王勤涛 作品数:12 被引量:9 H指数:1 供职机构: 中国水产科学研究院黄海水产研究所 更多>> 发文基金: 国家现代农业产业技术体系建设项目 公益性行业(农业)科研专项 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型 被引量:8 2014年 对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。 刘群 黄倢 杨昊霖 杨冰 刘笋 王海亮 王勤涛 刘飞 张庆利关键词:新株型 NESTED-PCR 凡纳滨对虾诺达病毒现场快速检测试剂盒及检测方法 本发明涉及一种凡纳滨对虾诺达病毒的快速高灵敏检测试剂盒及检测方法。本发明的检测试剂盒包括:采样管、内装蒸馏水的漂洗管、内装TE缓冲液的核酸变性管、内装扩增反应液和染料的扩增检测管、阴性对照管、阳性对照管、FTA膜片及其快... 张庆利 黄倢 王勤涛 杨冰 刘莉文献传递 一种用于检测罗氏沼虾诺达病毒的试剂盒及检测方法 本发明涉及一种用于检测罗氏沼虾诺达病毒的试剂盒及检测方法。本发明的试剂盒包括:采样管、内装蒸馏水的漂洗管、内装TE缓冲液的核酸变性管、内装扩增反应液和染料的扩增检测管、阴性对照管、阳性对照管、FTA膜片及缩短待检测样品核... 张庆利 黄倢 王勤涛 杨冰文献传递 一种用于检测罗氏沼虾诺达病毒的试剂盒及检测方法 本发明涉及一种用于检测罗氏沼虾诺达病毒的试剂盒及检测方法。本发明的试剂盒包括:采样管、内装蒸馏水的漂洗管、内装TE缓冲液的核酸变性管、内装扩增反应液和染料的扩增检测管、阴性对照管、阳性对照管、FTA膜片及缩短待检测样品核... 张庆利 黄倢 王勤涛 杨冰斑点叉尾鮰病毒现场快速检测试剂盒及检测方法 本发明涉及一种斑点叉尾鮰病毒(CCV)现场快速检测试剂盒及检测方法,试剂盒中包含有序列为SEQ ID NO:1-4的引物。本发明的试剂盒使得CCV的检测能够快速有序地进行,实现了检测过程的程序化和标准化,使得操作规范、不... 张庆利 黄倢 阎毅 史成银 王勤涛 刘莉文献传递 双切口滚环扩增检测方法及其原理初探 随着我国水产养殖业的迅速发展,对虾集约化养殖模式的到来,对虾疾养殖过程中疾病的暴发对水产养殖业造成了严重的损失,对虾疾病成为制约对虾养殖业健康发展的重要因素,因此对水产病害的研究变得越来越重要,而水产病害的检测是病害研究... 王勤涛关键词:水产病害 滚环扩增 肝胰腺细小病毒 基因芯片 病原检测 文献传递 一种可常温保存和运输的核酸等温扩增反应试剂 本发明涉及一种可常温保存和运输的核酸等温扩增反应试剂,以及包含有该核酸等温扩增反应试剂的试剂盒。所述的核酸等温扩增反应试剂是将一种或几种核酸等温扩增反应液的组分包埋在凝胶内制备的。本发明提供的核酸等温扩增反应试剂以及等温... 张庆利 黄倢 史成银 王勤涛 梁艳 刘莉对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立 2014年 根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列,设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化反应条件,建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接,探针在Taq DNA连接酶作用下,58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明,该体系能够特异性地检测出HPV,而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应;灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl,与PCR检测方法相比,一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少,基本都在等温条件下进行,不需要PCR仪,可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。 王勤涛 张庆利 杨昊霖 刘天齐 刘笋 杨冰 黄倢关键词:对虾 肝胰腺细小病毒 滚环扩增 基于凝胶的核酸等温扩增试剂的保存方法 本发明涉及一种基于凝胶的核酸等温扩增试剂的保存方法,是将一种或几种核酸等温扩增反应液的组分包埋在凝胶内进行保存;所述凝胶的熔点低于用于核酸等温扩增的聚合酶的灭活温度。本发明方法处理后的等温扩增反应试剂混合物,可常温贮存和... 张庆利 黄倢 史成银 梁艳 王勤涛 李美霞一种可常温保存和运输的核酸等温扩增反应试剂 本发明涉及一种可常温保存和运输的核酸等温扩增反应试剂,以及包含有该核酸等温扩增反应试剂的试剂盒。所述的核酸等温扩增反应试剂是将一种或几种核酸等温扩增反应液的组分包埋在凝胶内制备的。本发明提供的核酸等温扩增反应试剂以及等温... 张庆利 黄倢 史成银 王勤涛 梁艳 刘莉文献传递