涂炜
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达SATB1对人原发性肝癌细胞HepG2增殖的促进作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究核基质结合蛋白SATB1对人原发性肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法脂质体介导pEGFP1-SATB1真核表达全长基因质粒转染人原发性肝癌HepG2细胞,分为实验组(pEGFP1-SATB1)、对照组(pEGFP1空载体)及空白对照组。RT-PCR、Western blot检测转染后SATB1mRNA和蛋白表达变化情况,噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测SATB1全长基因转染对人原发性肝癌HepG2细胞生长、增殖的影响。结果与空白对照组及对照组比较,转染pEGFP1-SATB1后,HepG2中SATB1mRNA和蛋白表达明显增加,细胞生长曲线检测结果表明转导入pEGFP1-SATB1细胞增殖明显加快,细胞数明显增多;流式细胞仪检测结果表明,细胞周期中G0/G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞明显增多。结论 SATB1能明显促进HepG2细胞增殖,其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关。
- 罗敏涂炜刘永健邓欢周珍珍朱倩林海华夏丽敏晏维田德安
- 关键词：SATB1细胞增殖
- 肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响及其相关机制。方法不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变,采用划痕标记荧光传输试验显示缝隙连接细胞通讯功能的变化,采用Western blot法检测连接蛋白32(Cx32)在细胞膜的表达。结果不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,Transwell试验显示细胞侵袭能力较对照组提高,且随TNF-α浓度增加而升高。同时,缝隙连接细胞通讯功能减弱,细胞膜上Cx32的表达减少。结论 TNF-α可能通过影响Cx32在细胞膜的表达及细胞通讯促进人肝癌细胞株SMMC-7721的侵袭能力。
- 朱倩晏维林海华罗敏夏羽佳涂炜周珍珍邓欢田德安
- 关键词：肿瘤坏死因子Α连接蛋白32
- CXCL9对单个核细胞的趋化作用及其机制探讨被引量：8
- 2012年
- 目的观察趋化因子CXCL9对人外周血单个核细胞的趋化作用,并探讨其对CXCR3受体后信号通路的影响。方法分离人外周血单个核细胞并进行培养,Transwell小室趋化实验检测不同浓度的趋化因子CXCL9对外周血单个核细胞的趋化作用;Western blot方法检测CXCL9刺激外周血单个核细胞时ERK1/2及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达变化,并检测上述通路抑制剂PD98059和Wortmannin处理细胞后,CXCL9对ERK1/2、PI3K/Akt信号通路的影响有无变化。结果与空白对照组相比,不同浓度的CXCL9刺激对人外周血单个核细胞均有明显的趋化作用,并且CXCL9刺激人外周血单个核细胞能激活ERK1/2及PI3K/Akt信号通路,其关键蛋白ERK1/2及Akt磷酸化水平显著增加;通路特异性抑制剂PD98059和Wortmannin的应用能明显抑制CXCL9对这两条信号通路的激活。结论 CXCL9能趋化人外周血单个核细胞发生迁移,ERK1/2及PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。
- 夏羽佳田德安曾丹何嘉怡涂炜邓欢韩平邓玥灵刘梅
- 关键词：趋化因子CXCL9单个核细胞趋化作用信号通路
- β2-spectrin的siRNA对AML-12肝细胞增殖特性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的应用特异性siRNA干扰小鼠肝细胞株AML-12中β2-spectrin表达,检测AML-12细胞增殖凋亡以及细胞周期的改变。方法化学合成β2-spectrin特异性siRNA,分别转染AML-12细胞,荧光定量PCR和Western blot确定其抑制效果。AML-12细胞经TGF-β细胞因子处理4h后,转染β2-spectrin特异性siRNA,48h后,BrdU标记法以及流式细胞术检测β2-spectrin沉默前后AML-12细胞增殖、凋亡以及周期变化;共聚焦技术检测干扰β2-spectrin表达对TGF-β/Smad信号通路中Smad3、Smad4核定位的影响。结果 siRNA可以高效特异沉默β2-spectrin的表达。流式细胞术检测显示,β2-spectrin沉默促进AML-12细胞增殖,抑制凋亡,S期细胞比例显著升高。免疫荧光结果显示,TGF-β处理后,Smad3、Smad4表达定位于细胞核,沉默β2-spectrin干扰Smad3、Smad4细胞核内定位。结论沉默β2-spectrin的表达促进AML-12增殖,抑制凋亡,促进细胞向S期转化。其机制可能是通过干扰Smad3、Smad4核定位而抑制TGF-β/Smad信号通路,进而发挥诱导凋亡效应。
- 汪志军涂炜刘芳
- 关键词：细胞增殖细胞周期
- 过表达连接蛋白32对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨过表达连接蛋白32(Cx32)对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响。方法应用Lipo-fectamine 2000将pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒转染至MHCC-97H细胞,G418稳定筛选。采用Western blot法检测Cx32蛋白表达,划痕标记荧光传输实验显示细胞通讯功能的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的改变。结果转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒使得MHCC-97H细胞过表达Cx32蛋白。与正常对照组和转染空质粒组细胞相比,转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒并过表达Cx32的细胞胞间通讯功能增强,细胞侵袭能力减弱。结论 Cx32在人原发性肝癌的侵袭过程中可能起抑制作用。
- 朱倩夏羽佳涂炜罗敏周珍珍晏维林海华邓欢田德安
- 关键词：连接蛋白32肝细胞癌细胞侵袭
- 靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响被引量：3
- 2013年
- 目的构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响。方法针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变。结果靶向MTDH干扰质粒构建成功。与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTMH1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架。
- 周珍珍邓欢黄焕军夏羽佳涂炜何嘉怡田德安
- 关键词：肝细胞癌MTDH小干扰RNAHEPG2
- HBV编码蛋白HBx通过核基质结合蛋白SATB1诱导肝癌细胞失巢凋亡抵抗的作用机制研究
- 目的原发性肝癌(primary liver cancer)是常见的恶性肿瘤之一,发病率逐年上升,其中约一半发生在中国。大多数肝癌为肝细胞癌(HCC),而HBV感染是世界公认的原发性肝细胞癌的主要病因和促转移因素。HCC易...
- 涂炜
- 关键词：失巢凋亡SATB1HBXFADD
- 文献传递
- Netrin-1促进肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的作用被引量：1
- 2011年
- 目的初步探讨神经生长因子Netrin-1对人肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的作用及相关机制。方法采用脂质体转染的方法,将Netrin-1的真核表达质粒转染到肝癌细胞HepG2中,Western blot检测Netrin-1的表达;用软琼脂集落试验、悬浮培养模型及流式细胞检测的方法观察肝癌细胞HepG2抗失巢凋亡的特性。结果肝癌细胞HepG2在失巢状态下可以聚集成团生长,并与贴壁生长有相似的凋亡比例。与对照组细胞相比,稳定转染Netrin-1真核质粒的HepG2细胞在软琼脂中形成细胞集落的数量明显增加,在悬浮培养模型中形成细胞团的直径更大,在失粘附状态下的细胞凋亡比例明显降低;磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路的抑制剂LY294002能增加转染细胞在失粘附状态下的凋亡比例。结论肝癌细胞HepG2具有抗失巢凋亡的特性,Netrin-1可以增强HepG2细胞抗失巢凋亡的能力,其机制可能与PI3-K通路相关。
- 林海华晏维田德安黄焕军夏羽佳周珍珍涂炜邓欢廖家智
- 关键词：失巢凋亡NETRIN-1肝癌细胞
