陈建华
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家教育部博士点基金农业部畜禽病毒学重点开放实验室基金更多>>
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- 牛朊蛋白单氨基酸变异体的原核表达
- 2005年
- 应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒,即pGEX-BoPrP(93～241)、pGEX-BoPrP(93～241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93～241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93～241)(Q234R).经转化E.coli BL21(DE3),均表达了预期大小约为42.4 ku的融合蛋白.在优化的诱导表达条件下,各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%～45%的融合蛋白.经免疫印迹检查,所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11反应.表明,单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位.
- 陈建华吴润刘湘涛陈豪泰
- 关键词：氨基酸变异体朊蛋白原核表达质粒表达载体构建蛋白量
- 牛朊蛋白3个单氨基酸变异体的原核表达及其包涵体蛋白的变性与复性
- 目的本研究拟以牛朊蛋白正常基因和其含单个氨基酸突变的3个变异体基因克隆为实验材料,构建牛朊蛋白基因重组表达质粒pGEX-BoPrP(93~241)、pGEX-BoPrP(93~241)(S154N)、pGEX-BoPrP...
- 陈建华
- 关键词：原核细胞表达蛋白结构包涵体蛋白
- 文献传递
- 黄牛朊蛋白原核表达产物的复性与活性分析被引量：1
- 2010年
- 目的复性黄牛朊蛋白原核表达产物,分析复性蛋白的活性,以获得有活性的牛重组朊蛋白。方法构建并诱导表达黄牛朊蛋白基因重组菌,复性其包涵体裂解物,对GST-BoPrP(93～241)(Q234R)复性产物进行GSTrap FF柱层析纯化,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹观察其提纯和复性效果。结果重组菌可表达分子质量约为42.4 ku的目的蛋白,包涵体裂解物经过透析复性后,可获得较高纯度的复性目的蛋白。各复性产物和纯化的GST-BoPrP(93～241)(Q234R)蛋白经免疫印迹鉴定,发现仅分子质量约为42.4 ku的条带与单抗4C11结合。结论获得高纯度复性黄牛朊蛋白原核表达蛋白,具有良好的免疫反应活性。
- 呼志斌吴润刘湘涛陈建华赵春林
- 关键词：原核表达复性活性分析
