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沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能: 2011年; 目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。; 陈俊霞高娟朱军姜蓉; 关键词：核糖核酸酶抑制因子膀胱癌细胞肿瘤生长

整合素连接激酶基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力的影响及其机制被引量：5: 2011年; 目的构建整合素连接激酶(Integrin linked kinase,ILK)基因siRNA干扰质粒,探讨ILK基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力及糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,GSK3)、β-环连蛋白(β-catenin)表达的影响。方法构建针对人ILK基因的2个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下转染膀胱癌BIU-87细胞,通过RT-PCR及Western blot检测ILK基因mRNA和蛋白的表达水平,筛选出1个干扰效果较强的质粒用于后续试验,Western blot检测细胞GSK3和β-catenin蛋白的表达,Am-blue法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期的分布。结果经酶切和测序证明重组干扰质粒构建正确;稳定转染pGenesil-1 siRNA1和pGenesil-1 siRNA2质粒的BIU-87细胞ILK基因mRNA和蛋白表达水平较BIU-87细胞组(未转染组)分别下降了69%、52%和70%、55%,选择pGenesil-1 siRNA1为最有效干扰序列;BIU-87siRNA1组GSK3的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别升高了41.87%和30.12%,β-catenin的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别降低了38.67%和48.05%;BIU-87 siRNA1组细胞增殖活力明显下降;BIU-87 siRNA1组G0-G1期细胞比例明显增加,S期减少。结论已成功构建ILK基因siRNA表达质粒,其可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,机制可能为ILK基因通过介导GSK3、β-catenin信号分子促进膀胱癌BIU-87细胞的增殖。; 高娟朱军潘湘阳李红彦陈俊霞; 关键词：整合素连接激酶 RNA干扰膀胱肿瘤

siRNA沉默整合素连接激酶对人膀胱癌细胞凋亡的影响被引量：2: 2012年; 目的探讨应用整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)特异性siRNA沉默ILK基因的表达对人膀胱癌细胞凋亡的影响。方法将构建好的针对ILK基因的1个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下稳定转染人膀胱癌BIU-87细胞,并将实验分为BIU-87 si ILK、BIU-87 vector及BIU-87细胞3组,运用TUNEL凋亡检测试剂盒和流式细胞术检测BIU-87细胞的凋亡,进一步运用Western blot检测siRNA ILK对凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2的影响。结果 TUNEL检测结果显示,BIU-87 si ILK组出现大量凋亡细胞,而BIU-87细胞组和BIU-87 vector组仅有少量凋亡细胞出现。流式细胞仪检测结果显示,BIU-87 si ILK组细胞大约有(75.70±2.00)%的凋亡细胞,而BIU-87 vector组和BIU-87细胞组仅有(0.88±0.10)%和(1.66±0.90)%的凋亡细胞,Western blot结果显示,在BIU-87 si ILK组中,Bcl-2的表达明显降低(P<0.05),而Bax和Caspase-3的表达明显升高(P<0.01)。结论 siRNA ILK可能通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡的发生。; 高娟康炜陈俊霞朱军潘湘阳; 关键词：整合素连接激酶膀胱癌凋亡

整合素连接激酶及相关信号转导通路分子在膀胱癌中的表达及意义: <正>目的探讨整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)及相关信号转导通路分子AKT及β-catenin在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法测定47例膀胱癌及25例癌旁正常...; 高娟康炜; 文献传递

重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。; 褚颖豪欧阳溪何晓燕陈俊霞高娟朱军; 关键词：核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒膀胱肿瘤

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响被引量：6: 2011年; 目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。; 朱军高娟李红彦潘湘阳陈俊霞; 关键词：膀胱肿瘤整合素连接激酶

RNAi沉默整合素连接激酶基因的表达对膀胱癌BIU-87细胞生长及凋亡的影响: 目的构建针对ILK基因的特异性siRNA表达质粒,转染人膀胱癌BIU-87细胞,并检测其对人膀胱癌BIU-87细胞生长及凋亡的影响。方法构建针对ILK基因的特异性siRNA表达质粒siRNA ILK及对照质粒...; 高娟; 关键词：整合素连接激酶膀胱癌细胞凋亡; 文献传递

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