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鹅圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：4: 2013年; 为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。; 姜轲冉胡东健孙红霞于洪涛刘晓宁俞永裕余权法陈维虎余旭平; 关键词：间接ELISA

鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达被引量：8: 2008年; 根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap),用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带。应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。; 余旭平胡东建郑新添竺春刘晓宁于洪涛; 关键词：圆环病毒核衣壳蛋白基因核定位信号原核表达

鸽圆环病毒浙江株全基因组的克隆及序列分析被引量：12: 2009年; 鸽圆环病毒（Pigeon circovrius,PiCV）是圆环病毒科的一个成员,是一种免疫抑制性病原,鸽子感染圆环病毒后可以出现昏睡、嗜眠、厌食、体重减轻、呼吸窘迫等症状。本研究应用建立的PCR方法,检测了从浙江省5个鸽场采集的样品,结果在杭州某鸽场检测到阳性。进一步设计引物分段PCR扩增、克隆并测定了2株鸽圆环病毒的全基因组序列,分别命名为PiCV-zj1和PiCV-zj2,序列的GenBank登录号为DQ090945和DQ090944。基因组序列分析表明,PiCV-zj1及PiCV-zj2全长均为2039bp,具有圆环病毒共同的与病毒复制相关的茎环结构和Rep蛋白保守基序等特征,与已发表的国外11株鸽圆环病毒序列在全基因组核苷酸水平有86%~89.1%的同源性,在Rep和外壳蛋白的氨基酸水平分别有92.1%~94.7%和76.6%~81.4%的同源性。应用PHYLIP方法作进化树分析并应用bootstrap重复1000次进行检验,结果显示：10个欧美株组成一个大的分支,而浙江株和澳洲株各自独立分支。这是我国首次检测确认鸽圆环病毒的存在,并测定了2株PiCV病毒的全基因组序列。; 余旭平竺春郑新添母安雄于洪涛; 关键词：圆环病毒全基因组序列

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究被引量：4: 2010年; 通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。; 于洪涛胡东建余旭平; 关键词：酶联免疫吸附试验

一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法: 本发明公开了一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法，其采用原核表达的鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA检测的包被抗原，以HRP-羊抗鸡IgG酶标抗体作为二抗，进行鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法检测...; 余旭平胡东建赵秀玲郭婧于洪涛刘晓宁孙红霞俞永裕陈维虎; 文献传递

鹅圆环病毒实验性感染的临床、病理学观察和血清学检测: 鹅圆环病毒（Goose Circovirus, GoCV）是近年来发现的圆环病毒科的一个新成员,常潜伏感染,侵染淋巴细胞等增殖速度快的细胞,引起免疫力下降,导致动物对多种条件性致病菌的二次感染易感性增加,而出现临床发病。...; 于洪涛; 关键词：组织病理学观察; 文献传递

一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法: 本发明公开了一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法，其采用原核表达的鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA检测的包被抗原，以HRP-羊抗鸡IgG酶标抗体作为二抗，进行鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法检测...; 余旭平胡东建赵秀玲郭婧于洪涛刘晓宁孙红霞俞永裕陈维虎

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于洪涛