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一种结核杆菌融合蛋白Mtb8.4-HspX及其制备方法和应用: 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白Mtb8.4-HspX，是序列表中序列2的蛋白质。本发明的有益效果是：发明选用的结核分枝杆菌Mtb8.4是从结核杆菌培养滤液中纯化分离的一种低分子治疗蛋白抗原，具有较强的细胞免疫活性，能诱...; 谭继英刘万波祝秉东胡丽娜王秉翔吴玉敏辛奇朱丽林孝发; 文献传递

不同培养基对皮肤来源的成纤维细胞增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响被引量：6: 2017年; 目的:探讨不同培养基组成对皮肤成纤维细胞的增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响。方法:采用两步酶消化法从健康人耳后皮肤中获得成纤维细胞,依据培养基种类不同分为A组(FM无血清培养基)、B组(DMEM+10%FBS)、C组(RPMI-1640+10%FBS)、D组(DMEM+F12(1∶1)+10%FBS),采用MTT法、细胞划痕实验、酶联免疫吸附实验、β-半乳糖苷酶试验、软琼脂克隆形成试验比较不同培养基对细胞增殖、迁移、胶原分泌、老化、变异的影响。结果:采用酶消化法在2d^4d内即可从组织块中获得大量成纤维细胞;其中B、D组较A、C组细胞增殖较快,且趋势与MTT细胞增殖相同;划痕实验显示B、D组较A、C组向缺损部位迁移更为明显;此外,D组胶原蛋白分泌量高于其余三组(P<0.05),且连续传代30次后,细胞无明显衰老及瘤变迹象。结论:两步酶消化法可快速高效的从人组织块中获得成纤维细胞,且采用DMEM+F12(1∶1)完全培养基有利于促进细胞增殖、分泌胶原蛋白及延缓细胞衰老。; 喇文军林孝发蒋伟王妍尹卫民林嘉欢林峰; 关键词：成纤维细胞培养基胶原蛋白细胞增殖原代培养

一步柱层析纯化血浆分离多种血液制品组分被引量：5: 2015年; 目的采用一步吸附及分步解吸的柱层析技术——扩张床吸附(expanded bed adsorption,EBA)技术,从原料血浆中分离多个有效组分,从而提高血浆的综合利用率。方法以琼脂糖(碳化钨)-DEAE为吸附介质,将原料血浆按一定流速流经层析柱,并使待分离组分吸附于介质上,通过不同的缓冲液组成、洗脱流速、洗脱体积分步分离有效组分,并初步探讨工艺放大过程中的关键因素。结果 EBA技术可从原料血浆中依次分离出白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原、α-1蛋白酶抑制剂4种蛋白;该技术在工艺放大过程中,柱高及洗脱流速是影响分离效果的关键因素;该技术可去除部分病毒,使病毒滴度降低约一个数量级。结论一步柱层析技术具有血浆综合利用度高、易操作、操作周期短、成本低、可去除病毒等优势,其有望成为传统低温乙醇工艺的有效替代技术,应用于工业化生产。; 喇文军王妍周靖林孝发张丽君; 关键词：人血浆柱层析扩张床吸附

柱层析法纯化人血纤维蛋白原及其药理功能研究被引量：2: 2017年; 目的:探讨层析法新工艺和原有的低温乙醇工艺制备纤维蛋白原在大鼠跟腱断裂模型中促恢复的效果差异。方法:构建大鼠跟腱部位断裂模型,将其分为空白组(未剪跟腱)、模型组(跟腱断裂未给药)、实验组(自制纤维蛋白原2 mg/mL)与对照组(市售纤维蛋白原2 mg/mL),观察各组大鼠在手术后三周跟腱部位的最大滑动距离、弹性模量和最大抗拉力差异。结果:采用冷沉淀溶解、酸沉除杂、S/D灭活病毒、MacroCap Q柱层析、过滤等流程可从人血浆冷沉淀组分Ⅰ中成功分离纯度为90.9%纤维蛋白原。试验中构建的大鼠跟腱部位断裂模型无感染、且均存活至试验终止。生物力学结果显示,四组大鼠跟腱在最大滑行距离上无明显统计学差异(P>0.05);在跟腱部位弹性模量及最大抗压力比较上,实验组及对照组均优于模型组,但与空白组仍有一定差距,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用柱层析法分离人纤维蛋白原,不仅能有效提高分离效率,减少蛋白损失,还可增强纤维蛋白原在断裂跟腱中的促恢复效果。; 林孝发张运佳孙兆健王妍郭采平; 关键词：纤维蛋白原跟腱损伤

一种结核杆菌融合蛋白HspX-Mtb8.4及其制备方法和应用: 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白HspX-Mtb8.4，是序列表中序列2的蛋白质。本发明的有益效果是：发明选用的结核分枝杆菌Mtb8.4是从结核杆菌培养滤液中纯化分离的一种低分子治疗蛋白抗原，具有较强的细胞免疫活性，能诱...; 祝秉东刘万波谭继英胡丽娜王秉翔吴玉敏辛奇朱丽林孝发; 文献传递

柱层析法分离白蛋白在肝损伤大鼠中的保护效果研究被引量：1: 2018年; 目的研究采用柱层析工艺直接从血浆中分离的白蛋白在肝损伤大鼠中的保护效果。方法将血浆按1∶4比例稀释后,按照柱层析工艺G25-DEAE-CM-S200获得白蛋白纯品。将其分为A组(5mg/mL)、B组(2mg/mL),另取市售低温乙醇法制备的白蛋白为C组(5mg/mL)。3组按尾静脉注射方式分别对肝损伤大鼠模型进行给药,并以正常组(未造模)及模型组(造模未给药)为参照,比较给药后大鼠肝体系数差异、生理学指标表达水平及肝脏病理损伤程度,以验证2种工艺对蛋白纯度和肝损伤保护效果的影响。结果柱层析工艺最终获得终浓度5mg/mL、纯度98%以上白蛋白;A、B、C3组均能减少血清中谷丙转氨酶的含量,并提高血清中白蛋白含量(P<0.05),但A组保护效果优于B、C组。病理结果进一步证实,A组大鼠仅轻微肝纤维化,B、C组大鼠肝纤维化程度较A组严重。结论不同分离工艺得到的白蛋白,对于小鼠肝损伤程度均有一定缓解,其中以柱层析法所得白蛋白效果较显著。; 张英林孝发王妍喇文军陈献雄; 关键词：白蛋白肝损伤

一种扩张床吸附（EBA）技术制备纤维蛋白原的工艺方法: 本发明提供一种制备纤维蛋白原的方法，包括下述步骤：1)以琼脂糖碳化钨‑DEAE离子交换介质为柱层析填料，制备扩张床作用层析柱；2)将血浆过步骤1)所述的层析柱进行初步纯化，收集纤维蛋白原初品；3)将步骤2)获得的纤维蛋白...; 王妍林孝发喇文军张英; 文献传递

层析技术在血液制品分离纯化中应用的探讨被引量：7: 2015年; 随着市场需求的多元化发展,原采用低温乙醇法生产的血液制品在品种及质量上均已不能满足人们的需要。国外血浆分离过程中应用层析技术,显著地提高了血浆利用率及产品质量,并丰富了产品的种类,节约了经济成本。在我国分离技术起步较晚,血液制品的规模化生产仍以低温乙醇法为主。在分析国内外现有层析技术的应用现状的基础上,并对其主流层析工艺进行了简要综述,为我国改进现有血液制品的工艺提供参考依据。; 林孝发王妍; 关键词：血液制品

重组人干扰素β-1a注射液对大鼠肝纤维化模型的治疗作用被引量：2: 2015年; 目的研究重组人干扰素β-1a注射液及白蛋白注射液对肝纤维化大鼠的治疗作用。方法通过给大鼠灌服50%的四氯化碳花生油溶液1 mL/kg,每周2-3次,5周后开始使用受试药物（隔日注射1次）,同时继续同上灌服50%的四氯化碳花生油溶液。9周后取血、取肝脏,测定血清ALT、AST、TP、ALB、TBIL,测定肝组织羟脯氨酸含量,并对肝脏做病理组织学检查。结果干扰素β-1a、白蛋白注射液均能明显降低肝纤维化模型大鼠血清的ALT、AST、TBIL,能明显升高肝纤维化大鼠血清ALB、ALB/GLB,且能明显降低肝纤维化大鼠肝组织羟脯氨酸含量。结论干扰素β-1a、白蛋白注射液对肝纤维化模型大鼠的肝纤维化程度均有明显的抑制作用。; 王妍林孝发张微微韦康王中汉田建明; 关键词：大鼠肝纤维化模型

一种扩张床吸附(EBA)技术制备纤维蛋白原的工艺方法: 本发明提供一种制备纤维蛋白原的方法，包括下述步骤：1)以琼脂糖碳化钨-DEAE离子交换介质为柱层析填料，制备扩张床作用层析柱；2)将血浆过步骤1)所述的层析柱进行初步纯化，收集纤维蛋白原初品；3)将步骤2)获得的纤维蛋白...; 王妍林孝发喇文军张英; 文献传递

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林孝发

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