张松林
- 作品数：15 被引量：70H指数：4
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究
- PCR扩增PCV2ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二...
- 宋云峰肖少波金梅林张松林陈焕春
- 文献传递
- PCV2 ORF2自杀性DNA疫苗的构建及免疫效果初步研究
- 猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于环状病毒属,该病毒无囊膜,病毒粒子直径约为15-17nm,基因组为单链环状DNA,大小约为1．7Kb,主要由两个大的开放阅读框架组成,OR...
- 宋云峰金梅林肖少波张松林陈焕春
- 文献传递
- 一种伪狂犬病gEˉ/gIˉ基因缺失毒株、含有该毒株的灭活疫苗及应用
- 本发明公开了一种重组的伪狂犬病毒Pseudorabies virus，PrV)基因工程株WKQ－001，保藏号为CCTCC－V200511的构建以及利用该毒株制备的伪狂犬病毒基因缺失标志灭活疫苗。本发明的毒株缺失了PrV...
- 金梅林张松林宋云峰方六荣陈焕春
- 文献传递
- PCV2 ORF2自杀性DNA疫苗的构建及免疫效果初步研究
- 以猪2型圆环病毒(PCV2)豫A株为模板,用PCR方法扩增其主要免疫源性基因ORF2,并将其分别克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1和pSHAME2a,构建了ORF2的自杀性DNA疫苗pSORF2和pMORF2。肌肉注射...
- 宋云峰肖少波金梅林张松林陈焕春
- 关键词：PCV2ORF2自杀性DNA疫苗
- 文献传递
- SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性研究
- 目的：预测猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的B细胞表位，并分析其免疫学特性。方法：运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数，预测MRP的B细胞优势表位簇；PCR扩增出表...
- 吴立志伍晓雄张松林刘磊肖跃强夏小静沈志强
- 关键词：猪链球菌原核表达免疫保护
- 伪狂犬病gE<'->/gI<'->基因缺失突变株及禽流感假病毒的构建以及免疫效果的研究
- 1伪狂犬病毒鄂A株gE-/gI-基因缺失突变株的研究伪狂犬病是威胁世界养猪业的主要疾病之一。虽然美国和欧洲一些国家已经根除了该病，但是在中国和世界上许多其他国家，伪狂犬病每年仍然给这些国家带来巨大的经济损失。根除伪狂犬病...
- 张松林
- 关键词：伪狂犬病伪狂犬病毒免疫效果灭活疫苗
- 文献传递
- 猪2型圆环病毒Cap蛋白在伪狂犬病病毒中的表达被引量：4
- 2007年
- 用EcoR酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ+基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞。收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2+。用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证明该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白。重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定。该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8TCID50/0.1mL。
- 宋云峰肖少波曹胜波张松林陈焕春金梅林
- 关键词：CAP蛋白ORF2基因疫苗
- 用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究被引量：41
- 2005年
- 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。
- 刘丽娜何启盖陈焕春刘正飞张松林汪招雄
- 关键词：猪伪狂犬病基因缺失疫苗PRVGE基因酸模
- 猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究被引量：18
- 2005年
- PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠,分别注射pCD-NA3.1(+)、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2,共免疫2次,间隔2周,分别于首免后2周和二免后4周采血,ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达,将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体,构建了pNORF2和pNBVP22,转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示,通过两次免疫后,各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体,同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果,其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。
- 宋云峰肖少波金梅林张松林陈焕春
- 关键词：蛋白转导核酸疫苗
- 整合HA蛋白的HIV假病毒展示禽流感病毒感染宿主细胞机制被引量：5
- 2008年
- 通过将高致病性禽流感病毒HA蛋白整合到HIV颗粒,包装成表达HA蛋白的假病毒粒子(命名为HIV/H5-HA),并对所包装的假病毒的生物学功能进行了研究.通过RT-PCR获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)上,通过与假病毒构建体系的2种质粒pCMV△8·2和pHR′-CMVLacZ共转染293T细胞,包装成假病毒颗粒.利用LacZ染色和HA假病毒颗粒感染MDCK等6种细胞株并对标记基因LacZ进行检测.结果表明,HIV/H5-HA与天然的禽流感病毒相似,具有广泛的细胞嗜性;Western印迹和FACS检测结果,和HA假病毒颗粒的电镜照片确认了HA基因在假病毒颗粒表面得到了表达;HIV/H5-HA能够凝集鸡红细胞,并且pH值依赖性测定表明,HA假病毒需要低pH值才能实现正确的入侵宿主细胞.本研究结果显示:禽流感病毒H5N1亚型的HA基因得到了有效的包装,并且所包装的假病毒颗粒能够表达具有高度生物活性的HA蛋白.同时,假病毒模型的建立为进一步研究禽流感病毒与宿主之间的免疫应答提供了一种新的途径.
- 张松林金梅林肖凌云陈焕春
- 关键词：禽流感病毒血凝素蛋白假病毒
