牛倩倩
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Split-marker重组技术构建泛素C末端水解酶基因缺失菌株(英文)被引量：3
- 2012年
- 目的:对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)泛素末端水解酶(creB)基因进行敲除。方法:通过氨基酸序列分析软件初步分析烟曲霉CreB蛋白结构.利用split-marker重组技术构建重组片段,并通过PEG-原生质体方法对烟曲霉野生菌株进行转化,采用PCR方法对转化子进行筛选,最后选取初步筛选的转化子进行测序鉴定。结果:结构分析显示烟曲霉CreB蛋白具有泛素特异蛋白酶(ubiquitin-processing protease)UBP亚家族六个结构域。本实验构建了转化片段并转化,在抗性平板中获得了25个Hyg抗性转化子,进一步采用PCR方法筛选到20个转化子,最终通过测序分析获得一株creB基因缺失菌株。结论:Split-marker重组技术是对烟曲霉creB基因进行敲除的快速有效的方法。获得的creB缺失菌株可用于基因功能研究。
- 喻娜娜吴翠娇赵巍牛倩倩王斌闫志勇钱冬萌宋旭霞
- 关键词：烟曲霉
- 烟曲霉金属还原酶基因敲除及初步功能分析
- 目的:烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病真菌，而对其致病机制还不清楚。本课题采用基因敲除的方法将烟曲霉的金属还原酶基因进行敲除，并对该基因的功能进行初步研究，进而为揭示该基因与烟曲霉...
- 牛倩倩
- 关键词：烟曲霉基因敲除原生质体
- 文献传递
- MB染色检测PKA调节亚基对烟曲霉萌发孢子活性的影响
- 2017年
- 烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺失株(ΔpkaR)萌发孢子的活性,分析pkaR基因对烟曲霉萌发孢子抗氧化损伤的影响。实验结果表明,ΔpkaR株的萌发孢子,对于氧化压力有更强的抵抗能力,表明pkaR基因参与调节烟曲霉对于氧化损伤的抵抗。
- 张姗姗吴翠娇赵巍邵建业王伟伟牛倩倩王斌
- 关键词：烟曲霉
- 巢式-重叠PCR构建金属还原酶基因缺失片段
- 2013年
- 目的利用重叠PCR构建敲除烟曲霉金属还原酶基因所需的融合片段,并检测巢式PCR对重叠PCR的影响。方法比对烟曲霉金属还原酶基因上下游的同源性,在其同源性较好的区域设计引物,扩增出金属还原酶基因上下游片段。同时,利用PCR获得潮霉素抗性标记基因的两个片段。再通过巢式PCR将基因上下游片段与相应的标记基因片段分别连接,获得转化所需的融合片段。获得的融合片段用凝胶电泳和测序进行鉴定。结果获得的融合片段经凝胶电泳检测大小正确。经测序鉴定证实融合片段正确连接并与理论序列有很高的一致性。与常规重叠PCR相比,巢式PCR的引入减少了杂带量。结论获得构建金属还原酶基因缺失所需的融合片段,为实现烟曲霉金属还原酶基因的敲除与功能研究奠定基础。巢式-重叠PCR可以提高产物的特异性。
- 牛倩倩吴翠娇赵巍喻娜娜王斌
- 关键词：曲霉菌属聚合酶链反应氧化还原酶类
