付文卓
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划北京市自然科学基金北京市教委科技发展计划更多>>
- 相关领域：生物学机械工程轻工技术与工程农业科学更多>>
- 小鼠Bax基因实时荧光定量PCR标准品质粒的构建被引量：2
- 2013年
- 为了能够快速、准确定量小鼠Bax基因的mRNA,构建了小鼠Bax基因的标准品质粒和标准曲线。根据GenBank中小鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RTPCR技术扩增该基因162bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定;将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立了Bax标准曲线及直线回归方程。结果表明产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数R2=0.999,表明线性关系好。本试验成功构建了目的基因Bax的标准品质粒和标准曲线。
- 潘博蔡青鲁强付文卓王继宏潘耀谦
- 关键词：BAX基因实时荧光定量PCR
- 微波消解技术在氨基酸分析中的应用研究被引量：6
- 2016年
- 目的:建立微波消解法应用于氨基酸分析的水解蛋白方法。方法:以米粉、面粉、燕麦粉、油条粉作为研究对象,分别比较了常规酸水解和微波消解法对4种样品前处理后氨基酸测定结果的影响。实验结果表明,微波消解水解蛋白的最佳条件是150℃,15 min;该微波消解法与常规酸水解法无显著性差异。4种样品采用微波消解法水解蛋白质,氨基酸测定结果RSD值均小于5%。结论:微波消解法的稳定性好、用时短,可替代现有的常规酸水解方法,便于快速检测批量样品。
- 吴英婷付文卓郑美青赵淑锐薛冰
- 关键词：稳定性
- 电感耦合等离子体发射光谱仪的安装及常见故障排除被引量：2
- 2015年
- 介绍了Agilent ICP-OES 710光谱仪场地安装条件,实验过程中点火失败,灵敏度下降等常见故障的分析及解决方法,总结了电感耦合等离子体发射光谱仪日常维护及注意事项。
- 吴英婷付文卓赵淑锐郑美青薛冰
- 关键词：电感耦合等离子体
- 适于基因芯片实验的小鼠脑组织RNA提取方法的改进被引量：1
- 2014年
- 目的比较Trizol与两种常用提取试剂盒对小鼠脑组织RNA提取质量的差异,并进行方法改进,以期找到适合于基因芯片的高质量组织RNA提取方法。方法以小鼠脑组织为材料,Trizol试剂、Ambion和天根组织RNA提取试剂盒提取总RNA,并对试剂盒提取方法进行改良,检测改良前后RNA浓度、纯度和完整性以及反转录成cRNA的浓度。结果与改良前相比,试剂盒经方法改良后提取的RNA产量均有提高;Ambion试剂盒提取的RNA纯度优于Trizol和天根试剂盒。结论Ambion试剂盒经方法改良后RNA提取质量优于其他方法,适合于基因芯片的实验要求。
- 隋雷鸣赵焕英巩云霞付文卓王俐勇
- 关键词：RNA提取基因芯片小鼠
- 用于大容量人源天然噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的构建一个应用于大容量Fab段天然噬菌体抗体库的表达载体。方法用定点突变技术将表面呈现噬菌粒载体pDF上的BssHⅡ酶切位点改为BglⅡ酶切位点,然后分别在抗体轻链和重链位置插入自杀基因SacB,构建含自杀基因的噬菌粒载体pDF-D-SacB;利用抗乙肝表面抗原抗体的基因为模板,PCR扩增重链和轻链基因片段。将PCR扩增的轻链基因和重链基因分别插入载体pDF-D-SacB内,利用电转化的方法将其转入Trans1-Blue大肠杆菌,构建2个初级质粒,再利用初级质粒超感染BSl365菌,使其轻链与重链发生重组,获得重组质粒,进一步获得抗乙肝表面抗原抗体的噬菌体。之后利用该噬菌体感染大肠杆菌Trans1-Blue进行扩增,得到大量抗乙肝表面抗原的噬菌体抗体。最后,通过酶联免疫吸附剂测定检测所获得的抗体。结果通过向pDF重轻链区域插入SacB基因,改造抗体基因克隆位点,构建了pDF-D-SacB载体;经检测,pDF-D-SacB可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,可以在分泌Cre蛋白酶的细菌胞内发生预期的Cre-Loxp介导的定点重组。结论所获得的含自杀基因的噬菌粒载体pDF-D-SacB适用于构建大容量噬菌体抗体库。
- 潘博付文卓王晓娜张宝中米志强安小平刘大斌李存姜焕焕陈斌童贻刚
- 关键词：噬菌体抗体库乙肝表面抗原
- 利用基因芯片对MxIRT1蛋白膜泡在铁胁迫条件下外排途径的研究
- 2015年
- 本文以研究缺铁条件下Mx IRT1蛋白膜泡在细胞中的外排途径机制为目的,采用基因芯片方法,发现在铁胁迫环境中,膜泡运输通路相关基因上调表达,推测Mx IRT1蛋白膜泡通过粗面内质网运送至高尔基体,然后通过内体再运送至质膜。该研究有助于进一步研究高等植物中Mx IRT1蛋白相关的铁转运机制。
- 王俐勇赵焕英付文卓隋雷鸣
- 关键词：蛋白结构预测
- 吡咯烷类二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂的最新研究进展被引量：1
- 2012年
- 2型糖尿病是最常见的慢性病之一。含有吡咯烷类二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂的药物对治疗2型糖尿病有一定的效果,所以近年对吡咯烷类二肽基肽酶-Ⅳ的抑制剂的研究备受关注。本文针对吡咯烷类二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂的作用机制、结构特点、构效关系、开发现状及研究进展等进行综述,为通过基于结构的药物设计来获得新型的吡咯烷类二肽基肽酶(dipeptidylpeptidase-Ⅳ,DPP-4)抑制剂提供依据。
- 付文卓吴英婷张进禄
- 关键词：DPP-4抑制剂吡咯烷构效关系
- 三重四级杆质谱仪的安装应用和维护被引量：6
- 2012年
- 质谱技术已经成为一种重要的现代分析鉴定技术,三重四级杆质谱,采用空间串联四级杆分析器,对选择离子分析具有较高灵敏度,应用广泛。建议专人负责质谱的安装,管理,应用及维护。维持稳定的电源,充足的液氮和氮气,及时清洗和维护,以保证质谱仪正常,稳定的工作。
- 吴英婷付文卓薛冰
- 关键词：质谱
- 实时荧光定量PCR构建BIM基因表达标准品质粒和标准曲线被引量：1
- 2015年
- 为了能够快速、准确定量BIM基因的mRNA,试验构建了小鼠BIM基因的标准品质粒和标准曲线,根据Gen Bank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增该基因122 bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定,然后将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立了BIM标准曲线及直线回归方程。结果表明:产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.998,线性关系好。说明成功构建了目的基因BIM的标准品质粒和标准曲线。
- 付文卓潘博吴英婷隋雷鸣王利勇武文琦邹林樾
- 关键词：BIM实时荧光定量PCR
