向威
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HDAC6通过调控细胞骨架微管蛋白的乙酰化来影响骨肿瘤细胞的增殖和侵袭能力
- 目的：通过研究组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在不同条件下对骨肿瘤(MG63和SW1353)细胞骨架微管蛋白(α-Tubulin)的乙酰化调控,来探讨HDAC6对骨肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：本研究通过使用HDA...
- 向威许凯郭风劲
- 关键词：乙酰化骨肿瘤增殖
- 脉冲强磁场诱导体外新生大鼠神经干细胞向神经元方向分化被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨脉冲强磁场对体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）向神经元方向分化的作用.方法 体外分离培养新生3d内的SD大鼠脑室下区的NCSs,无血清培养14d后,随机分为实验组和对照组.实验组置于脉冲强磁场条件下用前期探索的促增殖参数（0.1 Hz、4T、8次）进行干预,每次脉冲放电20 ms.对照组置于相同条件下但不做干预处理.干预后第1天,采用10％胎牛血清诱导贴壁分化,显微镜下观察不同时间段细胞形态学变化;贴壁分化后第7天,通过免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（Western Blot）及实时定量聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测NCSs分化后第7天神经元βⅢ微管蛋白（TUJ1）及星形胶质细胞相关特异性标志神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达.结果 干预后,免疫荧光染色示实验组TUJ1阳性细胞数为（33.4±5.1）％,较对照组[（26.5 ±7.0）％]明显增多（P＜0.05）,实验组的GFAP阳性细胞率[（23.9±5.0）％]较对照组[（36.2±2.2）％]明显减少（P＜0.05）.RT-PCR检测显示,实验组TUJ1的mRNA表达量是对照组的（1.682 ±0.086）倍,GFAP的mRNA相对表达量是对照组的（0.590±0.157）倍,且组间差异有统计学意义（P＜0.05）.Western Blot检测结果与RT-PCR检测一致,实验组TUJ1蛋白表达较对照组增多,GFAP蛋白表达较对照组减少.结论 脉冲强磁场具有促进NCSs向神经元分化,并抑制其向星形胶质细胞分化的作用.
- 蒋婷许涛向威龙兴蓝李冰冰彭涛孙衢骎
- 关键词：神经干细胞脉冲强磁场细胞分化神经元
- NF-κBshRNA转染骨髓间充质干细胞对炎症因子的影响被引量：1
- 2014年
- 目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。
- 吴颖星杨卿杨开祥叶亚平向威郭风劲
- 关键词：NF-ΚB间质干细胞骨关节炎
- Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响被引量：3
- 2014年
- 目的检测Hedgehog(HH)信号通路在人软骨肉瘤中的表达情况,探讨HH信号通路抑制剂HPI-4对于软骨肉瘤细胞SW1353增殖和侵袭能力的影响。方法应用免疫组化技术检测人软骨肉瘤标本中HH信号通路相关蛋白Ihh及增殖相关蛋白Ki67的表达情况,应用CCK-8实验、平板集落形成实验、Transwell肿瘤细胞侵袭实验及免疫印迹法(Western blot)检测HPI-4阻断HH信号通路后SW1353细胞增殖和侵袭能力的变化。结果免疫组化结果证实Ihh蛋白及Ki67蛋白在人软骨肉瘤中存在明显表达。经不同浓度HPI-4干预后,CCK-8实验显示软骨肉瘤细胞SW1353的增殖活性随HPI-4浓度的增高而逐渐降低;平板集落形成实验显示单个肿瘤细胞不断克隆形成集落的能力受到抑制;Transwell实验证实肿瘤细胞侵袭能力随着HPI-4浓度的增高而递减;Western blot结果显示肿瘤细胞内增殖与侵袭相关蛋白的表达明显下降。结论人软骨肉瘤中存在HH信号通路的明显激活,HH信号通路抑制剂HPI-4能够明显抑制软骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力。
- 向威郭风劲蒋婷宫晨杨开祥吴颖星许凯
- 关键词：软骨肉瘤肿瘤浸润细胞增殖
- 甲状旁腺素通过调控初级纤毛的表达促进软骨肉瘤细胞增殖和侵袭被引量：1
- 2017年
- 目的探究甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,及其与初始纤毛表达调控之间的相互关系。方法应用不同浓度PTH刺激软骨肉瘤细胞SW1353,缺氧诱导纤毛表达和水合氯醛破坏纤毛结构后,通过CCK8细胞活性实验,Western blot及Transwell实验检测SW1353细胞的增殖和侵袭能力,免疫荧光计数初始纤毛表达情况,荧光定量PCR检测相关目的基因GLI1、PTCH1和IFT88的表达情况。结果 PTH能促进软骨肉瘤细胞增殖,且呈浓度依赖性,其促增殖效应与纤毛结构的完整性有关;PTH能上调SW1353细胞的侵袭能力,增加基质金属蛋白酶MMP9的表达,破坏纤毛结构后,PTH促进软骨肉瘤的侵袭效应受到抑制;PTH下调SW1353细胞初始纤毛的数量,其效应与纤毛结构完整性有关;PTH能调控Hedgehog通路靶基因GLI1、PTCH1及纤毛功能相关基因IFT88的表达。结论 PTH能促进软骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,同时抑制软骨肉瘤细胞初级纤毛的表达并影响其下游靶基因表达,PTH可能通过作用于初始纤毛来调控软骨肉瘤的恶性生物学特性。
- 许凯向威成薇婷
- 关键词：甲状旁腺素增殖
- 周期性张应力联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞成骨分化的实验研究被引量：5
- 2017年
- 目的探讨周期性张应力（CTS）联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞（ASCs）成骨分化的作用。方法分离10只Sprague—Dawley（SD）大鼠的ASCs，分别按不同的干预方法将收集的ASCs细胞分为对照组（仅用普通培养基干预）、淫羊藿苷组（仅用淫羊藿苷干预）、1000μ组（仅用1000μ的CTS干预）、2000μ组（仅用2000μ的CTS干预）、3000μ组（仅用3000μ的CTS干预）和联合干预组（用2000μ的CTS联合淫羊藿苷进行干预）。淫羊藿苷的作用浓度为10^-7mol／L；CTS的设置参数为频率1．0Hz，应力大小分别为1000μ strain（简称1000μ）、2000μ、3000μ，每刺激5s之后休息15s，每日总刺激时间为2h。干预7d后，收获细胞采用Western Blot法检测碱性磷酸酶（ALP）蛋白的表达；用淫羊藿苷联合2000μ的CTS对ASCs进行干预3d后，收获ASCs细胞用Western Blot法检测其Runt相关基因转录因子2（Runx2）、YES相关蛋白（YAP）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达；分别于干预3d和7d后，采用ALP活性定量检测试剂盒对ALP活性进行检测；干预3d后，利用RT—PCR检测YAP下游靶基因CTGF和锚蛋白重复结构域1（Ankrd1）的表达；干预7d后，利用RT-PCR检测成骨分化相关基因骨桥素（OPN）和I型胶原的表达，并对各组所得数据进行统计学分析比较。结果淫羊藿苷和CTS（1000μ、2000μ、3000μ）均能显著促进ALP蛋白的表达。与1000μ和3000μ应力大小的CTS相比，2000μ的CTS具有最强的促ALP蛋白表达能力；且2000μ的CTS联合淫羊藿苷能显著促进ALP的表达及Runx2和CTGF的表达，且其联合作用时效应更明显；但淫羊藿苷和2000斗的CTS单独作用并不能促进YAP蛋白的表达，只有联合作用时才具有促YAP表达作用。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d和7d后均能显著上调ALP的活性，且其联合作用时上调ALP活性的效应更加明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用7d后，能显著�
- 叶亚平李娜向威王锐郭风劲许涛
- 关键词：淫羊藿苷周期性张应力脂肪干细胞成骨分化
- 唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞增殖和分化的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞体外增殖和成骨分化的影响。方法将小鼠胚胎成骨细胞体外传代培养,使用含不同浓度(1.0、0.1μmol/L)唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞,不含唑来膦酸的培养基作对照,培养1、3、5 d采用CCK-8试剂盒检测唑来膦酸对成骨细胞增殖的影响;培养14 d行碱性磷酸酶(ALP)染色;培养21 d行茜素红染色;培养7 d,实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测转录因子Runx2、成骨标志物Ⅰ型胶原(Collagen TypeⅠ)、ALP、骨钙素(OCN)基因的表达,免疫印迹法(Western Blotting)检测转录因子Runx2蛋白的表达。结果不同浓度的唑来膦酸干预细胞后,CCK-8实验检测吸光度值随天数增加而升高,各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。随着唑来膦酸浓度的升高,ALP染色和茜素红染色逐渐变浅,Runx2、Collagen TypeⅠ、ALP、OCN基因的表达量降低,Runx2蛋白的表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论唑来膦酸在选定浓度(1.0、0.1μmol/L)下不影响成骨细胞的增殖,但对其分化功能的抑制作用随着浓度的增加而增强。
- 黄鑫徐飞程鹏向威郭风劲陈安民黄仕龙
- 关键词：成骨细胞细胞增殖细胞分化二膦酸盐类
- 机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞，经白介素-1β（IL—1β）干预构建软骨细胞炎症模型，设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力＋IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力＋IL-10），IL-1β浓度为5ng／ml，以1Hz应力干预2h。采用Real—timePCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（C01．2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及n1．TOR表达，同时检测MEG3表达，采用免疫荧光染色检测自噬小体形成；si＋RNA沉默MEG3后，采用Real—timePCR检测LC3及Beclin-1表达。结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beelin-1基因及Beelin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P〈0．05）；2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P〈0．05）；5000μstrain组In—TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P〈0．05）；应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ／Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P〈0．05）；免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加，5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P〈0．05）；si—RNA沉默MEG3后，发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P〈0．05）。结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA—MEG3表达，从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。
- 汪立梅张家明吕正涛向威王胜洁吴颖星张津铭郭风劲许涛
- 关键词：软骨细胞自噬
