徐蕾
- 作品数：76 被引量：138H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 结构特异性核酸酶FEN1对HBV复制的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探索宿主因子FEN1对HBV复制过程的影响。方法构建FEN1过表达慢病毒质粒,酶切鉴定并测序,转染293FT细胞,Western blot检测FEN1蛋白表达。将该质粒转染HBV复制稳定细胞系,设立慢病毒包装改造质粒pLenti6/V5-D-TOPO和不转染质粒的细胞作为对照。ELISA检测细胞上清,Southern blot及Real-time PCR检测HBV DNA。结果初筛阳性克隆提取质粒酶切鉴定,于FEN1及线性载体质粒大小处出现明亮单一条带,测序结果表明序列插入正确,Western blot检测FEN1蛋白表达量为对照的2～3倍。FEN1过表达质粒转染HBV复制稳定细胞株,细胞上清ELISA检测HBsAg抗原呈阳性,D(450)值为(1.982±0.032);细胞内提取病毒DNA行Real-time PCR,绝对定量拷贝数为1.18×109,Southern blot检测亦表明HBV复制水平明显上调。结论结构特异性核酸酶FEN1能够明显促进HBV DNA复制,是体内一种重要的病毒复制调控因子。
- 潘万龙方岩许舸单雪峰徐蕾陈可黄爱龙胡接力
- 关键词：慢病毒载体乙型肝炎病毒病毒复制
- 留学生医学微生物学教学的实践与探索被引量：4
- 2013年
- 通过分析医学留学生的特点,针对性地从选择合适教学内容、综合应用多媒体、灵活选择教学方法、充分利用实验的互补性等方面,经多年探索与实践,提出了积极、有效改进留学生教学的教学方法及手段,提高了留学生医学微生物学教学质量,并为完善留学生医学教育提供参考。
- 涂增何永林徐蕾郭亚楠蒋仁举田一玲杨致邦杨春
- 关键词：医学微生物留学生教学教学质量
- 佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用
- 2014年
- 目的探讨佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素(granulysin,GLS)表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA(130、160、180 nmol/L)诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。
- 杨静杨春何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：佛波酯THP-1细胞颗粒溶素
- 青年教师如何上好留学生微生物学实验课的探索被引量：11
- 2008年
- 经济全球化和综合国力的提高，使我国同其它国家间的文化交流日益普遍，大量的国外学生进入我国高校。作为高校教学主力军的青年教师，如何上好留学生教学课，是教师面临的一个崭新的研究课题。本文就青年教师在医学微生物学实验教学过程中，如何针对留学生的特点、选择合适教材、作好教学准备、保证教学实施和课后辅导与反馈进行思考，并就青年教师如何上好实验课进行初步探索。
- 何永林蒋仁举徐蕾
- 关键词：青年教师留学生医学微生物学实验教学
- hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨
- 2014年
- 目的:探讨hsa-microRNA-218(hsa-mir-218)对颗粒溶素(Granulysin,GLS)表达的影响。方法:抽提佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)激活的THP-1细胞的总RNA,逆转录后PCR扩增GLS基因,将其克隆至pDsRed-Express-C1,构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218(pGenesil-mir-control)共转染293T细胞,36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况,48 h后提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果:酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功,且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比,Western blot结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50%,而GLS mRNA表达无明显变化。结论:hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达,为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
- 樊宇杨春张璐渝杨静何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：颗粒溶素T细胞RNA干扰激光共聚焦
- 牛磺酸对白细胞介素－1β损伤的胰岛细胞分泌的影响被引量：12
- 1996年
- 在Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠离体培养胰岛细胞中定量观察了ＩＬ－１β对胰岛素分泌的抑制作用以及牛磺酸的反转效应。实验结果表明：①ＩＬ－１β（５～２０Ｕ／ｍｌ）可抑制胰岛β细胞的分泌功能，表现为胰岛素的基础分泌和葡萄糖刺激时的分泌量均明显减少。②经ＩＬ－１β处理的胰岛细胞加入牛磺酸共同孵育后，可见胰岛素的基础分泌量和糖刺激时的分泌量均显著增加，表明牛磺酸能反转ＩＬ－１β的抑制作用，并且这种反转效应有量效和时效关系。
- 张能方海立张英徐蕾朱道银王笛力
- 关键词：胰岛素依赖型白细胞介素-1Β牛磺酸
- Ipr1/PPE68穿梭质粒构建及诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨
- 2012年
- 目的构建Ipr1/PPE68共表达穿梭质粒pBIPO(pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征。方法将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,经酶切测序及Western blotting鉴定后,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫后2w处死小鼠,ELISA法分别检测小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞数量,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,同时观察肺脾组织病理学变化。结果酶切测序鉴定PPE68和Ipr1基因序列与理论值相符,Western-blotting鉴定PPE68和Ipr1蛋白表达成功。质粒pBIPO免疫后小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平与CD4+和CD8+T细胞表达均呈现出有意义的提高,脾淋巴细胞增殖与BCG组相比差异无统计学意义,肺脾组织未见病理学改变。结论成功构建DNA疫苗(pBIPO),该疫苗能够有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定基础。
- 张壮苗杨春靳志栋何永林徐蕾王静娴董志玲李岱容
- 关键词：MTBPPE68免疫应答
- 仿真塑胶细菌培养物在“医学微生物学实验”教学中的应用被引量：1
- 2022年
- 医学微生物学实验是医学院校不可缺少的基础必修课,也是涉及实验室生物安全的特殊课程。为杜绝生物安全隐患,避免实验结果不稳定及生化反应现象不典型的问题,将医学微生物实验中示教的典型细菌培养物和细菌的生化反应结果制成仿真塑胶教具,并应用于实验教学,对实验组与对照组学生的实验考核和问卷调查结果进行统计分析。结果表明仿真塑胶教具仿真度较高,示教观察点能达到教学要求,学生和教师对仿真教具的接受度高,试点班应用后学生考核成绩略高于对照组,达到预期的教学效果。细菌培养物仿真塑胶教具有很好的应用价值。
- 刘佳杨致邦李革何永林涂增徐蕾卢楠张光媛郭亚楠
- 关键词：医学微生物学实验致病菌实验教学
- Ipr1/PPE68重组BCG诱导BALB/C小鼠免疫应答的探讨
- 2013年
- 目的构建Ipr1/PPE68重组卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探讨其诱导BALB/C小鼠免疫应答的效果。方法将Ipr1和PPE68基因及结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)复制子OriM分别插入pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,将其电转入BCG,构建Ipr1/PPE68-rBCG并将rBCG免疫BALB/C小鼠,检测小鼠血清中IgG2a、IL-12、IFN-γ及IL-4的水平、特异性脾淋巴细胞增殖和CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察脾、肺荷菌量及脾、肺组织病理学变化。结果酶切测序及菌落PCR鉴定Ipr1和PPE68以及OriM基因序列与理论值相符,Western-blotting结果显示Ipr1和PPE68蛋白成功表达。Ipr1/PPE68-rBCG免疫小鼠后,血清中的IgG2a和IL-12水平及脾淋巴细胞增殖情况明显高于对照组,但与BCG组相比没有显著意义;IFN-γ水平显著低于BCG组,与对照组相比无显著性差异;各组别IL-4的水平差异均不明显。脾、肺荷菌实验未见菌落生长,肺、脾组织未见病理学改变。结论成功构建Ipr1/PPE68-rBCG,该重组BCG能诱导BALB/C小鼠的细胞免疫应答。
- 张壮苗杨春徐蕾何永林王静娴董志玲杨静
- 关键词：结核分枝杆菌免疫应答
- RseA基因影响耻垢分枝杆菌药物敏感性的生物信息学分析与初步验证
- 2021年
- 目的筛选RseA在耻垢分枝杆菌中可能调控药物敏感性的基因或通路,并进行初步验证。方法利用分子克隆技术构建RseA基因过表达耻垢分枝杆菌组和空质粒对照组;利用转录组测序技术和生物信息学方法筛选2组细菌间的差异表达基因(DEGs),分析其基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集情况;并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。利用结核分枝杆菌复苏促进因子E(RpfE)促使非复制持留菌复苏,测定复苏指数(RI)对筛选出的关键靶向基因或通路进行初步验证。结果RseA基因过表达后,筛选出2403个DEGs,其中2335个表达上调,68个表达下调。GO分析结果表明,DEGs主要参与氮化合物代谢过程的调控、RNA代谢过程的调控、转录因子活性和序列特异性DNA结合过程调控等。KEGG分析结果显示,DEGs主要参与萜类骨架的生物合成、果糖和甘露糖代谢和同源重组等通路。从PPI网络MCODE模块中筛选出前8个hub基因rpsG、rplM、rpsO、rpsT、rpmH、rplS、rpsJ、rplT,并从这些基因的分析结果得知,其主要参与了核糖体通路。使用RpfE促进复苏后,RseA组复苏指数明显低于对照组。结论RseA调控了多个靶向基因,参与核糖体的结构组成和核糖体通路,增强耻垢分枝杆菌对抗结核药物的敏感性,为进一步的机制研究奠定了基础。
- 熊雨菡李智颖卢楠陈俊伊唐佳玲徐蕾杨春何永林
- 关键词：转录组测序耻垢分枝杆菌生物信息学药物敏感性
