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郭然: 作品数：19 被引量：26H指数：3; 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>

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hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位: 2017年; 目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位。方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至c DNA。进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的c DNA全长片段,并将其亚克隆于p EGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达。进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内p EGFP-h Sesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源h Sesn3蛋白。结果:h Sesn3基因c DNA全长片段克隆于真核表达载体p EGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序。Western blot检测到了GFP-h Sesn3融合蛋白表达,分子量约为79 k Da。在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了h Sesn3蛋白。结论:成功构建了h Sesn3基因c DNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了h Sesn3蛋白。; 沈涛郭洲洋李妍巴根陈之光郭然杨蕾付勤; 关键词：WESTERN BLOT 绿色荧光蛋白质粒构建

3~* Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位: 2017年; 目的:构建3~* Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因c DNA全长,并将其克隆至含有3~* Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达。同时利用共聚焦激光显微镜观察3~* Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白。结果:hPlk4基因c DNA全长成功构建到3~* Flag真核表达载体中,Western blot检测到含有3~* Flag的人源Plk4融合蛋白表达,进一步在U2OS骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和细胞核周,并成功纯化hPlk4蛋白。结论:成功构建了3~* Flag-hPlk4真核表达质粒,同时鉴定了融合蛋白的表达,并成功纯化人源Plk4蛋白。3~* Flag-hPlk4蛋白主要定位在细胞质和细胞核周。; 沈涛李妍杨蕾郭洲洋巴根郭然陈之光付勤; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀骨肉瘤

Apelin对小鼠MC3T3-E1成骨样细胞RANKL/OPG表达的影响被引量：1: 2018年; 目的探讨脂肪因子Apelin对小鼠MC3T3-E1成骨样细胞RANKL/OPG表达的影响,为Apelin参与调节骨代谢提供理论依据。方法用real time PCR检测RANKL/OPG m RNA的表达,用Western blot方法检测RANKL/OPG蛋白的表达。结果不同浓度Apelin(0.4n M,1n M,10n M)干预MC3T3-E1细胞48h后,与对照组相比可明显促进OPG m RNA及蛋白的表达(P<0.01),同时可明显抑制RANKL m RNA及蛋白的表达(P<0.01),其中当实验组Apelin浓度为1n M时,效果最明显。结论 Apelin可作用于MC3T3-E1成骨样细胞,从而影响RANKL/OPG的表达,为骨质疏松的防治提供新靶点。; 张一奇刘楠任鸿飞郭然; 关键词：APELIN 核因子ΚB受体活化因子配体骨保护素

医用内窥镜自动锁紧支架: 本发明涉及一种医用内窥镜自动锁紧支架，所述医用内窥镜自动锁紧支架包括有返松锁紧机构，返松锁紧机构由保持架、丝杆轴、马达和丝母压套等组成，中间支杆II的端部连接保持架，中间支杆I和中间支杆II之间贯穿有一根主轴，保持架另一...; 郭然付勤单立文田野; 文献传递

人Plk3基因真核表达载体的构建及蛋白表达和定位被引量：1: 2017年; 目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测其表达。最后利用激光共聚焦扫描显微镜观察pEGFP-hPlk3在COS-7细胞内的定位。结果hPlk3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1941bp,并测序成功。Westernblot检测到了GFP-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为98kDa。pEGFP-hPlk3在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论成功构建了hPlk3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk3蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。; 沈涛李妍杨蕾郭然陈之光郭洲洋巴根付勤; 关键词：WESTERN BLOT 绿色荧光蛋白质粒构建 COS-7细胞

GST-hSesn2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达: 2017年; 目的构建GST-h Sesn 2融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hSesn2基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hSesn2,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-h Sesn2,并用Western blot方法证实了GST-h Sesn2融合蛋白在原核细胞大肠埃希菌中阳性表达。结论 GST-h Sesn2原核表达载体成功构建为进一步纯化Sesn2及研究其结构与功能提供了前提基础。; 沈涛杨蕾李妍巴根郭然郭洲洋陈之光付勤; 关键词：原核表达融合蛋白

骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位: 2017年; 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位。方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*FlaghPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白。结果:hPlk3基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74k Da。3*Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白。3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周。; 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀

骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位被引量：1: 2017年; 目的构建真核表达载体GFP-hPlk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白。结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da。GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白。结论成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达。; 沈涛巴根李妍郭然陈之光杨蕾郭洲洋付勤

碱性磷酸酶和骨钙蛋白对于甲状旁腺素不同变化反应的实验研究: 田野郭然薛太阳刘士嘉付勤

骨肉瘤细胞中Sestrin2的表达和定位被引量：1: 2017年; 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-h Sesn2并同时检测其在骨肉瘤细胞中的表达及定位。方法:以GST-h Sesn2作为模板,利用聚合酶链反应扩增目的基因h Sesn2的c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒酶切并测序分析鉴定,转染至MG-63骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白后进行Western blot检测重组蛋白表达。此外利用荧光共聚焦激光扫描显微镜检测3*Flag-h Sesn2在MG-63细胞系中的定位,并最终利用免疫沉淀方法纯化人源Sesn2蛋白。结果:h Sesn2基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,利用Western blot检测3*Flag-h Sesn2融合蛋白表达,分子量约为55k Da。3*Flag-h Sesn2在MG-63骨肉瘤细胞系中主要定位于细胞质及核周,进一步成功纯化了h Sesn2蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Sesn2真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-h Sesn2融合蛋白的表达,最终成功纯化h Sesn2蛋白。其中3*Flag-h Sesn2蛋白主要定位在细胞质和核周。; 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀

郭然

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