张中保
- 作品数：28 被引量：129H指数：7
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- 聚乙二醇和细胞穿膜肽介导提高玉米花粉管通道法转化效率
- 2022年
- 为探讨花粉管通道法加聚乙二醇(PEG)介导、加细胞穿膜肽(CPPs)介导与直接导入外源基因3种方式间的转化率差异,对2种玉米自交系材料京2416和京92进行花粉管通道法转化并统计分析。结果表明,3种方式均能获得草甘膦抗性植株,在京2416受体中PEG介导较直接导入高0.45百分点,CPPs介导的较直接导入的高0.66百分点,三者间转化率差异达显著或极显著水平;对T_(0)代草甘膦抗性植株PCR进行检测,发现因外源基因丢失或沉默,草甘膦抗性植株未必都含有目的基因,因此田间筛选应与PCR检测相结合;北京市农林科学院房山转基因基地转化验证结果发现3种导入方式其草甘膦抗性率和转化率高低顺序一致,均为CPPs介导>PEG介导>对照,与海南省三亚市崖城基地转化相同,且CPPs介导和PEG介导二者间差异极显著,京2416中二者相差0.26百分点,京92中相差0.36百分点。因此,在花粉管通道法转化玉米过程中加入介导物质有助于提高转化率,且加CPPs比加PEG更具有优势。
- 李向龙张中保张春郑登俞王作平吴忠义
- 关键词：玉米花粉管通道法转化率
- 玉米ZmGRAS31基因的克隆及功能研究被引量：11
- 2019年
- GRAS 蛋白家族是一类植物特有的转录调控因子,在多种植物中均有报道。为了探究玉米 GRAS 基因家族在逆境胁迫下的功能,本研究从玉米根中克隆获得 ZmGRAS31 (AC: NC_024462),该基因全长 1422 bp,编码 473 个氨基酸。生物信息学分析表明 ZmGRAS31 蛋白分子量为 51,700.38 Da,理论等电点为 4.73,具有 GRAS 转录因子家族特有的保守结构域,但不具跨膜结构,亲水性较差。玉米原生质体瞬时表达实验表明 ZmGRAS31 定位于细胞核内。实时荧光定量 PCR (qPCR)分析表明,在低温、脱水、高盐、干旱处理下, ZmGRAS31 在玉米幼苗均上调表达;不同浓度NaCl 处理过表达 ZmGRAS31 转基因拟南芥植株,其根长优于野生型,由此推测该基因可能参与玉米非生物胁迫应答。
- 殷龙飞王朝阳吴忠义张中保于荣
- 关键词：玉米转录因子原生质体非生物胁迫
- 玉米抗旱相关基因的克隆与功能分析
- 水分胁迫是主要的非生物胁迫因子之一,严重影响植物生长及农作物生产。本研究在我们前期研究的干旱胁迫诱导的差减文库中克隆了三个受干旱诱导表达的基因:ZmFBL2、ZmCKS2和ZmBTF3b。 ZmFBL2基因编码蛋白ZmF...
- 张中保
- 关键词：玉米F-BOXMSK干旱基因功能
- 文献传递
- 利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数被引量：7
- 2017年
- 基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T_0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该方法与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法在分析结果的准确性方面进行了比较,从试验数据可以看出,2种检测方法的结果比较一致,单拷贝检测结果高度一致;但是ddPCR试验操作更加简便,试验结果可重复性强,试验数据更加准确可靠。研究表明,ddPCR方法是一种更加便捷、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,基于其在准确性和灵敏度方面的显著优势,将会在转基因作物的外源基因拷贝数分析中得到广泛的应用。
- 王犇张春李向龙张中保邹华文吴忠义
- 关键词：转基因玉米外源基因拷贝数
- 玉米干旱诱导表达基因ZmCKS2的克隆与表达分析被引量：3
- 2010年
- 在本实验室前期研究的干旱胁迫相关的抑制差减文库(SSH)中,发现一个玉米干旱胁迫诱导表达的EST序列,与拟南芥AtCKS2和AtCKS1基因有较高的同源性。应用生物信息学手段和同源克隆的方法,分离得到该基因,命名为ZmCKS2。序列分析表明该基因开放阅读框区267bp,编码88个氨基酸。ZmCKS2蛋白含有真核生物中高度保守的CKS(cyclin-dependent kinase regulatory subunit)结构域。应用在线分析软件预测该基因上游2kb序列表明,该序列具有启动子的核心序列和增强子序列,同时还具有与干旱等多种逆境胁迫相关的调控序列。应用实时荧光定量PCR分析表明该基因在幼穗中表达量最高,且受干旱和MeJA诱导上调表达,受低温和外源ABA诱导下调表达。
- 张中保卢敏李会勇张登峰刘颖慧石云素宋燕春王天宇黎裕
- 关键词：逆境胁迫启动子玉米
- 花粉管通道法转EPSPS基因创制耐草甘膦玉米种质
- 2023年
- 【目的】对T_(0)-T_(3)代转基因植株进行抗草甘膦EPSPS基因的筛选检测,以期得到遗传稳定的转基因株系。【方法】利用花粉管通道法将EPSPS基因转入优良自交系京92中,通过田间草甘膦筛选和分子检测鉴定外源基因在世代间的遗传表达。【结果】在田间用200 mg·L^(-1)的草甘膦除草剂筛选,T_(0)代15个抗性植株经PCR鉴定,共获得10个阳性植株,转化率为1.03%;对各株系从T_(1)代到T_(3)代逐代筛选淘汰,株系内阳性株数逐渐增多,在T_(3)代5个株系中分离出K3和K8两个整合了EPSPS外源基因的稳定遗传株系;进一步对K3和K8两个株系的T_(3)代采用试纸条进行功能表达分析,发现目的基因均能正常表达。【结论】K3和K8两个转基因玉米株系后期可作为培育耐草甘膦的基础材料。
- 李向龙郑登俞张春张中保吴忠义
- 关键词：玉米花粉管通道法
- 应用抑制差减杂交法分离玉米幼苗期叶片土壤干旱诱导的基因被引量：8
- 2007年
- 【目的】分离土壤干旱胁迫条件下玉米幼苗期叶片诱导表达的基因。【方法】本研究利用抑制差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)的方法,以耐旱自交系CN165为材料,构建了土壤干旱胁迫下玉米幼苗叶片的正向抑制差减cDNA文库。【结果】在这个文库中,随机挑取了672个阳性克隆,并进行PCR验证,对所有的单克隆进行了测序。得到了598个有效序列,经过EST聚类分析后,共得到了80个uniESTs。其中57个为contigs。23个为singlets。BLASTN的结果表明,所有的uniESTs都可以在玉米的核酸数据库中找到同源序列。BLASTX的结果表明:68个uniESTs和已知功能的蛋白有高度的相似性,8个uniESTs为未知功能蛋白和假定蛋白,4个uniESTs没有蛋白质的相似性。【结论】在这个cDNA文库中发现了大量抗旱相关的基因,这些基因涉及到植物代谢的多种途径。
- 李会勇黄素华赵久然王凤格张中保毛毅辉王秀堂石云素宋燕春王国英黎裕王天宇
- 关键词：玉米干旱诱导耐旱基因
- 与植物耐逆性相关蛋白ZmFBL2及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种与植物耐逆性相关蛋白ZmFBL2及其编码基因与应用。本发明提供了的蛋白质，名称为ZmFBL2，来源于玉米，是如下1)或2)的蛋白质：1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列2的氨基酸序...
- 黎裕张中保张登峰李会勇刘颖慧石云素宋燕春王天宇
- 文献传递
- 玉米1,3,4-三磷酸肌醇5/6激酶ITPK家族基因的鉴定和分析被引量：2
- 2015年
- 1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶(ITPK)是一种在动物、植物、线虫中都比较保守的多功能酶,在生物信号传导及生长发育中起重要作用。为了充分研究玉米中ITPK家族基因系统分析、全生育期基因表达模式及逆境胁迫表达模式,利用玉米基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定玉米ITPK家族基因的全序列、定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。利用玉米高通量芯片表达数据进行组织表达差异性、干旱胁迫和病害胁迫表达谱分析。结果表明,玉米基因组中含有6个ITPK家族基因,分布于玉米的4条染色体上。MEME保守结构域分析显示,Zm ITPK1-5均含有3个保守的ATP-grasp-4结构域,Zm ITPK6含有两个ATP-grasp-4保守结构域。进化树分析表明Zm ITPK可分为3个亚家族。各个发育阶段中,多数成员在生殖器官或营养器官中均有较高的表达量,只有Zm ITPK1在所有器官中表达量都不高。Zm ITPK2和Zm ITPK3基因受干旱胁迫处理诱导不同程度上调表达。而在生物胁迫条件下均无显著上调或下调表达。
- 张中保李向龙吴忠义魏建华
- 关键词：玉米保守结构域
- 应用实时荧光定量PCR技术分析玉米水分胁迫诱导基因的表达模式被引量：24
- 2007年
- 应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术,研究了玉米中10个水分胁迫诱导基因的相对表达量及表达模式。结果表明,在花丝中,除基因Mads和Grp外,其他8个基因均随干旱胁迫程度加重,相对表达强度增加;在幼穗中,除基因Mads外,其他9个基因均随干旱胁迫程度加重,相对表达强度增加。应用实时荧光定量PCR和宏阵列技术的研究表明,在水分胁迫条件下,基因Arf3、Mads、Trx和F15相对表达量较高,可能在玉米应答水分胁迫过程起更重要的作用。
- 张中保李会勇石云素宋燕春黎裕王天宇
- 关键词：实时荧光定量PCR玉米水分胁迫
