郭珍
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长
- 2014年
- 目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。
- 张绍城郭珍张宏鹏苟冶然龙小滨汪德强
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗菌药物
- 重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性。方法:利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达;对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性。结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36 000;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104IU/mg。结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当。为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。
- 陈检杨可郭珍张阳丽张绍城杨伟赵沙沙何泉汪德强周建中
- 关键词：重组葡激酶融合蛋白表达纯化体外活性
- 稀有密码子对人源Id2基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:通过对人Id2基因的稀有密码子进行突变并构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌(escherichia coli,E.coli)中表达Id2蛋白,分析稀有密码子对Id2基因表达的影响。方法:PCR扩增突变Id2基因序列,然后转入E.coli BL21中进行表达,利用镍离子亲和层析、离子交换层析及分子筛纯化。结果:正确构建了Id2基因的基因突变表达质粒,基因突变表达的Id2蛋白在E.coli BL21中为可溶性上清表达,成功纯化了目的蛋白,且分子筛结果显示其在溶液中呈现二聚体状态。结论:稀有密码子对Id2蛋白在E.coli BL21中大量可溶性上清表达有重要影响。
- 杨伟周华赵沙沙金丽郭珍张绍城陈检汪德强
- 关键词：ID2突变纯化
- 酿酒酵母菌重要蛋白质HMO2的初步晶体学研究
- 背景：高速泳动族蛋白(HMGB)是一类广泛存在于真核生物的非组蛋白家族，有着高度保守的三维结构，在转录调控、DNA修复、基因重组、细胞分化和胞外信号转导等过程中扮演着重要的角色。作为HMGB蛋白质超家族的成员之一，HMO...
- 郭珍
- 关键词：酿酒酵母菌晶体学
