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抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区V_L与GFP融合蛋白的表达及生物活性测定被引量：3: 2004年; 目的 :在大肠杆菌中表达抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区基因 (VL)与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白 ,并测定其生物学活性。方法 :应用基因工程技术 ,将EGFP基因克隆到载体pTO T7中构建原核表达载体。然后将MA18/7的VL基因按照读码框插入到无终止密码子TAA的EGFP基因的 5′末端 ,构建融合蛋白表达载体。通过ELISA和相对荧光强度测定在大肠杆菌中表达的融合蛋白的活性。结果 :构建了EGFP MA18/7 VL 表达载体。SDS PAGE表明 ,融合蛋白主要以包涵体的形式存在。荧光测定显示 ,融合蛋白保持了GFP的荧光性质。ELISA的结果表明 ,融合蛋白与重链可变区 (VH)片段结合成的Fv ,能特异性地识别HBVpre S1抗原。结论 :成功地获得具有良好生物学活性的融合蛋白 ,可用于进一步的研究。; 管宝全张军罗文新顾颖朱子恒夏宁邵; 关键词：轻链可变区 GFP 融合蛋白

抗HBV pre-S1抗体轻链可变区融合绿色荧光蛋白表达载体的构建与表达: 子抗体Fv是抗体中具有完整抗原结合活性的最小功能片段。已经通过分别表达纯化抗乙型肝炎病毒HBVpre-S1单克隆抗体MA18/7的轻链和重链可变区片段，两种片段体外混合后相互结合获得具有良好抗原结合活性的Fv片段。本研究...; 管宝全张军罗文新顾颖朱子恒夏宁邵; 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白免疫检测

乙型肝炎病毒pre-S1区中和抗体可变区的原核表达被引量：1: 2004年; 鼠源单克隆抗体MA18 7是特异识别乙型肝炎病毒 (HBV)pre S1抗原的中和抗体。为表达MA18 7的小分子抗体 ,将MA18 7的重链可变区基因 (VH)和轻链可变区 (VL)基因分别克隆到原核表达载体pTO T7进行原核表达。结果VH 和VL 均以包涵体的形式高效表达 ,包涵体经过变性、复性及金属离子亲和纯化后获得纯度 >90 %的重组抗体片段。生物传感器、竞争ELISA和间接ELISA测定均显示 ,VH 或VL 均不能结合相应抗原 ,但二者体外混合后可迅速非共价结合形成具有良好活性的可变区抗体Fv,表明MA18; 管宝全张军罗文新陈敏吴婷程通夏宁邵; 关键词：乙型肝炎病毒中和抗体可变区

抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达被引量：1: 2004年; 通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3 1/Hygro和pcDNA3 1(+)质粒中,共转染中华仓鼠卵巢癌细胞(CHO)细胞。RT-PCR结果表明,转染的CHO细胞转录了嵌合重链及轻链基因,间接ELISA及Westernblot结果表明:翻译出的两种多肽在细胞内正确组装成嵌合抗体分子,并可分泌至细胞外,表达的嵌合抗体保留了原鼠单抗的抗原结合特异性及对8H3结合抗原的增强作用。8C11嵌合抗体的成功表达可降低鼠源性,为探讨戊肝抗体治疗的可能性奠定了基础。; 罗文新李利峰许辰煜程通管宝全张军夏宁邵; 关键词：嵌合抗体戊肝重链可变区 CHO细胞轻链

橙色荧光蛋白——绿色荧光蛋白GFPxm的改造被引量：9: 2003年; 最近报道了从大型多管水母中分离出新的gfp基因。经大肠杆菌表达并纯化出的绿色荧光蛋白 (GFPxm)具有 4 76nm的激发峰和 4 96nm的发射峰 ,但是只能在低温下成熟的缺点限制了它的应用。这里进一步报道GFPxm的 12种突变型。在大肠杆菌中的表达结果表明 ,有 7种突变型在 37℃条件下产生高的荧光强度。在 2 5、32和 37℃条件下表达 6h ,GFPxm16、GFPxm18和GFPxm19的相对荧光强度均高于增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) ,而GFPxm16和GFPxm16 3在 4 2℃高温表达时仍能保持高的荧光强度。这 7种突变型中的 4种在哺乳动物细胞中已获得良好表达。此外 ,有 6种突变型的荧光光谱红移 ,目前所达到的最长激发峰为 5 14nm、最长发射峰为 5 2 5nm。另外有 3种突变型具有包括紫外在内的两个激发峰 ,1种突变型只有单一的紫外激发峰。首次报道具有橙色荧光的突变型OFPxm ,它的激发峰为 5 0 9nm、发射峰为 5 2 3nm。 5 2 3nm属于黄绿色 ,但肉眼看到的蛋白为橙色。OFPxm在高温下可得到高水平表达且很好地成熟 ,但是因为低的量子产率而荧光强度相对较低。; 罗文新陈敏程通管宝全李少伟李少菁张军夏宁邵; 关键词：绿色荧光蛋白基因标记突变型荧光光谱荧光强度

含分泌信号的原核表达载体的组建及应用: OmpT是大肠杆菌的四种主要外膜蛋白酶之一.其蛋白前体分子量为42kD;在跨膜时其氨基端的19个氨基酸的信号肽被切除,成熟的40kD外膜蛋白酶被分泌细胞周质腔.我们利用其信号序列来构建分泌型原核表达载体,以期获得可分泌的...; 杨海杰管宝全罗文新李少伟鲜阳凌张军夏宁邵; 文献传递

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