刘华洁
- 作品数：17 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株
- 本发明涉及一种高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*，属于生物技术领域。将细胞内源性gga-miR-9*运用慢病毒病毒表达系统构建含有pri-gga-miR-9*的重组慢病毒V<Sub>L+m...
- 欧阳伟王永山潘群兴王晓丽夏兴霞刘华洁张海彬
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性分析
- 为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3 蛋白的ELISA 抗原反应性，将IBDV vp3基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA 中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3 并转化E.col...
- 刘华洁杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春王永山
- 关键词：VP3蛋白
- gga-miR-9*对传染性法氏囊病病毒复制的影响
- 为研究gga-miR-9*对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究用化学合成的方法合成gga-miR-9*的模拟物gga-miR-9*mimics,转染DF-1-细胞,接种IBDV,分别收集上清液和细胞,测定I...
- 欧阳伟王永山杜希宁刘华洁张海彬
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响被引量：1
- 2015年
- 为了分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫能力的影响,本研究应用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h(12~84h)取3只鸡的法氏囊组织作为1个pool,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的mRNA水平,同时分析法氏囊组织的病理变化和病毒载量。结果显示:在QL/12组,IFN-α和IFN-βmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,48h达到峰值,随后降低;IFN-γmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,60h达到峰值,随后逐渐降低;p53mRNA含量迅速升高,60h达到峰值,随后降低。在B87组,IFN-αmRNA水平先降低后升高(48h达到最低值),而IFN-βmRNA水平变化不规则,72h含量最高;IFN-γmRNA水平先逐渐升高后降低(72h达到峰值);p53mRNA含量变化较小,36h含量最高。QL/12组诱导法氏囊组织产生的IFN mRNA(IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA)以及p53mRNA水平均显著高于B87组。病理组织学检查,QL/12组法氏囊淋巴滤泡呈不同程度的损伤,而B87组法氏囊组织未见明显的组织病变。qRT-PCR检测,QL/12组法氏囊组织中病毒含量48h达到峰值(8.4×106拷贝/mg),而B87组法氏囊组织中病毒含量72h达到峰值(6.6×104拷贝/mg)。本研究结果表明IBDV感染严重干扰了鸡体IFN和p53介导的抗病毒天然免疫反应。
- 欧阳伟王永山刘华洁杜希宁张海彬
- 关键词：干扰素P53天然免疫
- 传染性法氏囊病病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性分析
- 为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3蛋白的ELISA抗原反应性,将IBDV vp23基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3并转化E.coli D...
- 刘华洁王永山杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春
- 关键词：VP3蛋白
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒vp3基因在昆虫细胞中的表达及其ELISA抗原反应性的分析被引量：3
- 2015年
- 为分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组VP3蛋白的ELISA抗原反应性,将IBDVvp3基因插入杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-vp3并转化大肠杆菌DH10Bac感受态细菌,经抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBac-vp3。用pBac-vp3转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-vp3。对重组杆状病毒感染的Sf9细胞用Western-blot检测,在33ku处存在一条特异的蛋白条带;用间接免疫荧光试验检测时可见特异性荧光。以纯化的重组VP3蛋白为包被抗原建立了检测IBDV抗体的间接ELISA(VP3-ELISA),并与重组VP2蛋白包被抗原建立的VP2-ELISA和全病毒抗原ELISA(IDEXX-ELISA)进行了比较。对42份不同鸡血清中IBDV抗体的检测结果显示,VP3-ELISA的区分度低于VP2-ELISA和IDEXX-ELISA;VP3-ELISA阳性检出率低于VP2-ELISA和IDEXX-ELISA;VP3-ELISA与IDEXX-ELISA的相关系数低于VP2-ELISA与IDEXX-ELISA的相关系数。结果表明,在昆虫细胞中表达的重组VP3蛋白具有良好的特异性和抗原反应性,用它建立的ELISA的抗原反应性弱于用重组VP2蛋白和IBDV全病毒抗原建立的ELISA的抗原反应性。
- 刘华洁杜希宁梅永杰王晓丽欧阳伟毕振威潘群兴姚火春王永山
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP3蛋白ELISA
- 传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗
- 本发明涉及传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗，属于生物制药领域。运用基因工程技术，构建含传染性法氏囊病病毒强毒株VP2基因的重组杆状病毒，用昆虫细胞培养方法高效表达病毒样颗粒重组VP2蛋白；应用淋巴细胞杂...
- 王永山夏兴霞欧阳伟毕振威李月华刘华洁诸玉梅潘群兴王晓丽董晨红
- 文献传递
- 犬细小病毒JS12株VP2基因的分子特征及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2013年
- 从犬细小病毒病免疫预防失败病犬体内分离到1株犬细小病毒（CPV），命名为CPV—JSl2株。病毒可凝集猪的红细胞，对乙醚不敏感，pH3不能灭活病毒，pHl0可使病毒失去感染性，56。C作用60min病毒仍有活性，80℃作用30min可灭活病毒。序列分析时CPV—JSl2为CPV-2a亚型，VP2基因全长1755nt，编码584aa，与国外CPV毒株VP2基因的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别在98．9％～99．6％和98．39／6～99．7％之间，与国内和周边地区毒株VP2基因的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别在99．0％～99．7％和97．9％～99．7％之间；16个中国分离株处在不同组，CPV—JSl2株与韩国毒株DH426处在同一分支上，亲缘关系较近。对CPV—jsl2与免疫毒株VP2蛋白的立体结构分析比较，发现有9处氨基酸残基变异，其中6处位于衣壳蛋白表面，5处位于抗原表位区。将VP2基因在大肠杆菌中表达，重组VP2蛋白的分子质量为67．0ku，主要以包涵体的形式存在；Western—blot分析中重组VP2蛋白可与CPV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组VP2蛋白为抗原建立的CPV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。
- 李月华王永山毕振威夏兴霞欧阳伟刘华洁贾红姚火春
- 关键词：犬细小病毒VP2基因分子特征病毒变异原核表达间接ELISA
- 传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗
- 本发明涉及传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗，属于生物制药领域。运用基因工程技术，构建含传染性法氏囊病病毒强毒株VP2基因的重组杆状病毒，用昆虫细胞培养方法高效表达病毒样颗粒重组VP2蛋白；应用淋巴细胞杂...
- 王永山夏兴霞欧阳伟毕振威李月华刘华洁诸玉梅潘群兴王晓丽董晨红
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- 高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株
- 本发明涉及一种高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*，属于生物技术领域。将细胞内源性gga-miR-9*运用慢病毒病毒表达系统构建含有pri-gga-miR-9*的重组慢病毒V<Sub>L+m...
- 欧阳伟王永山潘群兴王晓丽夏兴霞刘华洁张海彬
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