陈文明
- 作品数：12 被引量：38H指数：5
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金民族医药科学技术研究专项课题贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小核糖核酸-21对过氧化氢诱导C-kit＋心脏干细胞凋亡的作用及机制
- 2017年
- 目的探讨微小核糖核酸－21（miRNA－21）对过氧化氢（H2O2）诱导的C－kit＋心脏干细胞凋亡的作用及其机制。方法采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养C－kit＋心脏干细胞，然后将C－kit＋心脏干细胞分为对照组（将miRNA－21模拟物阴性对照转染至C－kit＋心脏干细胞48 h）、模拟物组（将miRNA－21模拟物转染至C－kit＋心脏干细胞48 h）、对照＋ H2O2组（将miRNA－21模拟物阴性对照转染至C－kit＋心脏干细胞48 h后，以100 μmol H2O2处理2 h）和模拟物＋ H2O2组 （将miRNA－21模拟物转染至C－kit＋心脏干细胞48 h后，以100 μmol H2O2处理2 h）。采用RT－PCR检测各组miRNA－21的mRNA表达水平；采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况；采用Western blot检测各组促凋亡相关蛋白（Caspase－3和Bax）和抗凋亡蛋白（Bcl－2）的蛋白表达水平。结果（1）模拟物组的miRNA－21 mRNA表达水平高于对照组（P〈0.05）; 对照＋H2O2组的miRNA－21 mRNA表达水平低于对照组（P〈0.05）；模拟物＋ H2O2 组的miRNA－21表达水平低于模拟物组，而高于对照＋H2O2组（P均〈0.05）。（2）对照组与模拟物组的细胞早期凋亡率差异无统计学意义[（4.57±3.45）%比（5.13±3.21）%，P〉0.05]；对照＋H2O2组细胞早期凋亡率高于对照组[（79.07±5.75）%比（4.57±3.45）%，P〈0.05]; 模拟物＋H2O2组细胞早期凋亡率高于模拟物组[（30.27±1.36）%比（5.13±3.21）%，P〈0.05]，而低于对照＋H2O2组[（30.27±1.36）%比（79.07±5.75）%，P〈0.05]。（3）对照组与模拟物组的Caspase－3、Bax和Bcl－2的蛋白表达水平差异均无统计学意义（P均〉0.05）；对照＋H2O2组Caspase－3和Bax的蛋白表达水平均高于对照组（P均〈0.05），两组之间的Bcl－2蛋白表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）；模拟物＋ H2O2 组的Caspase－3和Bax蛋白表达水平均低于对照＋H2O2组（P均〈0.05），而Bcl�
- 赵然尊王艳邓文文石蓓龙仙萍王正龙陈文明
- 关键词：干细胞细胞凋亡氧化性应激
- 中介素抗过氧化氢诱导的BMSCs凋亡作用及机制探讨被引量：1
- 2016年
- 目的探讨中介素（IMD）对过氧化氢（H2O2）诱导的骨髓源间充质干细胞（BMSCs）凋亡的影响及可能机制。方法应用骨髓细胞贴壁培养法获得大鼠BMSCs；将10μmol／L的IMD预处理BMSCs30min后，换用含100μmol／LH2O2的完全培养基处理2h，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western印迹和免疫荧光检测IMD对凋亡相关蛋白的表达情况；并检测IMD对ERK1／2磷酸化水平的影响；进一步在IMD干预前用特异性抑通路制剂阻断ERK1／2信号途径，观察其对IMD作用的影响。结果IMD可使BMSCs内ERK1／2通路磷酸化水平升高（P〈0．01）。与对照组和IMD两组相比，在H20：组中加入H202后细胞凋亡率则增加至55．9％（P〈0．01）；但在IMD＋H：O：组中细胞凋亡率为15．7％，与对照组和IMD组相比细胞凋亡率增加，但较H2O2组显著降低（P〈0．01）。IMD预处理可明显减少由H2O3介导的BMSCs凋亡，且促凋亡蛋白Caspase-3及Bax的表达减少，抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增高（P〈0．01），ERKl／2通路特异性抑制剂U0126预处理后该作用消失。结论IMD可激活BMSCs内ERKl／2信号通路，调节凋亡相关蛋白的表达，减少由H202诱导的BMSCs凋亡。激活ERKl／2通路参与了其抗凋亡作用的调控。
- 王冬梅李珏陈文明龙仙萍石蓓赵然尊
- 关键词：中介素骨髓间充质干细胞凋亡相关蛋白
- 心外膜脂肪体积及血清基质金属蛋白酶-2与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系被引量：5
- 2018年
- 目的探讨心外膜脂肪体积(EATV)及血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与冠状动脉粥样硬化斑块稳定的相关性。方法选择冠心病126例(冠心病组),根据疾病类型分为稳定型心绞痛(SA)46例、不稳定型心绞痛(UA)49例和急性心肌梗死(AMI)31例;按照斑块稳定类型分为稳定型46例和不稳定型80例;根据斑块成分分为软斑块40例、混合斑块39例和钙化斑块47例。另外选择同期性别、年龄匹配无器质性心脏病的室上性心动过速患者72例作为对照组。检测各类患者EATV和血清MMP-2水平,分析冠心病患者EATV和MMP-2的相关性。结果与对照组比较,冠心病组EATV增大,血清MMP-2水平升高(P均<0.05)。与稳定型斑块患者相比,不稳定型斑块患者EATV增大,血清MMP-2水平升高(P均<0.05)。SA、UA、AMI患者EATV逐渐增大,血清MMP-2水平逐渐升高,软斑块,混合斑块、钙化斑块患者逐渐EATV增大,血清MMP-2水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,冠心病患者EATV大小与血清MMP-2水平呈正相关(r=0.752,P=0.019)。结论冠心病患者EATV增大,血清MMP-2水平升高,且EATV增大及血清MMP-2水平升高程度与冠心病的类型、斑块稳定性及斑块成分密切相关。
- 郝星龙仙萍王正龙刘西平石蓓陈文明
- 关键词：冠状动脉疾病基质金属蛋白酶-2冠状动脉粥样硬化斑块
- 过表达微小RNA-21对c-Kit^+心脏干细胞增殖、迁移及分化的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit^+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit^+心脏干细胞,以Lipofectamine~2000为载体将miR-21模拟物(mimics)和其阴性对照(mimics negative control,MNC)分别转染至c-Kit^+心脏干细胞。实验分为正常对照(control)组(正常培养的心脏干细胞)、MNC组(转染MNC 48 h的细胞)和mimics组(转染miR-21 mimics 48 h的细胞)。qPCR检测各组细胞miR-21的表达情况,以CCK-8法和EdU法检测细胞增殖状态,qPCR及免疫荧光检测细胞分化情况,划痕实验观察细胞迁移能力。结果:成功获取c-Kit^+心脏干细胞,经流式细胞术鉴定其高表达c-Kit(90.8%),低表达CD45(0.6%)及CD34(0.5%);与control组相比,mimics组中miR-21表达量显著增高(P<0.05),MNC组中miR-21表达量与control组无明显差异。CCK-8和EdU实验结果发现与control组比较,mimics组中细胞增殖能力明显增加(P<0.05),MNC组中细胞增殖能力无明显变化;免疫荧光及qPCR结果表明3组心肌细胞谱系标志物Nkx2.5、CD31和α-平滑肌肌动蛋白水平无明显差异;细胞划痕实验结果发现,3组间细胞迁移能力无明显不同。结论:过表达miR-21可显著促进c-Kit^+心脏干细胞的增殖能力,但对细胞迁移及分化能力无明显影响。
- 王艳石蓓邓文文王冬梅盛瑾陈文明
- 关键词：微小RNA-21心脏干细胞细胞增殖细胞迁移
- 人参皂苷Rg3对大鼠颈动脉球囊损伤后NF-κBp65及相关炎性因子表达的影响被引量：7
- 2018年
- 目的研究人参皂苷Rg3对大鼠颈动脉球囊损伤后核因子(NF)-κBp65及相关炎症因子表达的影响。方法成年健康雄性SD大鼠40只,将其随机分成4组:假手术组,模型组,人参皂苷Rg3 5 mg·kg^(-1),人参皂苷Rg3 10 mg·kg^(-1)。用2. 0mm×12 mm球囊建立大鼠颈动脉损伤模型,次日灌胃给药,连续14 d;利用苏木精-伊红(HE)染色观察损伤血管组织形态学的改变;利用Western blot法检测损伤血管组织中NF-κBp65蛋白的表达水平;利用酶联免疫吸附法(ELISA)和Real-Time PCR法检测损伤血管组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果模型组大鼠血管新生内膜较假手术组明显增厚(P <0. 01),损伤血管NF-κBp65的表达明显增加(P <0. 01),IL-1β、IL-6及TNF-α的表达水平明显上升(P <0. 01);与模型组相比,人参皂苷Rg3(5、10 mg·kg^(-1))损伤血管内膜增生明显减轻(P <0. 01),NF-κBp65的表达明显减少(P <0. 01),IL-1β、IL-6及TNF-α的表达水平也明显下降(P <0. 01)。结论人参皂苷Rg3能抑制大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及炎性反应,可能与其抑制转录因子NF-κB的表达水平有关。
- 陈文明蹇明辉赵永超石蓓
- 关键词：人参皂苷RG3颈动脉球囊损伤核因子ΚBP65
- Toll样受体4激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖被引量：2
- 2018年
- 目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。
- 陈文明龙仙萍赵然尊石蓓
- 关键词：骨髓间充质干细胞TOLL样受体4增殖WNT/Β-CATENIN信号通路
- 人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响被引量：8
- 2018年
- 目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显著增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。
- 陈文明赵永超刘围围龙禹哲张赟石蓓
- 关键词：人参皂苷RG3内膜增生平滑肌细胞细胞凋亡颈动脉损伤
- hRAMP1基因修饰BMSCs对心脏的保护作用及其机制
- 2018年
- 目的探讨人受体活性修饰蛋白(hRAMP)1基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)对心功能的影响及其机制。方法分离和培养兔BMSCs,流式检测细胞表面标记鉴定,建立兔心肌梗死再灌注模型,随机分为3组:Ad-EGFP-hRAMP1-BMSCs(hRAMP1-BMSCs组),Ad-EGFP-BMSCs(BMSCs组)和对照组,检测血管腔面CD31表达情况及血管内皮生长因子(VEGF)和核因子(NF)-κB表达水平,并比较超声心动图指标。结果骨髓细胞分离24 h后开始贴壁,后呈鱼群状、漩涡状排列生长,经传代后细胞逐渐呈长梭形,呈现成纤维细胞样外观。CD29阳性率95.79%,CD45阳性率12.49%和CD90阳性率98.58%。BMSCs移植后损伤侧血管腔面可见被EGFP标记呈绿色荧光的BMSCs,而对侧(未损伤血管)未检测到EGFP荧光信号。经TRITC标记的CD31在BMSCs表达处发出红色荧光,阳性转染组出现CD31和EGFP表达。细胞移植后28 d,BMSCs组及hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于对照组,NF-κB水平显著低于对照组(均P<0.01);hRAMP1-BMSCs组VEGF表达显著高于BMSCs组,NF-κB水平显著低于BMSCs组(均P<0.01)。hRAMP1-BMSCs组LVDd和LVDs均明显降低,LVFS和LVEF均明显增加(均P<0.01)。结论 hRAMP1修饰BMSCs具有延缓及改善左室重构作用;其机制是通过hRAMP1修饰BMSCs可分化为血管内皮细胞,参与血管生成。
- 许官学王正龙赵然尊龙仙萍陈文明石蓓
- 关键词：腺病毒载体血管内皮细胞
- CGRP修饰的间充质干细胞及其CGRP受体对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响被引量：8
- 2013年
- 目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）修饰的骨髓间充质干细胞（MSCs）与血管平滑肌细胞（VSMCs）共培养后，MSCs分泌的CGRP对VSMCs增殖及表型转化的影响及其具体的作用机制。方法将携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs（MSCsCgRP＋/＋），单纯慢病毒及PBS转染MSCs作为对照，应用ELISA法检测CGRP蛋白表达；携带RAMP1及shRAMP1的慢病毒载体转染VSMCs，实验分为Lenti—GFP—hRAMPl转染组（RAMP1＋/＋组）、Lenti-GFP—shRAMP1转染组（RAMP1。一组）、Lenti—GFP转染组（GFP＋/＋组）和PBS转染对照组，应用Western印迹技术检测各组VSMCs中RAMPl蛋白表达。然后将MSCsCgRP＋/＋与过表达RAMP1及沉默RAMPl的VSMCs共培养，实验分为MSCs＋VSMCs组、MSCsCgRP＋/＋＋VSMCs组、MSCsCgRP＋/＋＋VSMCsCgRP＋/＋组、MSCsCgRP＋/＋＋VSMCsCgRP＋/＋4组；应用流式细胞术检测细胞增殖周期，MTr法检测细胞增殖率，Western印迹技术检测VSMCs收缩蛋白（d．SM．actin）和合成型骨桥蛋白（OPN）的表达。结果过表达CGRP的MSCs其培养基中CGRP的表达量较对照组明显增加（19．530±0．498比3．133±0．160and3．120±0．001，P〈0．05）；过表达RAMP1及shRAMP1的慢病毒载体转染VSMCs后，RAMP1＋/＋组的RAMP1表达最多，而RAMP1在RAMP1-/-组表达最少。MSCs与VSMCs共培养后72h，与MSCscgrp＋/＋＋VSMCs组比较，MSCscgrp＋/＋＋VSMCsramp1＋/＋组VSMCs增殖率明显增强（0．270±0．263与0．413±0．070，P〈0．05），停留在静止期的细胞数相对增加[（93．51±0．38）％与（84．48±0．31）％，P〈0．05]，α—SM—actin表达显著增加（102946±3847与51759±635，P〈0．05），OPN表达明显降低（26026±2595与44201±2811，P〈0．05）；然而沉默VSMCs中的RAMP1后，MSCsCGRP＋/＋与VSMCs共培养后72h，CGRP抑制VSMCs的增殖能力较过表达RAMPl的VSMCs明显减弱（0．601±0．04与0．270±0．263，P〈0．05），静止期的细胞数量减少[�
- 石蓓崔璨龙仙萍陈文明赵然尊刘志江敖竹君
- 关键词：降钙素基因相关肽间质干细胞血管平滑肌细胞
- CGRP对大鼠急性心肌梗死后心脏干细胞募集及心功能的影响
- 2017年
- 目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)对心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)募集及心功能的影响。方法建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为假手术组、CGRP注射组(CGRP组)和等体积磷酸盐缓冲液(PBS)注射组(对照组),每组30只。模型建立后于不同时间点获取标本,采用免疫荧光染色法观察CSCs募集情况,超声心动图评估大鼠心肌梗死后心功能,苏木素-伊红(H-E)染色、Masson染色评估心脏病理学改变,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积。结果免疫荧光染色显示,与假手术组相比,对照组和CGRP组CSC细胞数均在第3天增加,7 d达高峰,14 d明显减少,其中,CGRP组较对照组增加更明显(均P<0.05)。术后28 d大鼠超声心动图检测大鼠心功能提示CGRP组较对照组心功能各项指标明显改善(均P<0.05),形态学分析显示术后28 d CGRP组心肌纤维化程度及梗死面积明显小于对照组(P<0.05)。结论CGRP可促进AMI后CSC在梗死区域募集,于第7天达高峰,并能改善大鼠心功能。
- 曹桎铭刘志江王艳陈文明石蓓
- 关键词：降钙素基因相关肽心脏干细胞心肌梗死心功能
