葛洪
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 源于T.fusca纤维素酶E4的结构域重组及其功能研究
- 为了研究纤维素的利用及实现纤维素乙醇的工业化生产，目前最为普遍接受的研究思路包括两方面：筛选具有良好纤维素降解能力的纤维素酶，包括微生物筛选、代谢工程改造、蛋白质工程改造等;筛选具有良好外源蛋白表达能力的工程菌，实现工业...
- 葛洪
- 关键词：纤维素酶毕赤酵母重组PCR
- 文献传递
- 基于Discovery Studio平台纤维素酶E4同源建模被引量：4
- 2012年
- 利用Discovery Studio平台以同源建模的方法构建E4的完整三维结构模型,并对其进行结构优化和评估,Ramachandram图谱检测和Verify-3D评估显示模拟出的模型结构合理,整体的相容性较为可信。本结果为今后的纤维素酶E4的深入研究提供了理论依据。
- 李军曹以诚葛洪
- 关键词：同源建模DISCOVERYSTUDIO
- 特异性表达siRNA的新型乙肝核酸药物的研究
- 2012年
- 旨在研究靶向于HBsAg的肝脏特异性siRNA,实现核酸药物高靶向性、高特异性基因治疗乙肝。通过重组PCR的方法构建靶向于HBsAg的肝脏特异性表达的siRNA的核酸药物。将目标载体转染HepG2 2.2.15细胞,用ELISA的方法测定转染细胞培养液内HBsAg的含量。PCR鉴定和测序确定重组PAAV-MCS载体PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box构建成功。重组质粒对HepG2 2.2.15细胞分泌的HBsAg所产生的抑制作用自转染后5 d达到高峰,抑制率达到(30±0.28)%(P<0.01),siRNA特异性表达单元能显著降低HepG2 2.2.15细胞HBV DNA的拷贝数。成功构建的肝脏特异性、siRNA高表达的核酸药物可以有效地抑制HBV基因的表达和复制,为乙肝的进一步治疗研究做了关键性工作。
- 杨磊曹以诚高强葛洪
- 关键词：RNAI重组PCRELISA
- 内切纤维素酶E4参与纤维小体组装的研究
- 2013年
- 褐色高温单胞菌编码内切纤维素酶E4的催化域(CAD)DNA片段与丙酮丁醇梭菌编码对接蛋白的基因片段通过装配PCR方法,在大肠杆菌BL21(DE3)重组表达形成融合蛋白E4SD,然后在钙离子介导下与在大肠杆菌BL21(DE3)表达的来源于丙酮丁醇梭菌的含有纤维素结合单元和2个粘连蛋白的脚手架蛋白CipA互相作用,在体外组装成微纤维小体.结果显示,E4SD通过C-端的对接蛋白成功地与脚手架蛋白上的粘连蛋白互相作用,结合到脚手架蛋白上,且E4SD在微纤维小体中的羧甲基纤维素和微晶纤维素酶活性分别提高到游离状态下的130%与300%,提示非纤维小体酶系的纤维素酶,特别是远缘物种的具有优良酶特性的纤维素酶可以通过将其与脚手架蛋白同样种属的对接蛋白添加至末端,从而参与到丙酮丁醇梭菌的纤维小体中来,并与其他纤维素酶在脚手架蛋白的参与下协调作用,高效降解纤维素.
- 区镜深葛洪曹以诚
- 关键词：纤维小体粘连蛋白
- 重组纤维素酶E4酶活性改变的初步研究
- 2013年
- 纤维素酶E4是一种噬温的丝状土壤放线菌Thermomonospora fusca分泌的一种特殊纤维素酶,对细菌微结晶纤维素(BMCC)有较高的活性,可与T.fusca中典型的外切酶和内切酶协同作用。初步研究显示,其不同底物水解活性与结合域(CBD)有很大关系,因此对E4的CBD进行删除,构建4组重组质粒,转入酵母GS115表达系统表达,得到对应重组蛋白。结果显示,CBD的删除对其温度、pH稳定性都有影响,且不同底物的降解活力有明显变化,对于纤维素酶降解机理复杂性有初步研究。
- 葛洪曹以诚区镜深李军
- 关键词：纤维素酶结合域重组质粒
