王月俭
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：山东省医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划'泰山学者'建设工程专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- α1抗胰蛋白酶角蛋白84和微管蛋白β链在类风湿关节炎滑膜组织中的高表达被引量：2
- 2013年
- 目的研究瓜氨酸化自身抗原在类风湿关节炎（RA）中的表达情况。方法分别对RA患者的滑膜和血清采用二维免疫印迹分析、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱、免疫印迹、免疫组织化学和酶联免疫吸附试验（ELISA）法研究特异性瓜氨酸化蛋白的表达变化；通过ELISA法检测RA患者血清中潜在的自身抗原；采用单因素方差分析、LSD检验、Kruskal-Walls检验以及Spearman等级相关进行统计分析。结果研究发现RA患者的滑膜组织和血清存在α1，抗胰蛋白酶（A1AT）、纤维蛋白原β链（FIBB）、角蛋白84（KRT84）、微管蛋白β链（TBB）和波形蛋白（VIME）5种特异性表达蛋白；A1AT、角蛋白84和TBB在RA患者的滑膜和滑膜液中显著高表达，此外，RA患者血清中KRT84高表达。结论在RA中特异表达的自身抗原包括：A1AT、FIBB、KRT84、TBB和波形蛋白，已有研究证明了FIBB和波形蛋白为自身抗原，同时证明了我们研究的可行性和结果的可靠性。
- 赵燕常晓天王月俭陈彧栗占国
- 关键词：瓜氨酸自身抗原
- 碳酸酐酶1对骨形成作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:为了研究碳酸酐酶1(carbonic anhydrase I,CA1)在生物矿化和骨形成过程中的作用。方法:选择HeLa细胞为研究对象,用地塞米松(dexamethasone,DEX)、β-磷酸甘油(β-glycerophosphate,β-GP)和维他命C(ascorbic acid,AA)诱导其钙化,茜素红染色法观察矿化结节的形成,荧光定量PCR检测细胞骨化标志蛋白Runx2/cbfa1的表达。CA1表达水平的变化采用Western blot和荧光定量PCR的方法检测。同时用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺处理HeLa细胞,观察CA1表达被抑制后对HeLa细胞钙化的影响。结果:HeLa细胞在诱导后形成大量矿化结节,Runx2/cbfa1转录水平明显升高,显示DEX、β-GP和AA可诱导HeLa细胞钙化和骨化,HeLa细胞钙化后CA1表达明显增高。HeLa细胞经乙酰唑胺处理后,CA1的表达量减少,矿化结节形成明显减少,说明抑制CA1表达可以抑制HeLa细胞矿化和骨化过程。结论:CA1在生物矿化和新骨形成过程中起着重要作用。
- 郑亚冰王林常建芳王月俭韩金祥常晓天
- 关键词：生物矿化成骨诱导
- 高表达碳酸酐酶1参与骨化过程的研究
- 2012年
- 目的碳酸酐酶1不仅可以催化二氧化碳水化反应，还可以加速碳酸钙的形成，而钙沉淀是新骨形成的重要步骤。本研究以培养细胞为模型探索碳酸酐酶1在骨形成过程中的作用。方法用成骨诱导培养基（OM）诱导骨肉瘤细胞Saos-2钙化，然后用茜素红染色法观察细胞矿化结节的形成，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞骨化标志蛋白核心结合蛋白因子2（Runx2）、成骨细胞特异性转录因子（OSX）、碱性磷酸酶（AIJP）、骨钙素和骨涎蛋白（BSP）的表达。用蛋白印迹法和荧光定量PCR检测细胞钙化前后碳酸酐酶1的表达量的变化。用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺处理Saos-2细胞，观察细胞钙化过程是否被抑制。2组间比较采用t检验，不同时间点的统计学分析采用重复测量的方差分析。结果Saos-2细胞在OM诱导后形成大量矿化结节（0．68±0．03与2．76±0．13，P〈0．01），Runx2、ALP、骨钙素、OSX和BSP转录水平明显升高，显示OM可诱导Saos-2细胞钙化和骨化。Saos-2细胞钙化后碳酸酐酶1表达明显增高（0．25±0．03与0．94±0．06，P〈0．01）。Saos-2细胞经乙酰唑胺处理后，碳酸酐酶1的表达量减少（1．09±0．05与0．55±0．07，P〈0．05），矿化结节形成明显减少（2．76±0．13与2．19±0．07，P〈0．01），骨化标志蛋白的表达也明显下降，说明抑制碳酸酐酶1表达可以抑制Saos-2细胞矿化和骨化过程。结论碳酸酐酶1在新骨形成过程中起着重要作用。
- 郑亚冰王林赵丹王月俭安琨韩金祥常晓天
- 关键词：骨生成成骨诱导生物矿化
- CD38在类风湿关节炎外周血与滑膜组织中的表达被引量：3
- 2014年
- CD38是单链Ⅱ型跨膜蛋白,为B淋巴细胞活化的标记物。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是自身免疫性疾病,病变滑膜内存在大量B淋巴细胞增生。本研究通过对RA患者外周血及滑膜中的CD38进行表达分析从而探寻RA发病的免疫机制。应用流式细胞术检测RA患者(N=103)及正常人(N=120)外周血中CD38的表达;采用免疫组织化学法分别对5例RA患者、骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者及强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者滑膜组织中CD38的表达进行检测;将靶向CD38的SiRNA转入RA患者滑膜成纤维细胞(RASF)(N=5)后,ELISA法检测培养基中TNF-α、IL-1α和IL-β的表达。流式结果显示RA患者外周血中CD38+(P=1.92E-09)、CD3+CD38+(P=0.019)和CD56+CD38+(P=0.007)亚群细胞表达率明显升高,且CD38+细胞的表达率与RA患者类风湿因子(RF)水平显著相关(P=0.026);免疫组织化学结果表明CD38在RA患者滑膜中特异性高表达;ELISA实验证实:对CD38基因进行SiRNA干扰后,RASF培养基中的IL-1α和IL-1β表达水平显著降低。该项研究表明:CD38基因的表达增加可能参与RA患者的免疫激活。
- 岳龙涛刘文波王瑶王月俭常晓天
- 关键词：风湿性关节炎滑膜组织外周血CD38
- 维生素D结合蛋白在类风湿关节炎滑膜中表达的研究被引量：6
- 2012年
- 目的本研究通过蛋白质组学的方法比较类风湿关节炎（RA）、骨关节炎及强直性脊柱炎（AS）滑膜组织中表达的蛋白，筛选RA滑膜中表达特异性下调的蛋白，并通过单核苷酸多态性（SNPs）分析方法分析靶蛋白编码基因对RA的遗传易感性。方法提取RA（10例）、骨关节炎（10例）及AS（10例）滑膜组织总蛋白，每类疾病的样本等比例混合，然后用2．D凝胶电泳进行分析，对RA样本中表达量明显低于骨关节炎和As的蛋白进行飞行时间质谱鉴定，检测结果用蛋白印迹法验证。用Taqman方法对中国人群中267例RA患者和160名健康对照的维生素D结合蛋白（VDBP）编码基因的标签SNPs进行基因分型，并扩大样本量（389例RA和371名健康对照）验证分型结果。采用单因素方差分析和Fisher确切概率法进行检验。结果蛋白质组学研究发现，在RA患者滑膜中VDBP表达量明显下降，蛋白印迹法也验证了这一结果。基因分型研究发现，SNP位点rs2282679与RA密切相关（P=-0．026794）。进一步扩大样本实验也得出了一致结果，rs2282679与RA有相关性[比值比（OR）=0．678639，95％可信区间（凹）0．541113～0．851118，P=O．000776]。结论与骨关节炎和AS患者相比，VDBP在RA患者滑膜中表达量明显下降。VDBP基因上的SNP位点rs2282679与RA有相关性。VDBP在RA中的表达下调及其基因的遗传效应显示VDBP可能参与RA的病理过程。
- 王月俭房克华赵丹潘继红赵燕张云忠常晓天
- 关键词：蛋白质组学关节炎类风湿单核苷酸
- PSORS1C1/CDSN基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性关系的研究被引量：4
- 2013年
- 目的银屑病易感基因1候选基因1(psoriasis susceptibility 1 candidate 1,PSORS1C1,之前的SEEK1)的5'-UTR区域存在角膜锁链蛋白(corneodesmosin,CDSN)基因。本文探讨PSORS1C1/CDSN基因多态性与强直性脊柱炎(ankylosing spondyli-tis,AS)遗传易感性之间的关系。方法本研究首先针对PSORS1C1/CDSN基因区域的16个SNP位点,采用定制的Illumina 96-SNP VeraCode microarray基因芯片,对51例AS患者DNA进行基因分型。初步筛选到AS疾病易感性相关位点后,再使用同样方法增大样本量,对200例AS患者DNA进行基因分型。最后采用Taqman基因分型方法验证两次芯片结果。结果基因芯片结果表明rs3130983、rs3778638和rs4959053在AS和对照组中等位基因频率和基因型频率有显著差异。Taqman基因分型技术验证了基因芯片结果。说明rs3130983、rs3778638和rs4959053与AS发病有相关性。结论 PSORS1C1和CDSN基因可能是AS的易感基因。
- 夏一芳潘继红王月俭赵燕常晓天
- 关键词：强直性脊柱炎
- 纤维连接蛋白瓜氨酸化后对聚蛋白多糖酶-1活性的影响
- 2013年
- 目的通过观察聚蛋白多糖酶-1（ADAMTS-4）与纤维连接蛋白（FN）以及瓜氨酸化的FN（cFN）的结合活性及结合后的酶解活性，探讨ADAMTS-4的活性调节机制。方法应用肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADl4）对纤维连接蛋白（FN）进行瓜氨酸化并采用蛋白印迹法进行验证；应用酶联免疫吸附法测定FN和CFN与2种不同相对分子质量的ADAMTS-4的结合活性；使用聚蛋白多糖酶活性分析试剂盒测定2种ADAMTS-4的活性和其与FN、cFN结合后酶活性的变化。统计分析采用单因素方差分析，LSD-t检验或t检验。结果蛋白印迹法证实PADl4可以使FN瓜氨酸化为cFN；cFN与相对分子质量为93000的ADAMTS-4的结合活性明显低于FN（分别为0．624＋0．033，2．1824-0．042；t：50．522，P〈0．01），而两者与缺失碳端的相对分子质量为53000的ADAMTS．4的结合活性差异无统计学意义（分别为0．934＋0．012，0．971±0．024；t=2．388，P〉0．05）。相对分子质量为93000的ADAMTS．4能够酶解聚蛋白多糖产生大量酶解产物[ARGxx肽段浓度：（0．908±0．088）nmol／L]，与FN结合后降解聚蛋白多糖的能力明显下降[ARGxx肽段浓度：（0．5734-0．000）nmol／L，P〈0．05]，与cFN孵育后的ADAMTS-4降解聚蛋白多糖产生的ARGxx肽段浓度[（0．8304-0．020）nmol／L]明显高于与FN孵育后产生的ARGxx肽段浓度[（O．5734-0．000）nmol／L，P〈0．05]。相对分子质量为53000的ADAMTS-4的酶活性在与FN或eFN孵育前后酶活性无明显变化（P均〉0．05）。结论FN能结合ADAMTS-4并抑制它的活性，PADl4能将FN转化为cFN，cFN与ADAMTS-4的结合活性明显降低，从而对ADAMTS-4的活性抑制作用减弱。
- 殷鲁旭闫新峰常晓天张明赵燕王月俭张恩水
- 关键词：连接蛋白类瓜氨酸
- 脂联素在类风湿关节炎中的研究进展被引量：3
- 2013年
- 传统认为脂肪组织是无活性的能量储存器官，自1994年瘦素在脂肪组织中被发现以来，这一传统观念被打破。脂肪组织除了具有储存能量的功能外，还是一个复杂的、具有高度生物学活性的内分泌器官，其能够合成并分泌多种蛋白，
- 王月俭常晓天
- 关键词：关节炎类风湿脂联素受体脂联素
