龙晓兰
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南华大学医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- S100A11慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达
- 2014年
- 目的构建S100A11基因慢病毒表达载体,建立Huh-7 S100A11稳定细胞株,并鉴定其表达。方法 RT-PCR扩增S100A11基因片段,与pWPT载体经MluⅠ和NotⅠ同时酶切后连接,构建慢病毒表达载体pWPTS100A11;将表达载体pWPT-GFP和pWPT-S100A11与慢病毒包装质粒pMD2.G和psPAX2共同感染293T细胞,获得携带GFP和S100A11基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞,获得Huh-7 S100A11和Huh-7GFP稳定细胞株;利用Real-Time PCR和Western Blotting实验方法检测感染后S100A11的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11;慢病毒感染Huh-7细胞株后,阳性对照Huh-7GFP经荧光镜检测传染率达95%;感染Huh-7细胞后S100A11的mRNA和蛋白表达量均增加。结论成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11,并建立了Huh-7 S100A11稳定细胞株,为进一步研究S100A11基因在肝癌中的生物学功能和机制奠定了基础。
- 刘德勇张庆丽龙晓兰彭和人谢海龙
- 关键词：S100A11HUH-7细胞慢病毒载体
- EGFRv Ⅲ促肝癌细胞迁移侵袭的分子机制研究
- 目的：探讨EGFRvⅢ促肝癌迁移侵袭的分子机制 方法：应用比较蛋白质组学方法对比分析Huh-7-EGFR与Huh-7-EGFRvⅢ两种细胞的差异表达蛋白，并通过Real-time quantitative PCR验证差异...
- 龙晓兰
- 关键词：S100A11肝细胞癌
- 文献传递
- EGFRvⅢ促肝癌迁移侵袭的分子机制研究
- 目的：探讨EGFRvⅢ促肝癌迁移侵袭的分子机制 方法：应用比较蛋白质组学方法对比分析Huh-7-EGFR与Huh-7-EGFRvⅢ两种细胞的差异表达蛋白，并通过Real-time quantitative PCR验证差...
- 龙晓兰
- 关键词：肝细胞癌S100A11分子机制
- 文献传递
- Cofilin-1慢病毒载体的构建及其在Huh-7中的过表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建Cofilin-1过表达的Huh-7细胞株。方法应用RT-PCR克隆出Cofilin-1的完整编码序列,将其亚克隆到慢病毒载体pWPT中,构建慢病毒载体表达质粒pWPT-Cofilin-1;将慢病毒表达质粒pWPT-Cofi-lin-1或pWPT-GFP与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞,获得携带Cofilin-1完整编码序列的慢病毒和携带GFP基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞;通过Real-TimePCR和Western blot检测Huh-7细胞中的Cofilin-1的过表达情况。结果测序结果显示成功构建重组慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1;慢病毒有效感染Huh-7细胞,依据GFP绿色荧光可测定感染有效率超过95%;Cofilin-1在Huh-7细胞中的mRNA量和蛋白水平都成功的过表达。结论本实验的完成,为进一步研究Cofilin-1基因在肝癌中的生物功能和作用机制奠定了基础。
- 龙晓兰周敏石必枝谢海龙李宗海
- 关键词：慢病毒载体HUH-7细胞
- RNA干扰Cofilin-1基因沉默对人肝癌细胞株Huh-7侵袭和转移能力的影响被引量：4
- 2015年
- 目的 Cofilin-1参与多种肿瘤的发病过程,但该基因在肝细胞肝癌中表达和作用不明确。文中拟观察Cofilin-1基因在人肝癌组织中的表达情况,探讨下调Cofilin-1表达对肝癌细胞株Huh-7侵袭和转移能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测Cofilin-1基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况;体外合成Cofilin-1序列特异性小干扰RNA,应用脂质体转染Huh-7肝癌细胞株,实验分Cofilin-1-siRNA组(Cofilin-1-siRNA转染Huh-7细胞)、非特异性-RNA组(Ctrl-siRNA组,非特异性siRNA转染Huh-7细胞)、未转染组(未转染Huh-7细胞),每组设2个平行孔。Western blot鉴定Cofilin-1蛋白水平变化。细胞迁移及体外侵袭实验观察转染后细胞的侵袭能力的影响。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中Cofilin-1基因表达明显增强[(0.698±0.156)vs(3.523±0.412),P<0.05];Cofilin-1-siRNA组Cofilin-1的蛋白量为0.558±0.033,明显低于Ctrl-siRNA组(0.933±0.015)和未转染组(0.961±0.020),差异有统计学意义(P<0.05);体外细胞迁移和侵袭实验结果均显示:与Ctrl-siRNA组迁移及侵袭细胞数量[(79.00±1.33)个]和未转染组[(74.50±1.35)个]比较,Cofilin-1-siRNA组[(58.50±1.78)个]明显降低(P<0.05);Cofilin-1-siRNA组穿膜Huh-7细胞数[(36.50±0.83)个]明显低于Ctrl-siRNA组[(60.20±1.60)个]与未转染组[(51.50±1.14)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Cofilin-1在肝癌组织中高表达,下调Cofilin-1基因的表达能抑制肝癌细胞株Hu H-7的侵袭和转移能力。
- 曹建平龙晓兰龚勇李晓杰谢海龙
- 关键词：肝细胞肝癌基因
