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胆汁酸教学改革体会: 2013年; 在生物化学胆汁酸教学过程中,关于胆汁酸命名,学生记忆不清晰.教学过程中对生成胆汁酸的原料乙酰辅酶A来源途径知识点进行系统的总结,并联系物质代谢中的糖代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢.同时,归纳胆汁酸按来源和结构的全部命名,收到了很好的教学效果.; 刘革力汪长东; 关键词：胆汁酸乙酰辅酶A 教学效果

IFT20蛋白在肺癌组织中的表达及其对肺癌A549细胞增殖的影响被引量：1: 2015年; 目的 :探讨纤毛内运输(intral agellar transport,IFT)蛋白20在肺癌组织中的表达及IFT20对肺癌A549细胞增殖的影响。方法 :免疫组织化学法检测20例肺癌组织和4例正常肺组织中IFT20蛋白的表达。将靶向IFT20基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段转染肺癌A549细胞后,实时荧光定量PCR法检测细胞中IF T20 m RNA的表达,MTT法检测细胞的增殖情况,免疫荧光染色法检测A549细胞中IFT20蛋白的表达情况以及纤毛的数量和长度,蛋白芯片检测A549细胞中蛋白的表达情况。结果 :IFT20蛋白在肺癌组织中呈弱阳性表达,而在正常肺组织中呈中度阳性表达。IFT20 si RNA成功转染后,A549细胞中IFT20 m RNA表达水平低于阴性对照组(转染control si RNA)和空白对照组(未转染的A549细胞)(P<0.05),细胞增殖加快(P<0.05);IF T20 si RNA转染组A549细胞IFT20蛋白表达水平下调,纤毛数量减少、长度变短或消失(P值均<0.05);IFT20 si RNA转染组A549细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、survivin、高温需求因子A(high temperature requirment A,HTRA)蛋白、热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)27、Hsp70和SMAC(second mitochondria-derived activator of caspases)的表达水平上调(P值均<0.05)。结论 :在肺癌组织中存在IFT20蛋白的低表达,抑制IFT20可以使肺癌A549细胞的纤毛数量减少和纤毛长度变短或消失,并促进肺癌细胞的增殖。; 刘革力李飞龙胡宁潘嘉川汪长东; 关键词：肺肿瘤纤毛细胞增殖

HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究被引量：2: 2011年; 目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。; 焦庆昉易发平汪长东袁成福刘勒兰欢符少月艾青宋方洲; 关键词：细胞毒性T淋巴细胞 CASKI细胞树突状细胞

沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：5: 2012年; B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertionsite 1,Bmi-1)基因是多梳基因家族成员,参与细胞增殖调控.研究发现Bmi-1基因可能参与肿瘤的形成,可能成为肿瘤潜在的治疗靶点.用RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Bmi-1基因表达观察其对乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和转移等生物学特性的影响,以探讨Bmi-1在乳腺癌发生发展中的作用.PT67细胞包装质粒后产生的逆转录病毒感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株,稳定抑制Bmi-1的细胞株命名为MCF-7/Bmi-1si.通过RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1的表达量;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭和转移能力.MCF-7/Bmi-1si组与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,Bmi-1 mRNA和蛋白表达量明显减少,克隆形成数及形成率也明显减少(P<0.05).侵袭和转移实验表明:与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,MCF-7/Bmi-1si组细胞在Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数明显减少(P<0.05).结果表明沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株构建成功,Bmi-1基因表达的沉默能显著降低MCF-7细胞的体外增殖及侵袭转移能力.; 武向梅余华荣卜友泉易发平汪长东刘革力苟小燕邓小园宋方洲; 关键词：BMI-1基因乳腺癌 RNA干扰 MCF-7细胞

一株耐盐细菌的16S rRNA基因序列分析被引量：4: 2008年; 从舟山群岛滩涂土壤中获得了海水和底泥样品,并从中提取到了一株耐盐细菌,通过用不同盐浓度的培养基培养,挑取单菌落,反复划线纯化,得到了耐盐菌的单菌落。通过菌株基因组DNA的提取、菌株的抗性实验、质粒的提取、16S rRNA的PCR扩增及克隆、16S rRNA的全序列分析等手段,对该菌株的16S rRNA的基因序列进行了研究。; 汪长东陈鹏闫旭景红娟黄阜峰汪越胜杨广笑何光源; 关键词：耐盐菌 RRNA PCR

C反应蛋白激活原纤毛抑制颅骨成骨细胞的增殖和分化被引量：2: 2021年; 目的研究C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对原代培养SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖及成骨分化的影响。方法取SD乳鼠颅骨组织用胰蛋白酶和胶原蛋白酶Ⅰ消化得到原代ROB,随后将ROB用α-MEM培养基培养,传代3次后用于后续实验。在对照组和5 mg/mL CRP的处理组中,成骨分化培养基诱导3 d进行免疫荧光检测两组Ki-67和acetylated-α-tubulin和γ-tubulin表达情况;同时,蛋白质印迹分析osteopontin(OPN)、alkaline phosphatase(ALP)、acetylated-α-tubulin和γ-tubulin的表达;成骨分化培养基诱导21 d茜素红染色检测成骨基质矿化结节量。结果免疫荧光显示,5 mg/mL CRP抑制成骨细胞增殖,与对照组差异有统计学意义(P<0.001);蛋白质免疫印迹和茜素红染色显示,处理组OPN和ALP表达降低(P<0.01),矿化结节生成数量减少(P<0.001),与对照组比较差异均有统计学意义;免疫荧光结果显示,细胞原纤毛长度增加(P<0.001),免疫印迹结果显示acetylated-α-tubulin和γ-tubulin蛋白的表达均升高(P<0.001)。结论5 mg/mL CRP显著抑制ROB增殖与成骨分化矿化并且显著激活细胞原纤毛。CRP为炎症因子典型代表,这些数据表明炎症因子激活细胞原纤毛发挥其抑制成骨细胞的增殖与分化作用,提示抑制原纤毛或阻断炎症因子的释放可以治疗炎症引起的骨丢失疾病。; 许洁刘杰汪长东; 关键词：C反应蛋白分化炎症

低电导钙激活的钾通道(rSK3，rIK)抑制露蜂房蛋白1(NVP(1))抗细胞增殖作用被引量：1: 2009年; 目的研究rSK3,rIK通道在细胞增殖中的作用。方法用凝胶层析和液相色谱从露蜂房水提物中分离一种纯蛋白,并检测此蛋白的抗细胞增殖作用;转染;Southern blot检测rSK3,rIK基因;细胞计数检测SK通道在细胞增殖中的作用。结果从露蜂房水提物中分离一种纯蛋白,分子量为6.6 ku,命名为NVP(1),能抑制Hek-293细胞增殖。Southern blot检测转基因rSK3,rIK成功。转rSK3,rIK基因后,能消减NVP(1)抗细胞增殖的作用。结论rSK3,rIK促进细胞增殖。; 汪长东陈鹏闫旭何光源; 关键词：细胞增殖

沉默Bmi-1基因表达对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响被引量：1: 2012年; 目的研究Bmi-1对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响及机制。方法阿霉素处理MCF-7／Bmilsi、MCF-7／GFPsi和MCF一7细胞株，M1Tr法检测阿霉素的IC50；DAPI检测阿霉素处理后细胞的凋亡，计算凋亡指数（apoptosisindex，AI）；Western印迹检测相关蛋白P53，phospho—Akt（Ser473）（pAkt），totle—Akt（tAkt），Bcl-2，Bax的表达。结果阿霉素处理72h的MCF-7／Bmi．1si组生长抑制率明显高于MCF-7和MCF-7／GFPsi组，MCF-7／Bmilsi组的IC50为（0．15±0．02）μg／ml，而MCF-7组和MCF-7／GFPsi组的IC50分别为（0．87±0．06）μg/ml和（0．81±0．02）μg/ml（P〈0．05）。阿霉素处理48h后用DAPI检测凋亡发现，MCF-7／Bmi．lsi＋doxorubiein组可见大量凋亡细胞，而MCF-7＋doxorubicin和MCF-7／GFPsi＋doxo—rubicin组出现较少的凋亡细胞，MCF-7／Bmi-1si＋doxorubicin组凋亡指数明显高于对照组（P〈0．05）。进一步研究发现：MCF-7／Bmi．1si＋doxorubicin组与MCF-7＋doxorubiein及MCF-7／GFPsi＋doxorubiein组相比，P53表达量增加，tAkt表达未发生改变，而pAkt的表达明显减少，另外，Bcl-2表达量减少而Bax表达量增加，差异具有显著性（P〈0．05）。结论沉默Bmi—l基因表达能增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性，增加阿霉素引起的凋亡。; 武向梅余华荣卜友泉易发平汪长东刘革力邓小园苟小燕宋方洲; 关键词：BMI-1基因乳腺癌阿霉素

MCPH1基因过表达对人肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响被引量：2: 2013年; 目的探讨MCPH1(microcephalin 1)基因过表达对人肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响。方法将质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1(实验组)和pcDNA3.1(-)(阴性对照组)分别转染人肺癌A549细胞,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测转染48 h后的细胞内MCPH1的表达;采用细胞划痕试验及Transwell试验分别检测MCPH1过表达对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果实验组A549细胞中MCPH1水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);实验组细胞迁移及侵袭能力较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 MCPH1基因过表达可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭能力。; 吴晓彬麦力张冀马冬梅刘革力易发平卜友泉汪长东宋方洲; 关键词：A549细胞迁移

麻黄碱抑制支气管平滑肌细胞增殖的机制被引量：11: 2008年; BK通道(large-conductance Ca2+-activated K+ channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中。β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基。麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味治疗哮喘的常用中药。利用RT-PCR和膜片钳等技术,研究麻黄治疗哮喘的作用机制。结果表明:麻黄碱(ephedrine,Eph)作为麻黄的一种主要成分,显著抑制支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)的增殖和BK通道β1亚基的表达,但是对BK通道的电流没有显著影响。; 景红娟汪长东甘露阎旭陈鹏陈明洁何光源; 关键词：麻黄碱 BK通道细胞增殖

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