李继文
- 作品数：15 被引量：110H指数：5
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目国家高技术研究发展计划首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4过度表达对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响被引量：3
- 2006年
- 目的观察过度表达超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型(HCN)4对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法分离20只乳鼠的原代心肌细胞并进行培养,用含HCN4基因的重组腺病毒AdHCN4感染心肌细胞,以未感染细胞作为对照组,通过RT-PCR及细胞免疫荧光方法检测心肌细胞中HCN4基因在mRNA和蛋白质水平的表达,用全细胞膜片钳方法测定转染HCN4基因的心肌细胞的动作电位和起搏电流If。结果AdHCN4感染组心肌细胞中HCN4mRNA和蛋白质的表达水平明显高于对照组细胞;感染组心肌细胞自发搏动的频率为(92·5±7·4)次/分,明显高于对照组心肌细胞的(68·9±6·2)次/分(P<0·05);动作电位出现明显的4相自动除极化,其最大舒张电位(-52·8±4·2)mV明显高于对照组细胞(-62·1±2·6)mV(P<0·05);动作电位复极50%和90%的时间两者比较差异无统计学意义;在感染组细胞中,起搏电流If的电流密度为(115·7±7·8)pA/pF,也明显高于对照组细胞的(7·2±0·6)pA/pF(P<0·05)。结论过度表达起搏通道基因HCN4能够明显增强乳鼠心肌细胞的自律性,从而增加心肌细胞自发搏动的频率,这提示HCN4基因有可能成为治疗缓慢性心律失常疾病的目的基因。
- 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕
- 关键词：离子通道电生理学动作电位心肌细胞
- 二甲基亚砜诱导小鼠胚胎干细胞向心肌分化过程中的毒性作用
- 目的研究DMSO在诱导小鼠胚胎干细胞向心肌分化过程中的毒性作用。方法MESPU13小鼠胚胎干细胞培养在丝裂霉素处理的ICR鼠胚制成的饲养层上,细胞消化成单个细胞后经差速贴壁除去饲养细胞后以400ES/20μl置于培养皿上...
- 刘元伟郭继鸿张萍周春燕李继文
- 文献传递
- 稳心颗粒甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流和瞬时外向钾电流激活动力学的影响被引量：59
- 2009年
- 目的研究步长稳心颗粒中甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)、瞬时外向钾电流(Ito)激活动力学的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,研究10 g/L甘松提取物对急性分离的成年大鼠心室肌细胞INa、Ito激活动力学的影响。结果①10 g/L甘松提取物使大鼠心室肌细胞INa峰值(INa,max)从-58.96±2.71 pA/pF降至-31.66±1.29 pA/pF(n=5,P<0.01);②10 g/L甘松提取物使Ito峰值(Ito,max)由3.40±1.52 pA/pF降到1.43±0.64 pA/pF(n=7,P<0.05)。10 g/L甘松提取物对INa和Ito的抑制率分别达38.2%和57.9%。结论10 g/L甘松提取物对大鼠心室肌细胞INa、Ito具有显著抑制作用。
- 刘元伟郭继鸿张萍李继文李春
- 关键词：心血管病学全细胞膜片钳钠电流瞬时外向钾电流
- 遗传性长QT综合征HERG基因Y652X新突变
- 目的对一个中国人遗传性长QT综合征2型(LQT2)家系进行相关基因突变位点的检测及临床表型特点的分析。方法以一名临床表现和心电图表现符合LQT2的先证者为研究对象,分析家系成员的心电图表现及临床特征。应用聚合酶链式反应
- 孙雅逊张萍李学斌刘刚李继文郭继鸿
- 文献传递
- 起搏通道基因hHCN2和hHCN4亚型在大鼠心脏构建生物起搏器的比较研究
- 目的: 探讨分别利用hHCN2和hHCN4起搏通道基因亚型体内转染大鼠心脏构建生物起搏器的可行性比较基频率差别.
方法: 6周龄SD大鼠随机分AdGFP注射组(n=10),分别经心外膜注射50μl重组腺病毒(滴...
- 钟幼民郭继鸿张萍李继文刘元伟张幼怡周春燕
- 关键词：生物起搏器离子通道起搏电流腺病毒
- 文献传递
- Connexin40基因多态性与心房颤动的相关性研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨Connexin40基因多态性与心房颤动的相关性。方法采用等位基因聚合酶链反应(PCR)的方法,对北京地区110例研究对象进行两种Connexin40单核苷酸多态性的检测,其中孤立性房颤组50例,高血压房颤组18例,单纯高血压组12例,健康对照组30例。结果孤立性房颤、高血压房颤、单纯高血压与健康对照组之间Connexin40启动子区域-44位点(G→A)单核苷酸多态等位基因频率和基因型频率存在分布差异显著(p<0.05);房颤组与非房颤组相比,在Connexin40启动子区域-44位点A基因型频率及A等位基因频率高于非房颤组(p<0.05);孤立性房颤、高血压房颤、单纯高血压与健康对照组之间Con-nexin40启动子区域(+71)的基因型频率及等位基因频率的分布差异没有显著性(p>0.05)。结论Connex-in40基因多态性(-44G→A)与心房颤动发生具有相关性。
- 周琪张萍李学斌张海澄李鼎李继文郭继鸿
- 关键词：心房颤动基因多态性
- 起搏通道基因亚型HCN4重组腺病毒载体的构建及通道电流检测被引量：23
- 2006年
- 目的旨在构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4(HCN4)重组腺病毒载体并鉴定其离子通道功能。方法全长人HCN4基因酶切后亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,形成含目的基因和绿色荧光蛋白基因的穿梭载体。穿梭载体和病毒骨架载体pAdEasy-1经电穿孔法在BJ5183大肠杆菌中同源重组,重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用脂质体介导转染到HEK293细胞进行病毒的包装和扩增。用多聚酶链反应(PCR)方法对病毒上清中的HCN4进行检测,并将重组腺病毒感染COS-7细胞,用免疫荧光染色检测HCN4蛋白质的表达,利用全细胞膜片钳方法测定转HCN4基因细胞的电生理功能。结果通过酶切、测序、PCR等证实HCN4通道基因重组腺病毒载体构建正确,免疫荧光检测证实转染AdHCN4的COS-7细胞中HCN4通道基因的表达,膜片钳实验也在转基因细胞中检测到超极化激活的非选择性内向阳离子电流(If)。结论HCN4通道基因重组腺病毒载体的构建成功为进一步研究该离子通道的电生理功能及在心律失常疾病基因治疗方面的潜在应用价值奠定了基础。
- 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕
- 关键词：超极化激活环核苷酸门控阳离子通道起搏电流腺病毒
- 人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因体内转染大鼠心脏进行生物起搏的初步研究被引量：1
- 2007年
- 严重的缓慢性心律失常往往需要置入电子起搏器。然而，电子起搏器自身存在一些局限性。近年来，人们开始探索采用基因治疗和细胞治疗技术构建生物起搏器。目前，构建生物起搏器的策略有多种，其中以通过增强起搏电流（pacemaker current，If）来构建生物起搏器的策略最受关注。If的分子基础是超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（hyperpolarization—activated cyclic nucleotide-gated cation channel，HCN）。本研究的目的是探讨利用人类HCN2（hHCN2）转染到大鼠心脏中进行生物起搏的可行性、安全性和时效性。
- 张萍郭继鸿钟幼民李继文刘元伟张幼怡周春燕
- 关键词：超极化激活环核苷酸门控阳离子通道生物起搏器大鼠心脏体内转染离子通道基因
- Cx40基因多态性与心房颤动的相关性研究
- 目的探讨Cx40基因多态性与心房颤动(房颤)的相关性。方法采用等位基因聚合酶链反应(PCR)的方法,对2002—2003年北京地区110例研究对象进行两种单核苷酸多态性的检测,其中孤立性房颤组50例,高血压房颤组18例,...
- 周琪张萍李学斌张海澄李鼎李继文郭继鸿
- 文献传递
- HEK293细胞上表达的人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2和亚型4的电生理
- 2007年
- 目的将人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2(hHCN2)和亚型4(hHCN4)的基因表达于 HEK293细胞系上,观察其表达的通道的电生理特点。方法包含目的基因 hHCN2或hHCN4的 cNDA 亚克隆到腺病毒穿梭载体 pAdTrack-CMV,穿梭载体和病毒骨架载体 pAdEasy-1在大肠杆菌重组,病毒经过包装和扩增后分别转染 HEK293细胞。利用全细胞膜片钳技术,记录分别转染了 hHCN2和 hHCN4的 HEK293细胞上的超极化激活钾电流(I_f)。结果转染 hHCN2和 hHCN4的HEK293细胞上产生超极化激活的内向电流。两种通道的半数最大激活电压分别为-114.8 mV±3.3 mV 和-125.9 mV±2.9 mV,反向曲线斜率分别为11.1 mV±1.2 mV 和13.7 mV±1.3 mV。两者的激活动力学明显不同,刺激电压为-110 mV 时,通道的激活时间常数分别为0.99 s±0.21 s 和8.47 s±2.85 s。两种通道对钠离子和钾离子的相对通透性分别为0.40和0.34。两种电流均可被2mmol/L 的氯化铯(CsCl)阻断。结论目的基因 hHCN2和 hHCN4在 HEK293细胞上成功表达,形成的两种通道具有明显不同的激活动力学。
- 李春郭继鸿李继文刘元伟郝雪梅王世强
- 关键词：全细胞记录HEK293
