆
- 细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探被引量：2
- 1998年
- 目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。
- 卫立辛钱卫珠闫振林沈锋谢天培王皓刘彦君施军霞吴孟超郭亚军
- 关键词：肿瘤疫苗T细胞免疫疗法
- 人肝癌细胞与自体激活B淋巴细胞融合制备肿瘤疫苗被引量：5
- 1998年
- 目的：观察３例人肝癌组织细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合后融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况，以便为肿瘤疫苗向临床试验过渡提供人体细胞的实验依据。方法：应用聚乙二醇（ＰＥＧ）法将人肝癌细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合，利用流式细胞仪观察融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况。结果：融合细胞表面不仅表达肝癌细胞表面的ＧＰ７５分子，还可表达共刺激分子Ｂ７及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ。结论：人肝癌细胞与其自体激活的Ｂ淋巴细胞融合后的杂交瘤细胞既能表达肝癌细胞表面分子ＧＰ７５，又可表达共刺激信号分子。
- 刘彦君王皓卫立辛沈锋谢天培钱卫珠刘小萍周倩吴孟超郭亚军
- 关键词：肿瘤疫苗肝肿瘤B细胞细胞融合
- 40例原发性肝癌的体外化疗药物敏感试验被引量：1
- 1996年
- ４０例原发性肝癌的体外化疗药物敏感试验王皓，王一，丛文铭，张秀忠，陈汉，吴孟超目前，化疗已成为治疗无法切除的肝癌及预防术后复发的重要手段之一［１］。但是，患者对化疗的反应存在个体差异，影响了治疗的效果。本研究旨在了解原发性肝癌对若干种临床常用化疗药物...
- 王皓王一丛文铭张秀忠陈汉吴孟超
- 关键词：肝肿瘤药物疗法药物敏感试验体外
