杨婷婷
- 作品数：15 被引量：50H指数：5
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- 弓形虫P30与佐剂CTA_2/B复合基因酵母表达载体的构建与生物信息学分析被引量：8
- 2005年
- 目的构建含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组P30CTX蛋白奠定基础。方法PCR扩增P30CTX复合基因,产物回收后与pMD18T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,经氨苄抗性筛选及测序,建立克隆载体pMD18T P30CTX;克隆载体与表达载体双酶切后,回收1313bp的P30CTX基因,亚克隆入酵母表达载体,转化大肠埃希菌DH5α,筛选、测序后建立酵母表达载体PGAPZαA P30CTX。重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定。使用生物信息软件分析P30CTX复合基因,预测编码蛋白结构。结果重组质粒经PCR可得1313bp的特异条带,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切获得1313bp和3085bp的条带,与预期大小一致,测序结果证实为pGAP P30CTX基因,序列分析同源性为99.82%,P30CTX蛋白结构折叠无明显改变。结论成功构建了含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,预测毕赤酵母表达系统对P30CTX的抗原性不会产生影响。
- 周怀瑜何深一丛华古钦民李瑛赵群力杨婷婷张加勤
- 关键词：刚地弓形虫P30酵母表达载体
- 弓形虫主要表面抗原p30单价及复合基因疫苗的构建被引量：12
- 2005年
- 目的 构建弓形虫单价基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0及复合基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0 ROP2 ,并比较两种疫苗对小鼠的免疫保护性。 方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增编码弓形虫主要表面抗原 p3 0和弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )的基因片段 ,经T A克隆 ,将p3 0单价基因及 p3 0 ROP2复合基因片段分别插入真核细胞表达载体pcDNA3 1,构建重组真核表达质粒 pcDNA3 1 p3 0及pcDNA3 1 p3 0 ROP2。分别免疫BALB/c小鼠 ,设磷酸缓冲盐溶液 (PBS)组、pcDNA3 1空质粒组为对照 ;酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测血清特异性IgG抗体 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。 结果 获得 pcDNA3 1 p3 0、pcDNA3 1 p3 0 ROP2重组表达质粒 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,其IgG抗体吸光度 (A490 =2 0 5 1± 0 3 3 7)高于用 pcDNA3 1 p3 0的吸光度 (A490 =1 892± 0 3 69) (P <0 0 5 )。攻击感染弓形虫后小鼠生存时间 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,较用 pcDNA3 1 p3 0的明显延长 (P <0 0 1)。 结论 弓形虫不同生活阶段的抗原复合基因疫苗较单价基因疫苗具有更好的免疫保护性。
- 杨婷婷何深一蒋华古钦民丛华周怀瑜张加勤李瑛赵群力
- 关键词：PCDNA3弓形虫基因疫苗真核细胞表达载体
- 弓形虫抗原与霍乱毒素A2/B亚基复合基因在小鼠体内诱导的免疫反应被引量：3
- 2005年
- 目的 观察弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2 与霍乱毒素A2 /B亚基复合基因真核质粒经肌肉免疫小鼠所诱导的免疫反应。方法 将SAG1基因、SAG2 基因及CTXA2 /B基因定向连接插入真核表达质粒pcDNA3.1,经酶切及测序,获得pcDNA3.1 SAG1 SAG2 及pcDNA3.1 SAG1 SAG2 CTXA2 /B的重组子;碱裂解法大量制备经肌肉注射免疫BALB/c鼠,每只鼠经后腿肌肉注射质粒10 0 μg ,每2周免疫1次,共3次,以PcDNA3.1空质粒注射组及PBS组为对照,分别于每次免疫前断尾取血和免疫后4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性及NK细胞活性,ELISA法测定IgG抗体。结果 免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高,NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强。免疫鼠抗攻击感染的时间延长。结论 含有霍乱毒素的复合基因免疫小鼠后体液免疫和细胞免疫水平均有提高。
- 丛华古钦民江渊周怀瑜何深一杨婷婷李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫DNA免疫
- 小鼠口服弓形虫DNA混合疫苗的免疫保护反应被引量：8
- 2005年
- 目的观察携带弓形虫表面抗原复合基因重组沙门氏菌经口免疫BALB/c小鼠所诱导的免疫反应。方法构建弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2复合基因真核表达质粒,将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌BRD509(BRD509/pSAG1/SAG2),经口服免疫BALB/c小鼠,以携带空载体质粒的减毒沙门氏菌BRD509及生理盐水(NS)组为对照,分别于每次免疫前和免疫后断尾取血,并于末次免疫后第4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、天然杀伤细胞(NK细胞)活性和T细胞亚群;ELISA法测定IgG抗体及血清中的细胞因子干扰素(IFN-γ),白介素-4(IL-4)。与末次免疫后4周,每只小鼠腹腔注射0.1ml(105)弓形虫RH株速殖子攻击,观察小鼠存活时间。结果免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高,滴度为1∶100;NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强,其中NK细胞杀伤活性为85%±7%,T细胞增殖指数为2.83,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫鼠攻击感染后平均存活时间比对照组长5d。结论弓形虫口服DNA混合疫苗可诱导小鼠产生保护性免疫。
- 丛华古钦民周怀瑜郭岚杨婷婷何深一李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫
- 弓形虫SAG1-SAG2复合DNA疫苗免疫小鼠诱导的免疫保护性被引量：11
- 2006年
- 目的利用已构建的弓形虫主要表面抗原SAG1DNA疫苗及SAG1-SAG2复合DNA疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法将两核酸疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠,对照组注射pcDNA3.1空质粒。ELISA法检测血清IgG抗体及细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-4;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定免疫鼠脾脏NK细胞杀伤率;流式细胞仪测定T细胞亚群;用弓形虫速殖子腹腔攻击感染小鼠,观察小鼠的生存时间。结果SAG1-SAG2组小鼠IgG抗体、IFN-γ、IL-2及CD4+/CD8+细胞比例均高于SAG1组(P<0.05);各组均未检测到IL-4;复合DNA疫苗组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫SAG1-SAG2复合DNA疫苗较SAG1单基因疫苗具有更好的免疫保护性。
- 孙怡何深一丛华杨婷婷周怀瑜古钦民李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫复合基因DNA疫苗
- 天冬酰胺合成酶在卵巢癌中的作用及表达调控研究
- 卵巢癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁女性的生命健康。迄今为止，已有大量研究表明，天冬酰胺合成酶(ASNS)在多种类型的恶性肿瘤的发生发展中发挥着关键作用，而其在卵巢癌中的研究却知之甚少。因此，本论文主要探讨了ASN...
- 杨婷婷
- 关键词：卵巢癌谷氨酰胺酶抑瘤作用
- 弓形虫表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨毕赤酵母能否高效表达具有生物学活性的弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B重组蛋白(P30-CTA2/B)。方法:将目的基因定向亚克隆入pGAPZαA表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-CTX;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选、PCR法鉴定阳性转化子;酵母工程菌摇瓶表达,取上清液行SDS-PAGE和Westernblotting分析。结果:在毕赤酵母菌中分泌表达P30-CTA2/B重组蛋白,产量高达0.57g/L;SDS-PAGE显示其在49000处有一条明显表达蛋白条带,Westernblotting显示表达蛋白具有P30抗原特异性。结论:大量具有免疫活性的P30-CTA2/B重组蛋白在毕赤酵母中表达,为弓形虫亚单位复合疫苗的研制和大规模动物实验创造了条件。
- 周怀瑜何深一丛华古钦民李瑛赵群力张加勤杨婷婷
- 关键词：弓形虫病毕赤酵母
- 一种水溶性复方过硫酸氢钾消毒剂及其制备方法
- 本发明涉及一种水溶性复方过硫酸氢钾消毒剂，所述消毒剂包括如下质量百分比的组分：氧化剂91％～92.3％、季铵盐类7.7％～9％；复方消毒剂水溶液浓度为0.54％‑0.70％(W/V)。本发明将过硫酸氢钾复合盐与季铵盐类进...
- 周燕霞刘肖肖姜慧凝吕玮杨婷婷
- 弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1-ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察被引量：18
- 2005年
- 目的构建弓形虫主要表面抗原SAG1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白ROP2的复合基因疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒pcDNA3.1SAG1及pcDNA3.1SAG1ROP2。将两核酸疫苗分别免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体、IFNγ、IL4;流式细胞仪测定T细胞亚群;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。结果获得pcDNA3.1SAG1、pcDNA3.1SAG1ROP2重组质粒;pcDNA3.1SAG1ROP2组小鼠IgG抗体(P<0.05)、IFNγ(P<0.01)及CD8+细胞比例(P<0.05)均高于pcDNA3.1SAG1组;实验组组均未测到IL4;复合基因组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫不同生活阶段的抗原基因复合疫苗较单基因疫苗具有更好的免疫保护性。
- 杨婷婷何深一张加勤周怀瑜丛华古钦民李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫SAG1ROP2复合基因
- 一种水溶性复方过硫酸氢钾消毒剂及其制备方法
- 本发明涉及一种水溶性复方过硫酸氢钾消毒剂，所述消毒剂包括如下质量百分比的组分：氧化剂91％～92.3％、季铵盐类7.7％～9％；复方消毒剂水溶液浓度为0.54％‑0.70％(W/V)。本发明将过硫酸氢钾复合盐与季铵盐类进...
- 周燕霞刘肖肖姜慧凝吕玮杨婷婷
