陈丹清
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金更多>>
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- 鸡毒支原体licA基因的真核表达
- 2010年
- 鸡毒支原体licA基因编码脂寡糖/脂多糖(lipooligosaccharide/lipopolysaccharide,LOS/LPS)合酶或胆碱激酶,催化合成磷酸胆碱。该产物是支原体表面脂质的主要组成部分,与其致病性密切相关。鸡毒支原体的licA基因位于hmw3-licA-mgc2-gapA-crmA-crmB-crmC粘附素基因簇内部。为深入研究licA基因及其产物的生物学活性,本研究对鸡毒支原体licA基因进行了真核表达,通过间接免疫荧光试验检测,结果发现LicA主要定位于杆状病毒和DF1细胞浆中,并不对sf9和DF1真核细胞具有明显的毒性。这为下一步在体外建立LicA生物学活性检测的模型奠定了基础。
- 陈丹清陈鸿军沈欣悦于圣青仇旭升丁铲
- 关键词：鸡毒支原体真核表达
- 鸡毒支原体通用型mini-Tn4001转座子的构建被引量：2
- 2009年
- 为了实现以鸡毒支原体(MG)为载体携带和表达其他呼吸道病原保护性抗原,达到多种病原体共同保护的效果,本研究拟构建一套mini-Tn4001转座子(pMT4).该微型转座子具备以下特征:含四环素抗性基因;两臂是转座酶识别的Inner和Outer插入重复区;转座酶位于插入区之外,在整合起始点处促进转座;多克隆位点便于插入外源基因.这一微型转座子载体的成功构建为MG非必需区缺失工作奠定了基础,对下一步MG功能基因的靶向缺失技术以及外源蛋白的表达建立了有效的基因操作工具.
- 陈鸿军赵春梅沈欣悦陈丹清于圣青丁铲
- 关键词：鸡毒支原体转座子
- 鸡毒支原体烯醇化酶的可溶性表达及检测被引量：2
- 2010年
- 烯醇化酶参与支原体糖酵解、细胞黏附及免疫调节等多种生命活动,对其开展功能研究有助于了解鸡毒支原体黏附及感染机制。本研究通过重叠PCR克隆获得鸡毒支原体烯醇化酶,经原核表达获得可溶性融合蛋白rMGEno,将纯化产物免疫BALB/c小鼠后制备获得特异性多抗。通过Western blot和ELISA检测发现,烯醇化酶在鸡毒支原体不同强弱毒株中高度保守,表达产量高,在鸡毒支原体参试各毒株的细胞膜中均有分布。这一表达产物的成功制备为深入研究鸡毒支原体烯醇化酶的生物学功能奠定了基础。
- 沈欣悦陈鸿军陈丹清于圣青丁铲
- 关键词：鸡毒支原体烯醇化酶可溶性表达
- 鸡毒支原体LicA的原核表达及膜定位鉴定
- 2010年
- 利用overlap-PCR技术扩增获得鸡毒霉形体licA基因,将该基因经酶切克隆入原核表达载体pET32a(+)中,利用IPTG诱导进行原核表达,SDS-PAGE电泳结果显示,LicA呈现包涵体表达,利用His-Band Resin对包涵体进行纯化。将纯化产物作为免疫原腹腔注射BALB/c小鼠,制备获得LicA多克隆抗体。通过对鸡毒霉形体不同强弱毒株膜蛋白提取物进行Western-blot检测,发现在所有参试毒株中,LicA表达量恒定,并呈现膜定位特性。这一研究结果为进一步研究LicA生物学活性奠定了基础。
- 陈丹清陈鸿军沈欣悦于圣青仇旭升丁铲
- 关键词：鸡毒支原体原核表达
- 鸡毒支原体licA基因的真核表达
- 鸡毒支原体licA基因编码脂寡糖/脂多糖（lipooligosaccharide/lipopolysaccharide, LOS/LPS）合酶或胆碱激酶，催化合成磷酸胆碱。该产物是支原体表面脂质的主要组成部分，与其致病性...
- 陈丹清陈鸿军沈欣悦于圣青仇旭升丁铲
- 关键词：鸡毒支原体真核表达活性检测
- 鸡毒支原体转座筛选方法的建立及两种膜相关酶的特性研究
- 鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)属于柔膜体纲、支原体目、支原体科,主要引起鸡以及其它禽类的慢性呼吸道疾病,特别是在应激状态或存在呼吸道病原体的情况下。鸡毒支原体感染和寄生最重要的步骤是...
- 陈丹清
- 关键词：鸡毒支原体磷酸丙糖异构酶
- 鸡毒支原体烯醇化酶单克隆抗体研制及黏附阻断被引量：4
- 2012年
- 通过对鸡毒支原体烯醇化酶的克隆和原核表达,利用表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体,以超声波裂解的MG全菌作为筛选抗原,结果获得了6株特异性单抗,分别命名为:1A4、2D7、2E4、2F4、3B4和3D8。经间接ELISA、免疫荧光试验及Western blot检测发现:1A4具有荧光效价和高滴度的ELISA效价,但无免疫印迹效价;而其他5株单抗,免疫印迹呈阳性,但无表面染色的活细胞免疫荧光。在所有6株单抗中,仅1A4单抗有MG细胞黏附抑制作用,可导致MG的黏附率降低34.40%,而且1A4与其他5种单抗混合后,则黏附率可下降57.69%。这些抗体的制备将为烯醇化酶生物学活性研究奠定基础。
- 陈鸿军沈欣悦陈丹清于圣青丁铲
- 关键词：鸡毒支原体烯醇化酶单克隆抗体
