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核基质结合区提高稳定整合的CAT报告基因在NIH3T3细胞中的表达被引量：8: 2005年; 通过PCR从人基因组扩增β珠蛋白核基质结合区(matrix attachment region,MAR)及β干扰素MAR,正向及反向克隆至pCAT3载体SV40启动子的上游,分别检测瞬时及稳定表达的情况下MAR在NIH3T3细胞内对CAT报告基因的影响情况。结果显示:瞬时表达情况下,反向及正向插入的MAR均不能提高CAT基因的表达;稳定整合的情况下,插入的β珠蛋白MAR可使CAT报告基因表达水平提高8倍,β干扰素MAR提高3倍,反向及正向插入的MAR没有明显的差别。这表明MAR能在一定程度上提高外源基因的表达水平,并且不同的MAR对外源基因表达的影响存在差异,MAR的插入方向对外源基因的表达水平没有明显的作用。; 王天云田芳张胜力侯卫红王建民薛乐勋; 关键词：核基质结合区 NIH3T3细胞基因表达基因沉默转基因

小鼠Ⅳ型胶原α2链非胶原结构域基因的克隆、表达及功能: 肿瘤的生长、浸润和转移依赖肿瘤新生血管的形成，选择肿瘤新生血管作为治疗攻击靶，切断肿瘤细胞获得营养以及生长因子的途经，限制肿瘤生长和防止转移，是降低肿瘤死亡率的良策，这种抗肿瘤血管生成治疗的“休眠疗法”已成为当今肿瘤治疗...; 侯卫红; 关键词：血管生成抑制剂内皮细胞肿瘤治疗药物

重组小鼠canstatin N端片段对鸡胚新生血管生成的抑制作用(英文)被引量：2: 2004年; 为了研究重组小鼠canstatinN端片段的体内抗血管生成活性 ,通过PCR扩增小鼠canstatinN端片段cDNA ,定向克隆于原核表达载体 pET30a (+)中 ,构建小鼠canstatinN端片段重组表达载体 pET mCanN ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹检测小鼠canstatinN端片段的表达 .结果表明 ,IPTG诱导原核表达载体 pET mCanN在大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)中高效表达 ,小鼠canstatinN端片段表达量约占菌体总蛋白量的 18% ,小鼠canstatinN端片段主要以包涵体形式存在 ,包涵体经过洗涤、裂解、Ni spincolumn亲合柱层析以及蛋白质复性等步骤纯化后 ,获得了纯度约为 92 %的重组小鼠canstatinN端片段 .鸡胚绒毛尿囊膜 (chickenembryochoriollantoicmembrane ,CAM)实验表明 ,原核表达的小鼠canstatinN端片段能有效地按剂量依赖的方式抑制鸡胚新生血管的形成 .; 侯卫红贾岩龙王天云柴玉荣袁保梅田芳王建民薛乐勋; 关键词：CANSTATIN 肿瘤血管生成抑制剂原核表达

杜氏盐藻中的核基质与核基质结合区(英文)被引量：1: 2005年; 真核生物细胞核DNA通过核基质结合区(Matrixattachmentregion,MAR)附着到核基质上。为了进一步探索染色体DNA与核基质之间的相互作用,从单细胞真核藻类杜氏盐藻中克隆出了MAR片段。首先构建了杜氏盐藻的随机MAR文库,通过体外结合实验分离出能与核基质结合的MAR序列。从构建的MAR文库中,筛选出3个能与核基质结合的MAR,其中两个片段与核基质具有较强的结合力,测序分析表明具有MAR片段的一些典型特征性基序。; 王天云侯卫红柴玉荣姬翔王建民薛乐勋; 关键词：核基质核基质结合区绿藻染色体

NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活被引量：16: 2006年; 目的核转录因子NF-kappaB(NF-κB)是一种重要的转录因子,参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究拟通过检测NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中是否存在,分析NF-κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用。方法采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中NF-κB亚单位p50和p65,阻遏物IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白表达。并采用EMSA法检测两株食管鳞癌细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果食管鳞癌细胞中存在激活的NF-κB信号通路,p50、p65、IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白在细胞质中均表达,并且p50/p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论本研究发现NF-κB信号通路在两种食管鳞癌细胞系被激活,提示激活的NF-κB信号通路可能在食管鳞癌发生中起重要作用。; 田芳许培荣侯卫红刘红涛陈奎生薛乐勋; 关键词：食管癌 NF-KB 信号传导通路

小鼠canstatin cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2004年; 目的 :从小鼠肝脏组织克隆canstatincDNA并在大肠杆菌 (E .coli)中表达 ,为进一步研究其抗肿瘤血管生成活性奠定基础。方法 :用Trizol试剂提取小鼠肝脏组织总RNA ,通过RT -PCR扩增小鼠canstatin(mcanstatin)的cDNA ,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatincDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中 ,在大肠杆菌E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达。结果 :小鼠canstatin的cDNA长度为 6 84bp ,编码 2 2 7个氨基酸 ,与已知的人canstatin的cDNA同源性为 89% ,氨基酸的同源性为 96 %。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+) /mcanstatin在大肠杆菌E .coliBL2 1中表达。结论 :首次成功克隆了小鼠canstatin的cDNA ,其原核表达载体pET30a(+) /mcanstatin在大肠杆菌E .coliBL2 1中高效表达 ,小鼠canstatin抗肿瘤血管生成活性有待进一步研究。; 侯卫红袁保梅王天云柴玉荣侯桂琴王建民薛乐勋; 关键词：CDNA克隆血管生成抑制剂原核表达

核基质结合区对转基因表达的影响及其作用机制被引量：18: 2004年; 核基质结合区(matrix attachment region,MAR)是一段在体外能与核基质结合的富含AT的DNA序列。研究发现MAR能使染色质形成环状结构;将其连到目的基因二侧构建载体并转至生物体中,发现它能增强基因转录表达水平及稳定性,在一定程度上降低转基因个体或细胞系之间转基因的表达水平的差异,这很可能是减低了基因沉默所致。现对MAR的序列特征、MAR对转基因表达的影响及对转基因效应的影响机制进行综述。; 王天云柴玉荣袁保梅侯卫红薛乐勋; 关键词：核基质结合区转基因表达基因表达基因沉默 DNA序列

食管鳞癌细胞中NF-κB与IκBα的mRNA、蛋白表达被引量：8: 2006年; 目的:核转录因子NF-kappaB(NF-κB)是一种重要的转录因子,参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究通过检测食管鳞癌细胞中NF-κB与IκBαmRNA、蛋白的表达及NF-κB的DNA结合活性,分析NF-κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其在食管鳞癌细胞的生存及转化中的作用。方法:采用West-ernblotting法检测两株食管鳞癌细胞胞质中NF-κB亚单位p50和p65、阻遏物IκBα及其磷酸化IκBα的蛋白表达,检测细胞核中p50和p65的蛋白表达并采用EMSA法检测其与DNA的结合活性。使用RT-PCR法检测p50、p65、IκBαmRNA的表达。结果:NF-κB的亚单位p50、p65、IκBα及磷酸化IκBα在食管鳞癌细胞质中均表达,p50、p65蛋白在细胞核中也表达并具有较高的DNA结合活性。RT-PCR结果表明,p50、p65、IκBα的mRNA在细胞中也存在过表达。结论:本研究发现NF-κB在两株食管鳞癌细胞系中被激活,基因的过表达及IκBα的磷酸化在维持NF-κB的活化中起着重要的作用。; 田芳侯卫红许培荣王建民陈华艳薛乐勋陈奎生; 关键词：食管鳞癌 IΚBΑ

重组人纤溶酶原Kringle1-5的制备及其生物学活性被引量：5: 2005年; 为了研究重组人纤溶酶原Kringle15(K15)的抗血管生成活性及其对内皮细胞增殖的影响,通过PCR扩增人纤溶酶原K15cDNA,定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pETK15,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE和Western杂交检测K15的表达。鸡胚尿囊膜(CAM)实验和MTT实验分别检测重组人纤溶酶原Kringle15对鸡胚新生血管生成和内皮细胞的抑制作用。结果表明,IPTG诱导原核表达载体pETK15在E.coliBL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白量的32%,K15主要以包涵体形式存在,包涵体经过洗涤、溶解、Nispin亲合柱层析纯化以及蛋白质复性等步骤后,获得了纯度约为96%的重组K15蛋白。CAM实验表明,原核表达的重组人K15能有效地按剂量依赖的方式抑制鸡胚新生血管的形成。MTT实验结果显示,重组人K15特异地抑制内皮细胞的增殖,而对非内皮细胞无抑制作用。; 侯卫红柴玉荣王天云王建民贾岩龙薛乐勋; 关键词：KRINGLE 纤溶酶原肿瘤血管生成抑制剂血管抑素原核表达

信号肽-canstatin真核表达载体的构建及其在Eca-109细胞中的分泌表达: 2006年; 目的:构建信号肽-canstatin真核表达载体并在人食管癌细胞Eca-109中分泌表达。方法:利用点突变技术将小鼠纤溶酶原信号肽(SP)序列插入到载体pEGFP-C1 EGFP编码序列起始密码的后面,构建pEGFP-C1-SP载体。以pMD18T-Can为模板,扩增小鼠canstatin基因,构建信号肽-canstatin分泌型真核表达载体pEGFP-C1-SP-Can。用脂质体转染法瞬时转染人食管癌细胞Eca-109。利用W estern b lotting检测小鼠canstatin融合蛋白在Eca-109细胞中的分泌表达。结果:DNA测序证明所构建的带信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP正确;酶切和DNA测序表明信号肽-canstatin分泌型真核表达载体pEGFP-C1-SP-Can构建正确,EGFP-cansta-tin融合蛋白在人食管癌细胞Eca-109中分泌表达。结论:获得了能分泌canstatin融合蛋白的真核表达载体,并分泌到人食管癌细胞Eca-109的细胞外,为小鼠canstatin的功能研究及应用于基因治疗提供了实验基础。; 侯卫红田芳王建民王志超陈华艳薛乐勋; 关键词：CANSTATIN 血管生成抑制剂 ECA-109细胞

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侯卫红

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